RP-HPLC 法测定头孢噻肟钠的含量

陈向明，代现平，孙居锋（滨州医学院药学院，烟台市 264003）

头孢噻肟钠为第3代半合成头孢类抗生素，对革兰菌的抗菌活性高于第1、2代[1，2]。目前，测定头孢噻肟钠含量的方法有荧光光谱法[3]、高效液相色谱法[4～6]。但荧光光谱法需要对样品进行衍生，受到的影响因素比较多。我国药典采用是高效液相色谱法[7]，所用的流动相pH为8.4左右，对色谱柱的损害比较大。笔者在优化头孢噻肟钠生产工艺的过程中首先采用药典中的方法测定产品的含量，结果组分保留时间长、峰形差。本试验通过改变色谱条件，建立了新的测定头孢噻肟钠含量的方法，且分析时间短、灵敏度高。

1 仪器与试药

Waters 600-2489型高效液相色谱仪（美国Waters公司，配备四元梯度泵、在线真空脱气机、紫外-可见检测器、手动进样器）；Ultimate-C18柱（美国月旭公司）；EL20数显酸度计（梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ-50E型超声波清洗（昆山市超声仪器有限公司）；EL204电子天平（北京赛多利斯系统有限公司）。

头孢噻肟钠对照品（中国药品生物制品检定所）；甲醇为色谱纯（天津福晨化学试剂厂）；其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Ultimate-C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；柱温：25 ℃；流速：1.0 mL·min－1；进样量：20 μL；紫外检测波长：254 nm；流动相：1.0 g·L－1的三乙胺水溶液（用磷酸调pH值至6.2）-甲醇（68∶32）。色谱见图1。

2.2 对照品溶液的制备

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatograms

精密称取头孢噻肟钠对照品0.044 8 g，用纯净水溶解并定容至100 mL容量瓶中，精密量取5 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。进样前贮藏于4℃冰箱中。

2.3 供试品溶液的制备

精密称取头孢噻肟钠供试品约0.04 g，用纯净水溶解并定容至100 mL容量瓶中，精密量取5 mL，置于100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。进样前贮藏于4℃冰箱中。

2.4 线性范围及检测限

取头孢噻肟钠对照品溶液用水依次2倍稀释，稀释后的溶液各进样20µL，按照“2.1”项下色谱条件分析，直到稀释后的样品色谱峰高约为基线噪声的3倍为止。以浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线并进行线性回归，得回归方程为Y＝2×108X+1.8×103（r＝0.999 9）。结果线性范围为2.7×10－6～0.020 7 g·L－1。以3 倍信噪比计算出头孢噻肟的检测限为9×10－9g·L－1。

2.5 精密度试验

取浓度为2.24×10－2、2.24×10－3、2.24×10－4g·L－1的头孢噻肟钠对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件分别重复测定6次，测定保留时间和峰面积，计算精密度。结果，头孢噻肟钠的保留时间的RSD依次为0.20%、0.19%、0.17%，峰面积的RSD依次为1.21%、1.07%、0.98%。

2.6 稳定性试验

将“2.3”项中试品溶液用水稀释10倍和100倍，将3种溶液按照“2.1”项下色谱条件每天测定1次，连续测定6 d。结果，峰面积的RSD分别为2.93%、2.61%、2.72%，表明头孢噻肟钠在试验条件下稳定，且仪器的精密度良好。

2.7 回收率试验

精密称取头孢噻肟钠对照品9份，用水溶解并稀释，制备相当于样品溶液浓度的80%、100%、120%的溶液，每一浓度各3份，按照“2.1”项下色谱条件分别进样20 μL，以外标法计算其含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝3）Tab 1 Results of recovery test（n＝3）

2.8 样品含量的测定

笔者在优化头孢噻肟钠合成工艺的过程中，得到了多批样品，按照“2.1”项下色谱条件进样，计算含量。结果，编号为1～8的样品含量分别为91.40%、80.10%、94.98%、91.68%、95.29%、98.29%、92.95%、95.23%。

3 讨论

药典方法所用流动相为磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钾60 mg与磷酸氢二钠1.2 g，加水溶解并稀释成1 000 mL）-甲醇（89∶11），笔者则采用Ultimate-C18柱（250 mm×4.6 mm，5µm）分离头孢噻肟钠标准溶液。流动相的pH值约为8.4，对色谱柱固定相的损害比较大，且峰形差。峰形差的原因可能是因为头孢噻肟钠分子中含有多个N原子，为改善峰形，向流动相水相中加入1.0 g·L－1三乙胺，并用磷酸调节pH为弱酸性，发现流动相pH在5.0～6.5之间，分离效果都比较理想。笔者采用pH6.2的溶液作为流动相，取得了良好的分离结果，且具有分析时间短、分离度好、色谱峰对称性好、灵敏度高等优点，不仅可以测定原料药中头孢噻肟钠的含量，还可用于测定制剂中和生物样品中的含量。

[1]陈新谦，金有豫主编.新编药物学[M].第13版.北京：人民卫生出版社，1995：67.

[2]徐春丽，潘秀芳，郑志昌，等.替硝唑葡萄糖注射液与注射用头孢噻肟钠的配伍稳定性[J].中国药房，2010，21（4）：236.

[3]张远馥，王金中，李永强，等.荧光法测定头孢噻肟钠的含量[J].分析科学学报，2008，24（1）：82.

[4]明金兰，朱会琴.HPLC法测定头孢噻肟钠的含量[J].药物分析杂志，2000，20（4）：271.

[5]孙淑芬，董伟林.高效液相色谱法测定血液中头孢噻肟钠的浓度[J].中国药学杂志，2001，36（10）：697.

[6]朱建平，高燕霞，梁立革，等.关于头孢噻肟钠测定方法的商榷[J].中国药事，2005，19（1）：40.

[7]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：195.