HPLC测定乳酸卡德沙星中卡德沙星的含量

马 杰，高 媛，赵玉新，李国峰

（哈药集团制药总厂，黑龙江哈尔滨 150046）

细菌感染性疾病是我国多年来的常见病、多发病，一直严重威胁广大人民的健康及生命安全。在治疗上，目前以抗感染疗法为首选，其中青霉素类、头孢类和合成抗菌药等占有绝大部分比例。历来，此类优秀药物的生产、销售、临床应用在世界排名上均居榜首。20世纪80年代以来，氟喹诺酮类合成抗菌感染药得到了迅速的发展，它们的临床应用越来越广泛，其中环丙沙星、氧氟沙星、斯帕沙星、左氟沙星为氟喹诺酮类药物的优秀代表，逐渐成为临床上治疗多种感染性疾病的一线药物。

卡德沙星（又称CS-940）由日本Ube公司创制，由日本三共公司开发，对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌、克雷伯肺炎杆菌引起的小鼠全身感染，优于环丙沙星、斯帕沙星、左氟沙星。对小鼠克雷伯肺炎杆菌引起的肺炎有效性最强，优于所有受试药物，开发该药物将可为抗感染领域增添一个新的优秀品种，以满足临床用药的需要。为有效地控制乳酸卡德沙星的质量，笔者建立了HPLC法测定卡德沙星含量的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20A型高效液相色谱仪，包括SPD-20A型紫外检测器、CTO-20A型柱温箱和色谱工作站（日本岛津公司）。

1.2 试药

卡德沙星对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130456-200502W，含量：82.0%）；乳酸卡德沙星（哈药集团制药总厂，批号：20070101、20070201、20070301）；乙腈、甲醇均为色谱纯，柠檬酸为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：C18（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：0.01 mol/L柠檬酸溶液-乙腈-甲醇（84∶16∶10）（用三乙胺调节 pH 值至5.0）；检测波长：327 nm；柱温：40℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液制备 取卡德沙星对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每毫升中含0.5 mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液制备 取乳酸卡德沙星适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每毫升中含0.5 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液。

2.3 专属性试验

取供试品溶液，按“2.1”项下的条件测定，记录色谱图，见图1。卡德沙星的理论板数为5911，不低于3000，与相邻杂质峰的分离度大于2.0，测定无干扰。

2.4 线性关系考察

取卡德沙星对照品50.02 mg，置10 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取 0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 ml于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，分别取10 μl注入液相色谱仪，按“2.1”项下的条件测定，记录色谱图。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得回归方程：A=27058.5+18805059C（r=0.9999）。结果表明，卡德沙星浓度在0.30～0.70 mg/ml范围内线性相关性较好。见图1。

图1 线性关系曲线

2.5 中间精密度试验

分别于不同日期、由不同分析人员、用不同设备测定精密度，在含量测定范围内，将相当于100%浓度水平的供试品溶液，进行6次测定，记录色谱图，计算卡德沙星含量的相对标准偏差，2次测定结果的RSD分别为0.15%、0.13%，2次结果平均RSD为0.15%，说明该法中间精密度较好。

2.6 稳定性试验

按“2.1”项下的条件测定，用流动相配制供试品溶液，在室温下放置，于 0、2、4、6、8 h 进样检查，记录色谱图，峰面积的RSD为0.52%。结果表明供试品溶液在8 h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取供试品溶液，按“2.1”项下条件测定，连续进样6次，记录色谱图，其峰面积测量值的RSD为0.08%，说明该法重复性较好。

2.8 回收率试验

取已知含量的样品，在含量测定范围内，设计80%、100%和120%三种浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，进行测定，记录色谱图，结果表明，平均回收率为99.7%，RSD为0.49%，说明该法回收率较好。

2.9 样品含量测定

取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释成每毫升含0.5 mg的溶液，摇匀，精密量取样品溶液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取卡德沙星对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中卡德沙星的含量。含量测定结果见表1。

表1 样品含量测定结果

3 讨论

3.1 吸收波长的选择

采用二极管阵列检测器，对供试品溶液在200～400 nm范围内扫描。其最大吸收波长为291 nm，由于其吸收较大，其称样量相对较小或进行二次稀释，容易产生误差。因此，将检测波长由最大吸收波长（291 nm）修订为次大吸收波长（327 nm），以简化操作。

3.2 缓冲液pH值的选择

由于乳酸卡德沙星的酸度在4.0～5.5范围内，所使用的色谱条件要尽量与之相符，经过对pH为4.0、4.5、5.0、5.5的4个条件进行验证。结果显示，以pH=5.0条件最为合适。

[1]Biedenbach DJ,Sutton LD,Jones RN.Antimicrobial activity of CS2940,a new trifluorinated quinolone[J].Antimicrob Agents Chemother,1995,39(10):2325-2330.

[2]Masuda N,Hideyuki F,Takahashi Y,et al.In vitro and in vivo antibacterial activities of CS2940,a new 62fluoro282 difluoromethoxy quinolone[J].Antimicrob Agents Chemother,1996,40(5):1201-1207.

[3]Fuhr U,Anders EM,Mahr G,et al.Inhibitory potency of quinolone antibacterial agents against cytochrome P4501A2 activity in vivo and in vitro[J].Antimicrob Agents Chemother,1992,36(6):942-948.

[4]Reginald FF.Probing the world of cytochrome P450 enzymes[J].Mol Interv,2004,4(3):157-162.

[5]Siwaporn C,Anne NN,Steven L,et al.Combined phenotypic assessment of cytochrome P4501A2,2C9,2C19,2D6,and 3A,N-acetyltransferase-2,and xanthineoxidase activities with the"Cooperstown 5+1 cocktail"[J].Clin Pharmacol Ther,2003,74(5):437-447.

[6]白楠,王睿,方翼,等.反相高效液相色谱法测定卡德沙星在健康人体的血药浓度[J].中国临床药理学杂志,2009,25(4):54-56.

[7]Thomas GS,Ralf S,Robert JE,et al.Enoxacin is an inducer of CYP1A2 in rat liver[J].Biochem Pharmacol,1995,50(9):1517-1520.

[8]Theresa CP, Marc RP, Philip AW, et al. Role of CYP1A2 and CYP2E1 in the pentoxifylline ciprofloxacin drug interaction [J]. Biochem Pharmacol,2004,68(2):395-402.

[9]Yoshihito N,Kohji H,Naoyuki M,et al.Influence of gatifloxacin,a new quinolone antibacterial,on pharmacokinetics of theophylline[J].J Infect Chemother,1999,5(3):156-162.