益肾疏肝汤对MS小鼠糖脂代谢影响的实验研究

唐新征，张炜宁，张会霞

（广东省深圳市福田区中医院，广东深圳 518034）

代谢综合征又称胰岛素抵抗代谢综合征（insulin resistance metabolic syndrome，IRMs），1988 年 Reaven 提出时称为 X 综合征，后亦称Reaven综合征。1999世界卫生组织正式认同这一命名并予以全面论述，目前一般认为MS是以中心性肥胖、胰岛素抵抗（IR）、高血压、高三酰甘油血症、低高密度脂蛋白胆固醇、糖耐量下降或2型糖尿病为主要临床表现的一种综合征，其主要病因有肥胖、遗传及环境因素和精神因素等，该病的病理生理基础是胰岛素抵抗。近年来MS的发病率逐年升高，其危害性大，涉及多个学科领域，引起国内外学者的广泛关注[1-3]。本研究在建立MS动物模型（小鼠）基础上，研究运用益肾疏肝中药干预对MS小鼠脂代谢、脂肪酸代谢、糖代谢的影响。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 采用6～8周龄的健康SPF级雄性C57BL/6J小鼠50只，体重（20±2）g，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，分笼喂养，每笼5只，自由摄食及饮水，自然昼夜采光，室温23～26℃，湿度50%左右，定期换垫料，消毒笼具。一般观察记录各组动物的精神状态、体重、饮水量、尿量和毛发光亮度等情况。适应性饲养1周后开始正式实验。

1.1.2 主要试剂和药物 胰岛素试剂盒（北京北方生物技术研究所）；TG试剂盒（上海申索佑福医学诊断用品有限公司）；TC试剂盒（浙江夸克生物科技有限公司）；HDL试剂盒（上海沪峰化工有限公司）。益肾中药（金匮肾气丸，同仁堂制药公司）；疏肝中药（逍遥丸，九芝堂制药公司）；益肾疏肝汤（熟地30 g、黄精 30 g、柴胡 10 g、天花粉 30 g、玄参 10 g、苍术 10 g、肉桂 5 g、泽泻 10 g、当归 10 g、槟榔 10 g、厚朴 10 g，冷水浸泡20 min，武火煮沸后，改用文火维持15 min，药汁倒入烧杯中，边加热边用玻璃棒搅拌，浓缩至100 ml后封瓶放冰箱备用）。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组给药 将50只C57BL/6J小鼠随机分成对照组、模型组、益肾组、疏肝组、益肾疏肝组，每组10只，造模成功后，模型组给予等体积生理盐水灌胃4周，益肾组给予益肾中药（金匮肾气丸）以等体积生理盐水溶解后灌胃4周，疏肝组给予疏肝中药（逍遥丸）以等体积生理盐水溶解后灌胃4周，益肾疏肝组予益肾疏肝汤灌胃4周。用药剂量按人常规剂量并以体表面积-剂量换算法计算给药剂量灌胃，即1 g小鼠每天的给药量为：70 kg人一天的用药量×0.0026/20[4]。于实验第4周末空腹状态（禁食12 h）下，测定各组小鼠空腹血糖（FBG）、空腹胰岛素（FINS）。计算各自胰岛素敏感指数ISI=ln[1/（FBG×FINS）][5]，根据体重增加、空腹血糖升高、胰岛素敏感指数降低，确定MS造模成功[6]。

1.2.2 动物处理 于实验第4周末空腹状态下，双手心夹住小鼠尾巴来回滚搓，使小鼠尾静脉充分充血后，用剪刀剪去尾尖0.5 cm，尾静脉血即可流出，使用快速全血葡萄糖测试仪测定FBG；静注水合氯醛（4 ml/kg体重）麻醉动物，采用特制的硬玻璃吸管，管长15 cm，前端拉成毛细管，取血时，用手从背部捉住动物，同时用示指和拇指握住颈部，利用对颈部所加的轻压力，使头部静脉淤血，将消毒的吸管用抗凝剂湿润其内壁，从内侧眼角将吸管转向前，并轻压刺入，深4～5 mm达到后眼眶静脉丛，血液自然进入吸管内，取0.2 ml血液，除去加于颈部的压力，同时抽出吸管，3000 r/min离心5 min，抽取血清，严格按放免试剂盒说明书操作，测定INS。

于实验第8周末空腹状态下，测定FBG（方法同上）；静注水合氯醛（4 ml/kg体重）麻醉动物，将小鼠固定，胸部备皮，常规消毒，在胸骨左侧3～4肋间摸到心尖搏动，右手持注射器，在胸骨左缘1 cm处将针头插入肋间隙，在左手触摸到心跳的配合下，垂直刺入心脏，当持针手感到心脏搏动时，再稍刺入即到达心腔，最大量抽血，测定血清三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）。右上腹部备皮，于肋缘中点处纵向剪开腹部皮肤及肌肉层，充分显露腹内脏器，取出肝脏，放入4%甲醛溶液中固定。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 小鼠行为和体态变化 观察记录各组小鼠的精神状态、体态、体重和毛发光亮度等情况。

1.3.2 测定TC、TG、HDL及FBG 禁食12 h后，尾部取血，使用快速全血葡萄糖测试仪测定FBG；静注水合氯醛（4 ml/kg体重）麻醉动物，体外心脏取血，送湖南中医药大学生化试验室，3000 r/min离心5 min，抽取血清，严格按照试剂盒说明书测定 TC、TG、HDL。

1.4 统计学分析

应用SPSS 16.0软件进行数据资料的统计学处理，数据以均数±标准差（）表示，实验数据中的资料均先经方差齐性检验，在方差齐的情况下，多组比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，方差不齐时采用非参数统计方法和秩和检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大鼠行为和体态变化

造模前各组小鼠均活动灵活，反应敏捷，体态匀称，饮食、饮水、尿量正常，皮毛光亮柔顺。造模后模型组、益肾组、疏肝组、益肾疏肝组小鼠较对照组体态肥胖，精神较差，活动少，反应稍迟钝，饮食、饮水、尿量偏多，皮毛光亮柔顺度稍差，个别出现体毛枯黄、脱毛现象。益肾组、疏肝组、益肾疏肝组小鼠在给药后精神逐渐好转，活动渐渐增多，饮食、饮水、尿量逐渐接近正常，皮毛逐渐光亮。

2.2 造模评估

模型组、益肾组、疏肝组、益肾疏肝组小鼠造模后体重及体重增值均显著高于对照组（P＜0.01），说明高糖、高脂饮食可导致小鼠体重明显增加，是引起肥胖的主要原因。见表1。

表1 造模前后小鼠体重变化比较（，g）Tab.1 Comparison of body weight changes in mice before and after modeling(,g)

表1 造模前后小鼠体重变化比较（，g）Tab.1 Comparison of body weight changes in mice before and after modeling(,g)

与对照组比较，*P＜0.01Compared with control group,*P＜0.01

组别 n造模前 造模后 体重增值对照组1019.88±0.4121.48±1.031.59±1.09模型组1019.83±0.1123.79±1.23*3.96±1.19*益肾组1019.84±0.1123.68±1.50*3.84±1.45*疏肝组1019.85±0.1223.80±1.40*3.95±1.32*益肾疏肝组1019.82±0.1523.83±1.15*4.01±1.18*

模型组、益肾组、疏肝组、益肾疏肝组FBG、INS均显著高于对照组（P＜0.01），ISI均显著低于对照组（P＜0.01），说明MS小鼠造模成功。见表2。

表2 造模后 FBG、INS、ISI比较（）Tab.2 Comparison of FBG,INS,ISI after modeling()

表2 造模后 FBG、INS、ISI比较（）Tab.2 Comparison of FBG,INS,ISI after modeling()

与对照组比较，*P＜0.01Compared with control group,*P＜0.01

组别 nFBG（mmol/L）INS（mU/L）ISI对照组105.59±0.0311.85±0.08-4.19±0.01模型组107.20±0.13*13.88±0.06*-4.60±0.02*益肾组107.22±0.11*13.90±0.06*-4.61±0.01*疏肝组107.22±0.10*13.89±0.06*-4.61±0.01*益肾疏肝组107.21±0.10*13.91±0.05*-4.61±0.01*

2.3 用药后各组TC、TG、HDL的变化

2.3.1 用药后各组血清TC比较 益肾疏肝组与模型组相比血清TC偏低，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与益肾组、疏肝组相比血清TC均偏低，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与对照组相比血清TC偏高，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾组、疏肝组与模型组相比血清TC偏低，差异无统计学意义（P＞0.05）；益肾组血清TC与疏肝组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），说明益肾疏肝汤可显著降低MS小鼠血清TC，疗效优于金匮肾气丸、逍遥丸。见表3。

2.3.2 用药后各组血清TG比较 益肾疏肝组与模型组相比血清TG偏低，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与益肾组、疏肝组相比血清TG均偏低，差异有统计学意义 （P＜0.05）；益肾疏肝组与对照组相比血清TG偏高，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾组、疏肝组与模型组相比血清TG偏低，差异无统计学意义（P＞0.05）；益肾组与疏肝组相比血清TG差异无统计学意义（P＞0.05），说明益肾疏肝汤可显著降低MS小鼠血清TG，益肾疏肝汤优于金匮肾气丸、逍遥丸。见表3。

2.3.3 用药后各组血清HDL比较 益肾疏肝组与模型组相比血清HDL偏高，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与益肾组、疏肝组相比血清HDL均偏高，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与对照组相比血清HDL偏低，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾组、疏肝组与模型组相比血清HDL偏高，差异无统计学意义（P＞0.05）；益肾组与疏肝组相比血清HDL差异无统计学意义（P＞0.05），说明益肾疏肝汤可显著升高MS小鼠血清HDL，益肾疏肝汤优于金匮肾气丸、逍遥丸。见表3。

表3 用药后各组TC、TG、HDL的比较（）Tab.3 Comparison of TC,TG and HDL in each group after treatment()

表3 用药后各组TC、TG、HDL的比较（）Tab.3 Comparison of TC,TG and HDL in each group after treatment()

与对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05；与益肾疏肝组比较，▲P＜0.05Compared with control group,*P＜0.01;compared with model group,△P＜0.05;compared with benefits of kidney and liver group,▲P＜0.05

组别 nTC（mmol/L）TG（mmol/L）HDL（mmol/L）对照组102.19±0.050.59±0.040.96±0.05模型组102.59±0.04*0.69±0.04*0.75±0.04*益肾组102.59±0.03*▲0.69±0.04*▲0.75±0.04*▲疏肝组102.59±0.04*▲0.68±0.03*▲0.75±0.05*▲益肾疏肝组102.55±0.03*△0.65±0.04*△0.79±0.03*△

2.4 用药前后各组FBG的变化

2.4.1 用药后各组FBG比较与分析 益肾疏肝组与模型组相比FBG偏低，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾疏肝组与益肾组、疏肝组相比FBG均偏低，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与对照组相比FBG偏高，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾组、疏肝组与模型组相比FBG偏低，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾组与疏肝组相比FBG差异无统计学意义（P＞0.05），说明金匮肾气丸、逍遥丸、益肾疏肝汤均可降低MS小鼠FBG，益肾疏肝汤疗效优于金匮肾气丸、逍遥丸。见表4。

2.4.2 用药前后各组FBG差值的比较与分析 益肾疏肝组与模型组相比FBG差值偏高，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾疏肝组与益肾组、疏肝组相比FBG差值均偏高，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾疏肝组与对照组相比FBG差值偏高，差异有高度统计学意义（P＜0.01）；益肾组、疏肝组与模型组相比FBG差值偏高，差异有统计学意义（P＜0.05）；益肾组与疏肝组相比FBG差值差异无统计学意义（P＞0.05），说明肾气丸、逍遥丸、益肾疏肝汤均可降低MS小鼠FBG，益肾疏肝汤疗效优于肾气丸、逍遥丸。见表4。

表4 用药前后各组FBG比较（，mmol/L）Tab.4 Comparison of FBG in each group before and after treatment(,mmol/L)

表4 用药前后各组FBG比较（，mmol/L）Tab.4 Comparison of FBG in each group before and after treatment(,mmol/L)

与对照组比较，*P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与益肾疏肝组比较，▲P＜0.05Compared with control group,*P＜0.01;compared with model group,△P＜0.05,△△P＜0.01;compared with benefits of kidney and liver group,▲P＜0.05

组别 n用药前 用药后FBG差值对照组105.59±0.035.57±0.150.02±0.14模型组107.20±0.137.07±0.09*0.13±0.11益肾组107.22±0.116.93±0.08*△▲0.29±0.12*△▲疏肝组107.22±0.096.93±0.13*△▲0.29±0.14*△▲益肾疏肝组107.21±0.106.79±0.13*△△0.42±0.16*△△

3 讨论

MS是多基因和多种环境因素综合作用所致的疾病，脂代谢、糖代谢紊乱、胰岛素抵抗、慢性炎症反应、氧化应激等多种因素参与了MS的发病过程，寻找这一系列病理生理过程的核心因素，是从根本上解释MS发病机制和治疗MS的关键。

中医学无MS这一病名，现代学者多将其归属于 “消渴”、“血浊”、“肥胖”、“聚证”等范畴，郎宁等[7]认为 MS 是多种综合征的总和，个体表现不同，所以其病机侧重点亦不一样，肥胖者当以脾为中心，与肝密切相关；高血压者当以肝为中心；血脂异常者当从痰瘀论治；糖代谢紊乱者当以脾、肾为中心兼及他脏。笔者认为，肾虚肝郁是MS的基本病机。人体的各种气化功能活动的源动力是命门相火，朱丹溪说相火“具于人者，寄于肝肾两部”。肝有此火司气机之升，尽疏泄之职，任将军之管；肾有此火，输布一身之火，使水火得济，以奉生身之本[8]。肾精肝血充沛，则相火得以制约，静而守位，气化功能正常，不断将物质化为功能，同时通过功能的作用，完成物质的代谢，即所谓“气归形，形归气”。《灵枢·五变》云“五脏皆柔弱者，善病消瘅”，指出五脏虚弱是发生消渴的重要因素[9]。《金匮要略》中的肾气丸治“消渴病之小便多，饮一溲一”，是中医治疗消渴的先驱。其后，宋·严用和则谓“补脾不如补肾，肾气若壮，丹田火经上蒸脾土，脾土温和，中焦自治”。明·张景岳认为肾阴、肾阳总领全身之阴阳，即“五脏之阳非此不能发，五脏之阴非此不能滋”。因此，益肾以固本之源，精气充则脏腑功能得以增强，精血得以资生，百谷精微得脾气以运化，运化正常则病无所生。

此外，MS发病与肝的关系颇为密切。《素问·灵兰秘典论》曰“肝者，将军之官，谋虑出焉”[10]，说明其能疏导和协调全身各脏腑组织的生理功能；反之，肝气郁逆，气血违和，脏腑功能紊乱，邪气自内而生；卫外不固，邪易由外而袭，内伤外感，诸病丛生。《血证论·脏腑病机论》指出饮食物的消化完全依赖肝的疏泄：“木之性主乎疏泄，食气入胃，全赖肝木之气以疏泄之，而水谷乃化。设肝之清阳不升，则不能疏泄水谷，渗泄中满之症在所难免[11]。”可见肝的疏泄功能与饮食物的消化、吸收和气血的生化有着密切的关系。《临证指南医案·厥》则说：“盖肝者，将军之官，善干他脏者也……若震及心脾而为悸为消[12]。”由于各种不良因素，比如嗜酒肥甘、劳累过度、长期焦虑、久卧少动、年老体弱等均可导致肝失疏泄，以致体内气血及津液输布、运化失常，物不归正化，反而形成痰浊、瘀血等一系列病理产物，困阻于体内，致使血糖、血压、血脂增高，形体日渐肥胖，最终损伤脏腑、经络而产生多种疾病。总之，肾虚不固是本病发生的基础，肝失疏泄是本病发生及发展的核心环节。

因此，本研究采用益肾疏肝中药治疗MS收到良好疗效，近年临床研究表明其有效率达86%，与单用西药治疗组比较有较大优势。前期研究也表明该法能上调患者血清脂联素、瘦素水平，从单一层面解释了该法的部分机制。通过本研究发现，益肾疏肝中药能有效改善MS小鼠糖脂代谢，疗效优于单纯的益肾中药或疏肝中药，从益肾疏肝的角度出发，可能是中医药治疗MS的突破口之一。

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