反相高效液相色谱法测定乳癖安消片中盐酸小檗碱含量

高 咏，孙征刚，许 珊

(辽宁省沈阳市药品快速检验所，辽宁 沈阳 110013)

乳癖安消片由功劳木、三叉苦、益母草、鸡血藤、土茯苓、连翘6味中药制成。功劳木为方中君药，盐酸小檗碱是功劳木的主要成分[1]。笔者采用反相高效液相色谱(RP－HPLC)法测定盐酸小檗碱含量，效果满意，该法可用于控制制剂的质量。

1 仪器与试药

Shimadzu LC－10ATvp型液相色谱仪。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为713－200208);乙腈(色谱纯)，其他试剂(分析纯);样品(辽宁恒生制药有限公司)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:依利特 C18柱(200 mm ×4.6 mm，5μm);流动相:70 ∶30的乙腈－0.05 mol/L磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至3.0);柱温:30 ℃;流速:1.0 mL/min;检测波长:270 nm;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

取在105℃下干燥至恒重的盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成40.5 μg/mL的溶液，摇匀即得对照品溶液。取本品20片，除去薄膜衣，研细，取2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸－甲醇(1∶100)混合溶液20 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min，冷至室温，再称定质量，用盐酸－甲醇(1∶100)混合溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 mL，通过已处理好的中性氧化铝柱(120目，5 g，内径1 cm)用甲醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣用甲醇溶解后移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得供试品溶液。取除功劳木外的其他处方量药材，按制备工艺制备缺功劳木的阴性样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:阴性对照品溶液测定结果表明，在与盐酸小檗碱保留时间相应位置上无吸收，表明其他成分对本品的盐酸小檗碱含量测定无干扰，方法专属性良好(见图 1)。

线性关系考察:精密称取盐酸小檗碱对照品10.13 mg，置25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀即得对照品溶液(40.5 μg/mL)。分别精密吸取 对 照 品 溶 液 2.0，6.0，10.0，14.0，18.0 μL，进样分析。回归方程 Y=1845625.31 X+4559.95，r=0.9998(n=5)。结果表明，盐酸小檗碱进样量在0.081 ～ 0.729 μg范围内与峰面积线性关系良好。

图1 高效液相色谱图

稳定性试验:取同一供试品溶液，精密吸取 10 μL，按 0，2，4，6，8 h的间隔进样分析。结果峰面积的 RSD=0.91%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

精密度试验:精密吸取质量浓度为40.5 μg/mL的对照品溶液10 μL，重复进样 6 次。结果峰面积的 RSD=1.11%(n=6)。

重复性试验:取本品60片，研匀，分取6份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD=1.64(n=6)。

回收率试验:取本品(平均片重0.4189 g，盐酸小檗碱含量158 μg/片)60片，研匀，分取 6份，每份1 g，精密称定，精密加入对照品溶液(366.2 μg/mL)1 mL，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品3批，测定其含量。结果批号为20081001，20081002，20081003的 3批样品中盐酸小檗碱含量分别为 127 μg/片、138 μg/片、133 μg/片。根据上述结果，考虑到实际生产过程可能产生的波动，确定本品每片中含功劳木以盐酸小檗碱计不得少于100 μg。

3 讨论

参照文献[2－3]考察了供试品溶液制备方法，比较了超声处理30 min和放置过夜后超声处理30 min对本品盐酸小檗碱含量的影响。结果表明，二者含量相近，故选择前者。

[1]WS－10433(ZD－04337)－2002，国家药品监督管理局标准(试行)[S].

[2]陈 进，王国凯，刘劲松.HPLC法测定炎可宁片中盐酸小檗碱的含量[J].安徽医药，2007，11(9):790－791.

[3]邓朝晖，陆国忠，徐雪峰.HPLC法测定胃痛宁片中盐酸小檗碱的含量[J].中药材，2008，31(6):927 －928.