乳腺癌MCVD与MVD检测及VEGF-C表达的关系

刘春凤，卢春凤，邹辉，奚克敏

1.佳木斯大学 药理教研室， 黑龙江佳木斯 154007;

2.牡丹江医学院红旗医院 超声科，黑龙江 牡丹江 157011；

3.牡丹江医学院 药学院，黑龙江牡丹江 157011

乳腺癌MCVD与MVD检测及VEGF-C表达的关系

刘春凤1,2，卢春凤1，邹辉3，奚克敏2

1.佳木斯大学 药理教研室， 黑龙江佳木斯 154007;

2.牡丹江医学院红旗医院 超声科，黑龙江 牡丹江 157011；

3.牡丹江医学院 药学院，黑龙江牡丹江 157011

目的 探讨乳腺癌能量多普勒血流信号平均密度（MCVD）与微血管密度（MVD）及血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达的关系。方法 采用能量多普勒超声成像检测乳腺癌肿块内MCVD。采用免疫组化SP法检测35例乳腺癌中VEGF-C的表达，并用CD34标记新生血管内皮细胞，计算乳腺癌肿块内MVD。结果 VEGF-C在乳腺癌组织中的阳性表达率显著高于乳腺结节样增生组织（P＜0.01），乳腺癌肿块中MVD、MCVD明显增高（P＜0.01），VEGF-C 表达强度与MVD呈正相关（P＜0.01），MVD与MCVD呈正相关（P＜0.01）。结论 血管生成是与VEGF-C表达密切相关，通过能量多普勒超声成像技术与MVD、VEGF-C检测结合，能很好地评估乳腺癌血管生成。

超声诊断仪；乳腺癌；能量多普勒；微血管密度；血管内皮生长因子-C

乳腺癌是女性常见恶性肿瘤之一，如何提高早期乳腺癌的临床诊断率，已成为广大临床工作者普遍关注的问题。目前临床常用的乳腺癌筛查方法主要是采用彩色多普勒超声及钼靶检查，但如单独采用此两种方法，则各自均存在一定的局限性。本研究通过能量多普勒超声成像技术与免疫组化检测技术结合，探讨病灶彩色血流信号平均密度（mean color vessel density，MCVD）与微血管密度（microvessel density，MVD）及血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）的关系，为临床上进一步了解乳腺癌肿瘤血管生成情况及判断预后提供理论依据和指导，以期对临床早期诊断及鉴别诊断乳腺癌起到一定的指导作用。

1 资料和方法

1.1 临床资料

筛选我院2007～2009年普外科收治的术后病理证实为乳腺癌的患者35例，年龄33～66岁，平均46岁。另选择乳腺结节样增生症患者10例作为对照。

1.2 试剂

鼠抗人VEGF-C多克隆抗体、鼠抗人CD34单克隆抗体（均为工作液）、SP免疫组化超敏染色试剂盒均购自福州迈新生物技术有限公司。

1.3 能量多普勒超声检测乳腺肿块内MCVD

应用仪器设备为东芝阿波罗型超声诊断仪，探头频率为7.5～10 MHz。选用乳腺常规检测程序，重点观察肿块的位置、大小，形态、内部回声、周围回声等声像图特征。对肿块利用CAD图像处理系统进行处理，对肿块内的血管平均密度记录，分析。

1.4 免疫组织化学法检测乳腺癌组织中VEGF-C和MVD

采用免疫组织化学SP法，实验操作按试剂盒说明书进行。用已知阳性片作为阳性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替第一抗体作为阴性对照。

结果判定：VEGF-C主要为胞质着色，少数为胞核着色，以胞内出现棕黄色颗粒的细胞为阳性细胞。判定标准为：以阳性细胞率＞25%为阳性表达（+），阳性细胞率≤25%为阴性表达（-）。微血管密度：先在低倍视野下找肿瘤组织内微血管密度最高的区域，然后在200倍视野下计数微血管3个视野的数目，再将总数除以3，取其平均值作为该肿瘤高倍视野下的MVD。

1.5 统计学处理

应用SPSS11.0软件进行统计分析。采用χ2、t检验和等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 乳腺癌和乳腺结节样增生症组中的MCVD和MVD

乳腺癌组中的MCVD和MVD明显增多，与乳腺结节样增生症组比较，差异有显著统计学意义（P ＜0.01）（见表1）。

表 1 乳腺癌和乳腺结节样增生症组中的MCVD和MVD

2.2 VEGF-C在乳腺癌和乳腺结节样增生症组织中的表达

VEGF-C在乳腺癌组织中的阳性表达率为57.14 %，明显高于乳腺结节样增生症组织中的表达率，差异有显著统计学意义（P ＜0.01）（见表2）。

表 2 VEGF-C在乳腺癌和乳腺结节样增生症组织中的表达

2.3 乳腺癌MVD与VEGF-C表达、MCVD的关系

VEGF-C阳性表达的乳腺癌MVD明显高于其阴性表达组 (P＜0.01)。相关分析结果显示，乳腺癌中MVD与MCVD呈正相关（r＝0.478，P＜ 0.01）。

3 讨论

目前，国内外学者研究彩色多普勒下乳腺癌的较多，普遍认为CDFI可以较灵敏直观地显示良恶性肿瘤血管状况上的差异，我们对上述40例乳腺良恶性肿瘤患者的CDFI检查发现，乳腺癌的血管显示率89%，结节样增生的检出率为39%，二者有显著差异，良性肿块血管检出率较高，这点与Hamada[1]的结果相似。因此，正如国内外学者普遍认为的单存依靠血管的检出率诊断乳腺癌有一定的局限性，Cosgrove[2]等对血流的信号的数量进行定量化。本研究立足于能量多普勒血管平均密度（MCVD）,探求其与MVD及VEGF三者间的关系。近年来研究表明人类实体肿瘤的生长和转移均需要血管生成[3,4]，肿瘤微血管密度是评估患者转移及预后的重要指标。MVD是目前用以衡量肿瘤新生血管程度的常用标志，也是反映恶性肿瘤生物学行为的重要参考指标[5]。

本研究发现，与乳腺结节样增生症组相比，乳腺癌组中的MVD明显增多，表明乳腺癌组中有大量的新生血管。乳腺癌的新生血管是肿瘤自身分泌的血管生长因子诱导而成的，目前人们已经发现多种血管生成诱导因子中VEGF-C被认为是促血管生成作用最强的血管生长因子，在肿瘤血管形成过程中起重要作用[6]。VEGF-C与其受体结合后，可释放各种生长因子及细胞因子，并以多种方式促进肿瘤血管生成，从而为肿瘤的浸润、转移创造条件[7,8]。本研究结果显示，乳腺结节样增生症组织中VEGF-C表达较低，乳腺癌组织中的表达增加，表明随着病变的进展VEGF-C阳性表达逐渐增加。提示VEGF-C可能参与乳腺癌的发生过程。同时本研究结果表明，乳腺癌微血管大量新生，并且VEGF-C阳性表达者MVD明显高于VEGF-C阴性表达者，提示VEGF-C与乳腺癌微血管形成密切相关。术前对肿瘤良恶性评价，无创性且能在活体上对血管生成进行评估的检测技术具有明显的临床意义。近年来，陆续有应用彩色多普勒超声检测肿瘤内MCVD，评估肿瘤血管生成的报道[9,10]。

本研究发现，能量多普勒超声成像技术检测MCVD与免疫组化技术标记肿瘤组织内微血管测定MVD具有一致性，即乳腺癌组中的MCVD明显高于乳腺结节样增生症组，并且MVD也明显高于乳腺结节样增生症组，二者呈正相关。MCVD可以精确地对肿瘤内的血管进行定量性评定，可以更准确地评价血管生成，从而使定量反映活体乳腺癌组织内血管生成情况成为可能。但是尽管如此，现有多普勒超声技术主要提供较大血管的信息，不可能检测出较小的肿瘤新生血管，而MVD能精确地标识肿瘤内微血管，两种方法结合将更能准确反映肿瘤组织中血供情况。

本研究通过能量多普勒超声成像技术与免疫组化技术检测MVD、VEGF-C相结合，更能准确反映肿瘤组织中血供情况，能很好地评估乳腺癌血管生成，且为临床上进一步了解乳腺癌肿瘤血管生成情况及判断预后提供理论依据和指导。

[1] Mirhio Hamada,et al．Color Doppler echography of breast diseases:Detection rate of color flow signals and significance of color Doppler echogaphy in breast disease．Jpn [J]．Med Utrasonincs,1992(3):19．

[2] DO Cosgrove,et al．Color Doppler signals from breast[J]．Radiology,1990,176:175．

[3] Folkman J．What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent[J]． J Natl Cancer Inst,1990,82(1):4-7．

[4] Amaoka N,Saio M,Nonaka K,et al．Expression of vascular endothelial growth factor receptors is closely related to the histological grade of hepatocellular carcinoma[J]．Oncol Rep, 2006,16(1):3-10．

[5] 文耕云,裴雪涛．CD34的分子生物学研究进展[J]．实验血液学杂志,1995,3(3):250-252．

[6] Veikkola T,Alitalo K．VEGFs, receptors and angiognesis[J]．Semin Cancer Biol,1999,9(3):211-220．

[7] Mitsuhashi N,Shimizu H,Ohtsuka M,et al．Angiopoietines and Tie-2 expression in angiogenesis and proliferation of human hepatocellular carcinoma[J]．Hepatology,2003,37(5):1105-1113．

[8] Tanaka S, Arii S． Current status and perspective of antiangiogenic therapy for cancer: hepatocellular carcinoma[J]．Int J Clin Oncol,2006,11(2):82-89．

[9] 李颖嘉,吴凤林,龚渭冰,等．能量多普勒超声对乳腺癌血管生成的检测与PCNA表达及临床病理因素的研究[J]．中国超声医学杂志, 2002,18(5):380-383．

[10] 庞贝,汪湛,黄健．二维及彩色多普勒超声诊断乳腺肿块的临床价值[J]．中华医学杂志,2004,28(4):223-224．

Correlation between MCVD, MVD and VEGF-C Expression in Primary Breast Carcinoma using Power Doppler Imaging

LIU Chun-feng1,2, LU Chun-feng1, ZOU Hui3,XI Ke-min2

1.Pharmacology Teaching and Research Section,Jiamusi University, Jiamusi Heilongjiang 154007,China;
2.Department of Ultrasound,Hongqi Hospital Affiliated to Mudanjiang Medical College,Mudanjiang Heilongjiang 157011,China;
3.College of Pharmacy, Mudanjiang Medical College, Mudanjiang Heilongjiang 157011,China

Objective To investigate the relationships between mean color vessel density (MCVD), microvessel density (MVD) and the expressions of vascular endothelial growth factor-C (VEGF-C) in primary breast carcinoma. Methods MCVD was observed preoperatively using power Doppler imaging, the expression of VEGF-C in 35 cases of breast carcinoma was detected by immunohistochemistry SP method, and blood vessel endothelial cells were labelled by CD34 and MVD the breast carcinoma was assayed. Results The positive expression rates of VEGF-C was remarkably higher in breast carcinoma than those in breast nodular hyperplasia (P＜0.01), MVD and MCVD were significantly increased (P＜0.01). There were positive correlation between the expression intensity of VEGF and MVD, MVD and MCVD (P＜0.01). Conclusion Angiogenesis is closely correlated with the expression of VEGF-C in primary breast carcinoma. Joint use of power Doppler imaging and MVD, VEGF-C can illustrate the angiogenesis of a primary breast carcinoma.

ultrasound system;breast carcinoma; power Doppler imaging;microvessel density; vascular endothelial growth factor-C

R445.1

A

10.3969/j.issn.1674-1633.2010.04.010

1674-1633(2010)04-0026-03

2010-01-29

2010-03-30

本文作者：刘春凤，在读硕士研究生。

卢春凤，副教授，博士，硕士研究生导师。

作者邮箱：ku_721@sina．com