轻度认知功能障碍淋巴细胞及炎症蛋白检测

吴万振 于恩彦 任爱华 朱利月 周建妹 王 强

轻度认知功能障碍淋巴细胞及炎症蛋白检测

吴万振 于恩彦 任爱华 朱利月 周建妹 王 强

目的 探讨MCI认知功能与淋巴细胞及炎症蛋白的关系。方法 研究阿尔茨海默病(AD，36例）、轻度认知障碍(MCI，34例）及认知功能正常老年人(认知正常组，36人）的外周血淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及炎性蛋白的差异。结果 认知正常组、MCI组与AD患者的免疫球蛋白G(IgG）浓度中位数依次为10.5g/L、10.6g/L、13.1g/L(χ2=14.28，P＜0.01）；辅助性T淋巴细胞(TH）比例的中位数依次为41%、35%、37%(χ2=9.96，P＜0.01）；三组间差异有统计学意义。其中认知正常组与MCI组的IgG差异无统计学意义(Z=0.64，P=0.52），而AD组IgG水平高于MCI组(Z=3.26，P＜0.01）和认知正常组(Z=3.22，P＜0.01）；认知正常组TH高于AD组(Z=2.55，P＜0.05）和MCI组(Z=2.95，P＜0.01），而MCI组与AD组的TH差异无统计学意义(Z=0.18，P=0.86）。结论 IgG可能在AD与MCI、认知功能正常者的鉴别方面具有重要意义；TH水平降低可能是认知功能受损的标志。

轻度认知障碍 阿尔茨海默病 辅助性T淋巴细胞

阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD）是一组病因未明的原发性退行性脑变性疾病，多起病于老年期，潜隐起病，以智能损害为主，缓慢不可逆地进展(2年或更长）。但病因尚不清楚，近年来，越来越多的研究表明AD起病及其发展过程中与脑内炎症改变有关［1］。轻度认知障碍(mild cognition impairment，MCI）描述的是介于正常老化和AD之间的一种过渡阶段的认知状态［2］，本研究检测认知功能正常老年人、AD及MCI患者外周血淋巴细胞及炎症相关物质，探讨炎症与认知功能的关系。

1 对象与方法

1.1 研究对象

病例组研究对象来源于2006年8月—2008年8月在我院住院年龄大于60岁的患者。

AD组：采用简易智力状态检查［3］(minimentalstatus examination，MMSE）以及临床痴呆评分量表［4］(clinical dementia rating，CDR）作为筛选工具，其中，评分标准如下：0提示健康，0.5提示可疑痴呆，1.0为轻度痴呆，1.5为中度痴呆，2.0为重度痴呆［4］。再采用美国国立神经病语言机能紊乱和卒中研究所及阿尔茨海默病和相关疾病协会的标准［5］作出可能AD的诊断。

MCI组，主要为认知功能受到损害，但是尚未达到痴呆的程度，参考Grundman［6］标准，纳入标准为：①主诉记忆障碍，而且有知情者证实；②总体认知功能正常，但可有某一认知方面的变化；③日常生活能力基本正常；④与相同年龄和同等教育程度者相比，存在记忆损害，记忆功能评分在这些匹配组分值1.5个标准差以下，亦即MMSE总分24～28分，CDR评分为0.5分；⑤不够痴呆的标准。

认知功能正常老年组(简称认知正常组），主要来源于参加社区健康宣教者，没有记忆力明显下降的主诉，社会功能正常，MMSE总分30分。

排除具有明确证据的感染(体温＞37.2℃，白细胞或者中性粒细胞增多），使用免疫抑制剂者。

研究经过本院伦理委员会审核通过，所有的受试者或家属均签署知情同意书。

1.2 研究方法

检测认知正常组、MCI组与AD患者外周血淋巴细胞亚群(TT为总T淋巴细胞，TB为总B淋巴细胞，TH为辅助性T淋巴细胞，TS为抑制性T淋巴细胞，TNK为总自然杀伤细胞），免疫球蛋白(IgA，IgG，IgM）及炎性蛋白(AAG为α1-酸性糖蛋白，CER为铜蓝蛋白，HPT为触珠蛋白）。检测淋巴细胞方法，抽取外周静脉血，EDTA-K2抗凝，采用Becton Dickinson，FACScanlibur流式细胞仪，双色检测法，采用Becton Dickinson simultest IMK-lymphocyte原装配套试剂盒，严格按照说明书流程操作；炎症相关物质检测方法，抽取外周静脉血，分离血清，采用Beckman Immage 800特种蛋白仪检测炎症相关物质，试剂采用Beckman原装配套试剂盒，严格按照说明书流程操作。

1.3 统计方法

所有资料均使用SPSS11.5统计软件包分析，符合正态分布的计量资料用均数±标准差表示，用方差分析进行检验。不符合正态分布的计量资料用中位数表示，采用秩转换的非参数检验，多个样本之间比较采用Kruskal-Wallis检验，两组之间比较用Mann-Whitney检验，以P＜0.05为检验水准。

2 结果

本研究纳入受试者情况如下：AD组共36例，男性26例，女性10例，平均年龄(83.2±3.5）岁，MMSE得分为(13.9±8.7）分，CDR评分为1～3分。MCI组共34例，男性26例，女性8例，平均年龄(81.9±4.0）岁，MMSE得分为(26.2±1.7）分，CDR评分为0.5分。认知正常对照组共36人，男性24人，女性12人，平均年龄(81.5±3.4）岁，CDR评分为0分。三组的性别构成(χ2=0.84，P=0.65）、年龄(F=2.15，P=0.12）差异无统计学意义。

三组检测结果见表1。认知正常组、MCI组与AD患者三组间的IgG和TH差别具有统计学意义。其中认知正常组与MCI组的IgG差异无统计学意义(Z=0.64，P=0.52），而MCI组IgG水平低于AD组(Z=3.26，P＜0.01），认知正常组IgG水平低于AD组(Z=3.22，P＜0.01）；认知正常组TH高于AD组(Z=2.55，P＜0.05）和MCI组(Z=2.95，P＜0.01），而MCI组与AD组的TH差异无统计学意义(Z= 0.18，P=0.86）。三组间α1-酸性糖蛋白，铜蓝蛋白以及触珠蛋白差异无统计学意义。

表1 认知正常组、MCI与AD患者外周血淋巴细胞亚群免疫球蛋白及炎性蛋白检测结果

3 讨论

近年来研究发现在AD患者脑组织病理变化中伴随某些脑内免疫反应，并与病情变化有一定的联系，在疾病的进程中，神经炎症反应包括有利和有害作用。AD患者神经病理研究表明，小胶质细胞的活化比较早，要先于老年斑和神经纤维缠结的形成。活化的小胶质细胞产生并释放潜在的毒性物质，包括氧自由基，致炎症细胞因子，兴奋性毒素和蛋白酶，这可能破坏邻近的神经元。除了产生致炎症细胞因子，小胶质细胞也可以产生抗炎症细胞因子，比如白介素(IL）-10［7］。这些发现提示AD患者脑部免疫功能改变，同时发现AD患者存在着外周淋巴细胞免疫功能的改变［8］。

研究提示，AD患者TT的百分比低于健康对照组［8］，本研究显示，AD组TT水平与认知正常组差异无统计学意义，结果的不同可能与样本的来源、数量及方法等多种因素有关，但本研究AD组TH水平低于认知正常组，支持重度AD患者TH亚组水平明显降低［9］的结论，这可能是因为TH淋巴细胞在AD患者细胞调亡中表现出更强的易损性［10］。本研究显示，AD组与MCI组TH水平差异无统计学意义，提示MCI作为AD的临床前状态，在外周淋巴细胞免疫功能的改变有别于认知功能正常者，提示TH水平降低可能是认知功能受损的标志。Magaki［11］对MCI的研究中，发现细胞因子IL-6，IL-8，IL-10产生增加，表明免疫活化是一个在AD之前的早期现象，而MCI作为痴呆的临床前期，TH受到的影响更大；在痴呆患者中，TH比例稍增加推测可能随着疾病的进程，认知功能的下降，免疫状态处于新的动态平衡，CD4+免疫细胞数目略微恢复。然而，也存在不同的发现［8］。TH细胞主要是通过分泌细胞因子，如γ-干扰素(IFN-γ），IL-2，IL-10等发挥免疫功能，IFN-γ活化巨噬细胞，还能促进IgG的生成，IgG能够通过调理作用和激活补体系统促进巨噬细胞的吞噬和杀伤能力；IL-2刺激激活的T细胞增生和产生细胞因子，促进炎症反应；IL-10可以抑制促炎症细胞因子的产生，抑制T细胞产生IL-2，并且抑制抗原特异性T细胞的激活，以及抑制单核细胞和巨噬细胞的活性［12］。

IgG是血清和细胞外液中含量最高的免疫球蛋白，是再次免疫应答的主要抗体，其亲和力高，分布广泛，通过经典途径活化补体，并且可以与巨噬细胞、NK细胞结合，发挥调理作用，以及抗体依赖细胞介导的细胞毒作用［12］。有一些证据表明，AD患者血清或者外周循环细胞出现特异性的免疫改变［8，13］。本研究结果显示，AD患者的IgG含量较MCI组与健康对照组明显升高，表明AD患者存在着外周淋巴细胞免疫功能的改变，支持前述的研究结果，虽然，AD患者的IgG含量升高的机制还不清楚，但这一结果提示IgG含量在鉴别AD与MCI及认知功能正常者的方面可能具有重要意义。

α1-酸性糖蛋白、铜蓝蛋白以及触珠蛋白为非特异性急性反应相蛋白，血清中含量如果升高，可能预示某种疾病或病理状态［14］，其在AD中的研究相对较少［15］，而在MCI中研究则未见报道。本研究三组间三者的差异无统计学意义，但我们做的只是初步的探讨，有必要扩大样本进一步验证这一结果。

由于MCI描述的是介于正常老化和痴呆之间的一种过渡阶段的认知状态，因此随着潜在的生理和病理过程的不同，MCI组可能存在着显著的异质性［2］。我们选择的MCI同样存在这些问题，因此需要动态观察这组患者认知功能以及其免疫功能的变化。AD脑内免疫反应是一个复杂的过程，其外周炎症反应尚需进一步探讨。

1 Cohen RM.The role of the immune system in Alzheimer's disease. Focus，2009，7(1）：28-35.

2 吴万振，于恩彦.轻度认知障碍概念和神经心理学研究进展.神经疾病与精神卫生，2007，7(4）：311-315.

3 张明园.精神科评定量表手册.长沙：湖南科技出版社，2003：184-188.

4 Morris JC.The clinical dementia rating(CDR）：current version and scoring rules.Neurology，1993，43(11）：2412-2414.

5 McKhann G，Drachman D，Folstein M，et al.Clinical diagnosis of Alzheimer's disease：report of the NINCDS-ADRDA work group under the auspices of department of health and human service task forceon Alzheimer's disease.Neurology，1984，34(7）：939-944.

6 Grundman M，Petersen RC，Ferris SH，et al.Alzheimer's disease cooperative study.Mild cognitive impairment can be distinguished from Alzheimer disease and normal aging for clinical trials.Arch Neurol，2004，61(1）：59-66.

7 Rogers J，Strohmeyer R，Kovelowski CJ，et al.Microglia and inflammatory mechanisms in the clearance of amyloid beta peptide.Glia，2002，40(2）：260-269.

8 Richartz-Salzburger E，Batra A，Stransky E，et al.Altered lymphocyte distribution in Alzheimer's disease.J Psychiatr Res，2007，41(1 -2）：174-178.

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11 Magaki S，Mueller C，Dickson C，et al.Increased production of inflammatory cytokines in mild cognitive impairment.Exp Gerontol，2007，42(3）：233-240.

12 陈慰峰.医学免疫学.4版.北京：人民卫生出版社，2005.

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15 Marianne JE，Mirjam IG，John MM，et al.Inflammatory proteins in plasma and the risk of dementia：the Rotterdam study.Arch Neurol，2004，61(5）：668-672.

Objective：To investigate the relationship between inflammation and cognitive function. Methods：The differences of peripheral blood lymphocyte subsets，immunoglobulin and inflammatory protein among Alzheimerˊs disease(AD，n=36），mild cognitive impairment(MCI，n=34）and healthy elderly(n= 36）were examined.Results：The median levels of immunoglobulin G(IgG）and the percentages of helper T lymphocytes(TH）were 10.5g/L，10.6g/L，13.1g/L(χ2=14.28，P＜0.01）and 41%，35%，37%(χ2=9.96，P＜0.01），respectively，among healthy elderly，MCI and AD，in that order.There were statistically significant among three groups.There was no statistically significant difference in IgG between healthy elderly and MCI(Z =0.64，P=0.52）.The level of IgG was higher in AD than in MCI(Z=3.26，P＜0.01）and healthy elderly (Z=3.22，P＜0.01）.The level of TH was higher in healthy elderly than in AD(Z=2.55，P＜0.05）and MCI(Z=2.95，P＜0.01）.There was no statistically significant difference in TH between MCI and AD(Z= 0.18，P=0.86）.Conclusion：IgG may play an important role in differentiating healthy elderly，MCI and AD. Reduction in TH level could be a sign of cognitive impairment.

Mild cognitive impairment Alzheimer's disease Helper T lymphocyte

2009-06-01）

(本文编辑：张红霞）

Examinations of lymphocytes and inflammatory proteins in mild cognitive impairment Wu Wanzhen，Yu Enyan，Ren Aihua，Zhu Liyue，Zhou Jianmei，Wang Qiang.Zhejiang Hospital of Zhejiang Provence，Hangzhou 310013

浙江省医药卫生科技计划项目(2006A013）

浙江省浙江医院 310013。通信作者：于恩彦，电子信箱y_enyan@yahoo.com.cn