盐肤木总黄酮的提取研究

陈存武，张 莉，何晓梅，程卫兵，马甲林

（皖西学院化学与生命科学系，安徽省植物生物技术实验实训中心，安徽 六安 237012）

盐肤木（Rhus chinensisMill.）又称五倍子树、五倍柴等，属于漆树科（Anacardiaceae）盐肤木属（Rhus）的落叶灌木或乔木[1]，在我国广泛分布，主要用于生产中药原料五倍子，是我国的主要经济树种之一。目前，人们对盐肤木的研究主要在于如何改进其栽培技术，提高五倍子的产量，而对盐肤木植株所含有的黄酮类物质的研究报道不多见。笔者研究了盐肤木植株总黄酮类物质的含量及其最佳提取方法，旨在为更好的开发利用盐肤木资源提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为盐肤木（Rhus chinensisMill.），采自皖西学院植物园。

1.2 仪器与试剂

仪器：TU-1901紫外可见光分光光度计（北京普析通用仪器设备有限公司），HH—4数显恒温水浴锅（国华电器有限公司），101AS-2型不锈钢数显电热鼓风干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂），FA-1004电子天平（上海精科天平厂），KQ-500B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

试剂：芦丁、NaNO2、Al（NO3）3、NaOH、无水乙醇等，均为国产分析纯。

1.3 方法

1.3.1 材料处理 在盐肤木果实成熟时采回植株，清洗干净，按照树皮、叶片、叶柄、果实、果皮、种子等进行分类，于103℃烘干至恒重，粉碎过40目筛，分装备用。采用索式抽提法[2]，以无水乙醚为脱脂剂，于45℃水浴加热脱脂一周以上，直至回流液无色、用玻璃棒蘸取回流液滴在滤纸上风干后无印迹为止，以充分除去样品中脂类物质和脂溶性色素。脱脂后的样品除去乙醚备用。

1.3.2 提取条件研究[3]（1）单因素实验：选取浸提温度、浸提时间、液料比、乙醇浓度等作为影响盐肤木叶片总黄酮提取率的研究因素。在研究其中的某个因素时，其他因素均以水平3作为实验参数。每个被研究的因素设6个水平，每个水平做3个平行样，计算平均值。每个样浸提3次，合并浸提液，以总黄酮的提取率为指标，分别找出各因素的最适提取条件。实验因素与水平设计见表1。

表1 实验因素与水平

（2）正交实验：在单因素实验的基础上，采用四因素三水平的L9（34）正交试验，找出最佳提取条件。

1.3.3 黄酮含量测定[4-5]利用黄酮类化合物与铝盐反应生成的络合物，在510 nm处有稳定吸收峰的特性，以芦丁为标准品，采用分光光度法即亚硝酸钠-硝酸铝比色法测定溶液吸光度，得到其中的总黄酮含量。

（1）制作标准曲线：精确称取103℃烘箱中烘至恒重芦丁标准品10 mg，用70%乙醇定容至100 mL为标准液。再精确吸取芦丁标准液0.0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL 分别置于 6 支具塞试管中，各补水至5 mL。加5%NaNO2溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，加10%Al（NO3）3溶液0.3 mL，摇匀后放置6 min，再加4%NaOH溶液4 mL，加水0.4 mL，摇匀后放置15 min，在510 nm处测吸光度。计算吸光度-浓度曲线及回归方程。

（2）样品中总黄酮含量的测定：分别取各样品的浸提液，按照标准曲线相同的方法，测定其510 nm处的吸光度，根据回归方程计算其总黄酮含量。

1.3.4 盐肤木植物各部分的总黄酮提取率测定分别精确称取1.0 g除脂后的盐肤木叶片、叶柄、树皮、果实、果皮、种子等，按照正交实验得到的最佳提取条件回流浸提10次，合并浸提液，测定其总黄酮含量，计算其总黄酮提取率。各做3个平行样，计算其平均值。

盐肤木总黄酮提取率（%）=提取液所含黄酮质量（g）/盐肤木原料质量（g）×100

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制作

按照1.3.3的方法制作的黄酮测定标准曲线如图1，其回归方程y=1.256 6x-0.004 1，相关系数R2=0.999 6，可以用作黄酮含量测定使用。

2.2 单因素实验结果

2.2.1 浸提温度对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响 按照表1中设定的浸提温度，其他因素均以水平3作为实验参数，对盐肤木叶片总黄酮的提取率进行实验研究，其结果见图2。

图1 芦丁标准曲线

由图2可以看出，随着温度升高，叶片总黄酮的提取率由 40℃时的 1.8%升高到 70℃时的4.04%，但当温度超过70℃时提取率有所下降。考虑到温度对黄酮成分稳定性的影响，浸提温度以70℃比较合适。

图2 浸提温度对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响

2.2.2 提取时间对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响 按照表1中设定的提取时间，其他因素均以水平3作为实验参数，对盐肤木叶片总黄酮的提取率进行实验研究，其结果见图3。

图3 提取时间对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响

由图3可知，随着提取时间的延长，黄酮类物质的提取率也逐渐增大，但在提取时间达到150 min后，提取率增加的幅度逐渐减小。综合提取效率等因素，合适的提取时间应选150 min为宜。

2.2.3 液料比对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响按照表1中设定的液料比，其他因素均以水平3作为实验参数，对盐肤木叶片总黄酮的提取率进行实验研究，其结果见图4。由图4可以看出，提取剂的液料比为80∶1时，盐肤木叶片总黄酮的提取率最高，液料比增大或减小都不利于盐肤木叶片总黄酮的提取。

图4 液料比对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响

2.2.4 乙醇浓度对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响 按照表1中设定的乙醇浓度，其他因素均以水平3作为实验参数，对盐肤木叶片总黄酮的提取率进行实验研究，其结果见图5。由图5可知，随着乙醇浓度的增高，总黄酮的提取率增大，当乙醇浓度超过90%时提取率降低，当乙醇浓度为95%时，提取率为2.92%。可见在乙醇浓度为90%时提取效果最佳。

图5 乙醇浓度对盐肤木叶片总黄酮提取率的影响

2.3 正交实验结果

在单因素实验的基础上，选取了合适的提取时间、浸提温度、乙醇浓度、液料比，采用四因素三水平的L9（34）正交试验，以总黄酮的提取率为指标，对盐肤木叶总黄酮提取工艺进行研究，实验结果见表2。

表2 L9（34）正交实验结果

从表2中的极差R值可以看出，ABCD四因素对盐肤木叶总黄酮提取率的影响依次是：B>A>C>D，即提取时间影响最大，其次是浸提温度与料液比，乙醇浓度影响最小。从正交实验的总黄酮提取率可以看出，第九组即A3B3C2D1，为总黄酮的最佳提取工艺，即在80℃条件下，用70%的乙醇为提取剂，以80∶1的液料比提取180 min，其提取率可以达到5.22%，与单因素实验结果有一定的差异。

2.4 盐肤木植株各部分总黄酮提取率

采用正交实验得到的最佳提取工艺，分别提取盐肤木叶片、叶柄、树皮、果实、果皮、种子的总黄酮，共提取10次，合并浸提液。每个样做三个平行。按照标准曲线方法测定其总黄酮含量，计算提取率。结果如表3所示，盐肤木叶片、叶柄、树皮、果实、果皮、种子的总黄酮提取率分别为5.84%、2.32%、1.02%、2.01%、1.80%和0.54%。。

表3 盐肤木植株各部分的总黄酮提取率 （%）

3 小结

植物黄酮类物质的提取方法有超声波法、微波法等多种[6-7]，本文采用乙醇为提取剂的有机溶剂提取法，具有设备简单、操作方便快捷的特点，也容易实现产业化。从单因素实验结果看，最适合的浸提温度是70℃，浸提时间是150 min，液料比在80∶1，乙醇浓度为70%，但是正交实验的最佳提取条件是80℃，80∶1的液料比，70%的乙醇浓度，提取180 min。两者在浸提温度与浸提时间上虽然有些差异，但是一次正交实验的总黄酮提取率就达到5.22%，达到叶片的总黄酮提取得率5.84%的89.4%，这也反映出正交实验在提取工艺优化过程中的优选性能。用正交实验优选出的提取工艺提取盐肤木总黄酮，叶片总黄酮的提取率达到5.84%，高于银杏叶[11]总黄酮2.87%的提取率，果实的总黄酮提取率也达到2.01%。这说明该优化工艺合适盐肤木总黄酮的提取，盐肤木总黄酮含量较高，具有较高的应用价值，有待于进一步的开发研究。

[1]中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志 [M].北京：科学出版社，1999，45（1）：67-69，99-105.

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