卵巢浆液性囊腺癌彩色多普勒血流显像与微血管密度及 COX-2表达的相关性研究

王 健,郑春梅,曹 霞,黄雪兰,杨 欣

(佳木斯大学附属第一医院物理诊断科,黑龙江 佳木斯 154003)

卵巢恶性肿瘤发病隐匿的特点使许多患者就诊时已处于晚期,因此,高敏感性、高特异性的诊断手段是早期诊断卵巢癌的关键。我们应用彩色多普勒超声诊断技术检查了42例卵巢肿瘤的患者,观察其形态结构特征和血流供应特点。应用免疫组化法对手术切除的12例卵巢良性肿瘤和30例卵巢浆液性囊腺癌标本检测其组织中 COX-2表达,探讨彩色多普勒血流显像应用的血管病理学基础,卵巢癌的微血管密度 (microvessel density,MV D)与 COX-2在卵巢癌中的表达的相关性研究,评价其应用价值。

1 资料与方法

1.1 标本来源

回顾性分析佳木斯大学第一附属医院 2008—06～2009— 07手术切除的卵巢肿瘤组织标本 42例,30例卵巢浆液性囊腺癌,卵巢良性肿瘤12例,(其中2例良性畸胎瘤、5例浆液性囊腺瘤及 5例卵巢纤维瘤)。所有患者术前均未接受任何治疗,患者年龄 28～ 75岁,平均 (53.26±13.33)岁。所有标本经10%福尔马林固定,石蜡包埋,连续5μm切片。

1.2 研究方法

使用 ATL-HDI3500GE LOGIQ9、腹部探头频率3.5MHz;阴道探头频率5/7.5M Hz,观察卵巢肿瘤患者病灶的特征和肿瘤血供情况并记录 ,并3次提取 RI值,取平均值。

1.3 主要试剂

兔抗人 COX-2单克隆抗体、SP试剂盒、浓缩型 DAB酶底物显色试剂盒和 EDT A抗原修复液及鼠抗人 CD34单克隆抗体工作液由福州迈新技术开发公司提供。

1.4 免疫组化染色

全部标本均经10%的福尔马林液固定,石蜡包埋切片。COX-2和 CD34免疫组织化学染色按 SP染色试剂盒(福州迈新公司)说明操作,所购抗体均为即用型抗体,染色时均需用 EDTA抗原修复液进行微波修复抗原。切片加一抗前胃蛋白酶37℃消化 1h,采用已知的阳性片作阳性对照,PBS代替一抗作为阴性对照,每一批实验均设有阳性对照和阴性对照。

1.5 结果判定

组织 COX-2表达程度的判断标准:以胞浆内出现棕黄色颗粒视为 COX-2表达阳性细胞;取 5个高倍视野,每个高倍视野计数100个细胞,组织中 COX-2表达阳性细胞百分率＜5%则视为组织 COX-2表达阴性(-),依此类推,5%～25%为弱阳性(+),25%～ 50%为中等强度阳性(++),＞ 50%以上为强阳(+++)。MVD定量方法:按 Weider[1]推荐的方法,首先在低倍镜下扫查整个切片,以染成棕黄色的单个内皮细胞或内皮细胞簇作为一个血管计数,寻找微血管密度最高的肿瘤区域,然后在高倍光镜下,随机计数5个视野内微血管数,取平均值。MVD结果用± s)表示。

1.6 统计学方法

采用 SPSS 13.0统计学软件对各组间差异进行方差分析和两变量间相关分析。P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 各组观察指标比较

①卵巢浆液性囊腺癌的血流频谱呈低阻特征 RI(0.32±0.10),良性肿瘤的血流频谱呈高阻特征 RI(0.61±0.12),两组比较差异,有统计学意义 (P＜0.05)。② COX-2在良恶性肿瘤表达进行比较,COX-2在卵巢浆液性囊腺癌的阳性表达率明显高于良性肿瘤组具有统计学意义 (P＜0.05)。③卵巢良恶性肿瘤 MVD之间比较差异,具有统计学意义(P ＜0.01)。各组观察指标比较见表1。

2.2 免疫组化检测结果分析

卵巢浆液性囊腺癌 MVD于 COX-2有相关性(r= 0.490,P＜0.01),有统计学意义。卵巢浆液性囊腺癌MVD及 COX-2的表达分别见图1及图2。

表1 卵巢浆液性囊腺癌与良性肿瘤观察指标比较(±s)

表1 卵巢浆液性囊腺癌与良性肿瘤观察指标比较(±s)

与卵巢浆液性囊腺癌组比较*P ＜0.05,△P＜0.01,有差异。

观察指标 卵巢浆液性囊腺癌组 良性肿瘤组COX-2 (++ )～ (+++ ) (一)～ (+ )*RI 0.32± 0.100.61± 0.12*MVD 38.73± 9.2014.33± 5.90△

图1 在卵巢浆液性囊腺癌微血管的染色(×400)

图2 COX-2在卵巢浆液性囊腺癌中的阳性表达(×400)

3 讨论

MVD作为肿瘤血管形成的指标,是目前常用的评价肿瘤血管生成情况的方法。肿瘤的生长与扩散取决于血管生成,癌肿因生长迅速、代谢旺盛,需要充足的血流和能量供应,当肿瘤长到3mm时,进一步生长需要新的血管生成,血管生成使肿瘤得以获得足够的营养物质而持续生长,如果没有血管生成,肿瘤的生长将受到限制,原发性肿瘤一般 ＜1～2mm[2]。新生的血管不仅向肿瘤提供充足的营养,导致肿瘤的恶性生长与转移,肿瘤生长阶段血管期的开始标志着肿瘤开始快速生长、局部浸润,最后导致转移的发生[3]。本研究结果表明良恶性肿瘤的生物学基础不同,这为研究良恶性肿瘤提供了理论依据。还发现卵巢浆液性囊腺癌的 MVD(38.73± 9.20)明显高于卵巢良性肿瘤的 MVD(14.33±5.90)(P＜0.01),有着明显差异,但是 MV D的测定只能在术后病理组织检测,不能术前观察肿瘤的血管生成情况,因此彩色多普勒血流显像对卵巢肿瘤术前检测与术后 MVD检测两者相结合,为临床术式预案、判断恶性程度以及抗血管生成治疗方面提供更多有价值的信息。环氧合酶-2(cyclooxygenase2,COX-2)是花生四烯酸转化成前列腺素过程中重要的限速酶,Li等[4]发现 COX-2在转移癌中比正常卵巢组织和原位癌中表达更高,而且 COX-2在肿瘤侵袭的周围和新的转移灶中更易被发现,提示 COX-2可能有促进卵巢癌转移的作用。本研究发现 COX-2在卵巢浆液性囊腺癌中的表达明显高于卵巢良性肿瘤 (P＜0.01),在不同组织分级的卵巢肿瘤组织中,COX-2阳性表达率不同,随着肿瘤的浸润和淋巴结转移的发生,COX-2阳性表达率明显增高,说明 COX-2是在卵巢浆液性囊腺癌的生长过程中有着重要的地位,也表明了 COX-2的阳性表达率的升高可能与卵巢癌变和肿瘤发展密切相关。有浸润或肿瘤向外生长时,肿块轮廓不清,边缘不整齐,恶性肿瘤可能是自病变中央开始新生血管形成的,且新生血管常缺乏平滑肌成分,导致这些血管内血流的低阻力[5],彩色血流在肿瘤的光带分隔或不规则突起上可见血流信号分布。本研究发现卵巢良性肿瘤血流阻力指标 RI明显高于卵巢浆液性囊腺癌,其中有‘乳头样’的结构的 RI值明显减低,我们可以认为,乳头生成可作为恶性程度的危险因素之一,而 RI作为独立预测良恶性肿瘤的指标具有一定的可靠性及可信度。综上表明彩色多普勒应用于卵巢肿瘤的诊断,可以无创、重复地检测卵巢肿瘤新生血管,评价肿瘤血管的特征,与术后病理相对照,更细致地了解其组织病理学基础,为鉴别肿块的良恶性及有效地预测病情的发展起着极其重要的作用。

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