甲肝灭活疫苗生产中聚乙二醇残留量测定

韩中山

(河北省唐山怡安生物工程有限公司 河北 唐山 063020)

甲肝灭活疫苗生产提纯中需用聚乙二醇(PEG)去除中间产品、半成品中的杂蛋白质,但这些产品中也残留了PEG。G现用紫外线分光光度法对PEG进行测定,以使其保持在安全的范围。

1 材料与方法

1.1 主要材料及试剂 PEG6000,0.5mol/L高氯酸溶液,5%氯化钡溶液,1mol/L碘溶液,100μg/mlPEG对照品。

1.2 主要仪器 SPECTROUV-VISAUTO紫外分光光度计Labomed,Inc,U.S.A,离心机。

1.3 检测方法

1.3.1 供试品。取供试品适量,用水稀释,使蛋白质不高于1%,即为供试品溶液。精密量取供试品 1.0mL,加入 0.5mol/L高氯酸溶液 5.0mL,混匀,室温放置 15min,4000r/min,离心10min。取上清液 4mL,加入 5%氯化钡溶液 1.0mL和 0.1mol/L碘溶液 0.5mL,混匀,室温反应 15min,照紫外 -可见分光光度法在用 535nm处测定吸光度。同时以 1mL水代替供试品溶液,同法操作,即为空白对照。

1.3.2 标准曲线。精密量取 10、20、30、40、50μg/mLPEG对照品各 1.0mL,加入 0.5mol/L高氯酸溶液 5.0mL,混匀,自“室温放置 15分钟”起,同供试品方法操作。

以标准 PEG的浓度(X)为横坐标,以相应浓度的吸收度(Y)为纵坐标作图,将 X值、Y值输入计算机,应用统计学软件STA1(14)进行数据处理,得一标准曲线回归方程,由回归方程及样品的稀释倍数计算出样品的 PEG残留量。

2 结果

2.1 标准曲线(99%可信限范围) 取不同浓度的 PEG对照品,测定吸光值,重复 3次,相关系数在 0.9927～0.9993之间。表明 PEG浓度在 10～50μg/mL范围内,PEG对照品溶液与吸收度具有很好的线性关系,见表 1。

表1 标准曲线回归方程及相关系数

表2 6批甲肝灭活疫苗 PEG残留量测定结果

2.2 6批甲肝灭活疫苗 PEG残留量测定结果 应用该方法进行 6批疫苗 PEG残留量测定,每批疫苗检测 6次,结果 PEG残留量均小于 10μg/mL,见表 2。

3 讨论

通过 6批疫苗PEG残留量测定的结果可以看出,PEG残留量均小于 10μg/mL,说明甲肝灭活疫苗生产工艺可行,建议甲肝灭活疫苗残留 PEG残留量质量标准小于 10μg/mL。

通过讨论及实验分析结果说明,PEG残留量测定方法用于甲肝灭活疫苗生产中测定残留 PEG残留量是可行的。