鸡骨草胶囊对大鼠免疫性肝纤维化的治疗作用

吴茜玉

广东省中山市阜沙镇人民医院（528434）

肝纤维化是指肝脏内部弥漫的、细胞外基质沉淀，是细胞外基质合成过多或降解不足的直接后果。肝纤维化是一切慢性肝病的病理学基础，是形成肝硬化的必经阶段。大量研究表明，早期肝纤维化是可以逆转的[1]。阻止肝纤维化的发生和发展，是防止慢性肝脏疾病向肝硬化和肝功能衰竭过渡的关键环节。近年来西医药针对肝纤维化发展的各个环节进行的抗纤维化治疗取得了一定的进展，但是这些药物由于疗效不稳定或不良反应大，临床应用少。因此，从天然药物中提取抗纤维化的药物已成为国内外研究热点。中药的多成分、多途径、多层次、多靶点的独特药理作用，使其在抗纤维化治疗中发挥越来越重要的作用[2]。众多研究表明，肝纤维化治疗中，中药能有效改善患者的症状、体征及肝功能。降低肝纤维化的血清学指标，具有很好的保肝，抗纤维化作用[3]。中药鸡骨草药用干燥全株，有清热利湿、解毒止痛的功效，对急慢性肝炎，肝硬化腹水，胃痛等疗效显著。本研究意在观察复方鸡骨草胶囊对大鼠肝纤维化的治疗效果，提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 动物

SD大鼠，体质量（200±20）g，清洁级，由广西医科大学动物实验中心提供，饲料由广西医科大学试验动物中心提供。

1.2 药品

鸡骨草胶囊（玉林制药厂生产，每粒0.5g，每克药粉相当于8.64g原药材，批号625110），实验时，胶囊内容物用蒸馏水分别将其配成高、中、低3个浓度的混悬液，用于大鼠灌胃；秋水仙碱（西双版纳股份有限责任公司提供，批号060717）。

1.3 试剂

门冬氨基酸转移酶（AST，长春汇力生物技术有限公司生产，批号2006029）；丙氨酸转氨酶（ALT，四川迈克科技有限公司出品，批号0903031）；白蛋白（ALB，四川迈克科技有限公司出品，批号1006141）；总蛋白（TP，四川迈克科技有限公司出品，批号1106161）；丙二醛试剂（MDA，南京建成生物工程研究所第一分所提供，批号20070122）；超氧化歧化酶（SOD，南京建成生物工程研究所第一分所提供，批号20070327）。

1.4 仪器

漩涡混合器XW-80A（上海医科大学仪器厂生产）；722分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）；生产离心机（上海安亭科学仪器厂生产）。

1.5 统计学方法

1.6 实验方法

实验用大鼠，随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱对照组（0.4mL/kg）、鸡骨草胶囊高剂量（2g/kg）、中剂量（1g/kg）、低剂量（0.5g/kg）组。除了正常对照组外，其余各组每只大鼠腹腔注射经过滤、灭菌处理的新鲜猪血清0.5mL，每周2次。以由79.5%单纯玉米粉加20%猪油，0.5%胆固醇混合饲料和30%乙醇为饮料，饲养动物。正常对照组饲以正常饲料和普通饮用水。第4周在正常组和模型组中随机取5只作肝病理学检测，判断肝纤维化模型是否成立。如模型成立则开始给药治疗。1次/d，连续4周，每周称体质量1次，给药期间继续给予猪血清，饲料和30%乙醇并观察有无死亡情况。末次给药结束后称体质量，眼球取血分离血清，观察指标有：①大鼠肝纤维化的病理学改变情况；病理改变评分标准为：肝细胞正常，肝小叶结构清楚，评为1分；肝细胞水变性，评为2分；中度脂肪变性，评为3分；早期肝纤维化，评为4分；晚期肝纤维化，评为5分；肝硬化，评为6分；②血清学指标：AST、ALT；③蛋白质及其他指标：ALB、TP、MDA、SOD。

2 结 果

共有56只大鼠完成实验周期。大鼠腹腔注射猪血清，4周后，在正常对照组和模型对照组中随机取5只大鼠作肝病理学检测，结果表明模型对照组大鼠已出现肝纤维化。

2.1 对猪血清所致肝纤维化大鼠肝脏病理学改变的影响

给药结束后模型对照组大鼠肝脏出现纤维化改变，见图1。鸡骨草高剂量组对猪血清引起的肝脏组织病理学改变有明显的保护作用，见表1。

2.2 对猪血清所致肝纤维化大鼠血清学中AST、ALT的影响

结果发现大鼠血清中的AST、ALT明显升高，鸡骨草高剂量和中剂量组可使大鼠血清升高的AST，ALT明显降低。而鸡骨草低剂量组大鼠血清AST，ALT改善不明显，见表2。

2.3 对猪血清所致肝纤维化大鼠蛋白质及MDA、SOD的影响

发现模型对照组大鼠血清中的TP、ALB降低，鸡骨草高剂量组、中剂量组、低剂量组可使TP、ALB有所提高。模型对照组大鼠的MDA含量增加，SOD含量减少，鸡骨草高剂量和中剂量组均可使其MDA水平降低，SOD水平升高。与模型对照组比较有显著性意义，见表3。

图1 不同组肝脏组织病理学改变

表1 鸡骨草对猪血清性肝纤维化大鼠肝脏组织病理学的影响

表2 鸡骨草对猪血清性肝纤维化大鼠血清AST、ALT的影响

表3 鸡骨草对猪血清性肝纤维化大鼠血清TP、ALB以及MDA、SOD的影响

3 讨 论

猪血清以其中的白蛋白作为异种抗原物质[4]血清，通过免疫反应活化库普弗细胞而引发肝纤维化[5]，猪血清诱导的免疫性肝纤维化与人类肝纤维化的形成原因有一定的相似之处，且较四氯化碳所致肝纤维化持久[6,7]。

根据文献报道，慢性肝病患者部分血清生化指标与肝脏病理分期有显著相关性[8-11]。AST、ALT是用来诊断肝实质损害的主要酶类，正常血清中此两酶活力很低，其活性的高低变化与肝细胞受损的程度相一致，则血清中AST、ALT的活力测定可灵敏的反映肝功能的变化情况，因此AST、ALT常作为肝功能检测的灵敏指标。本实验表明，鸡骨草胶囊高剂量，中剂量可明显降低肝纤维化大鼠血清AST、ALT的活力，说明鸡骨草胶囊可保护肝细胞，减轻肝损伤。

肝脏是合成蛋白质的场所，肝功能异常时，白蛋白含量降低，总蛋白含量不变、降低或升高。因此，蛋白质的含量在一定程度上反应了肝功能的变化情况。实验表明，模型组的总蛋白下降，鸡骨草胶囊高剂量组，中剂量能提高总蛋白的含量，改善肝功能。

MDA是脂质过氧化的产物，其含量可反应脂质过氧化的损伤程度。SOD是自由基清除剂，可抑制脂质过氧化反应，近年来研究表明，超氧阴离子、MDA等可刺激成纤维细胞胶原mRNA的表达和胶原的产生，氧化应激及脂质过氧化是引起肝细胞损伤与肝星状细胞活化的重要机制[12]。本实验表明，模型组的MDA明显增高，SOD明显降低，与正常对照组比较有明显的差异，证实了脂质过氧化在肝纤维化形成过程中的重要作用。其中，鸡骨草胶囊高剂量明显降低MDA含量，鸡骨草中剂量能有效的降低MDA的含量；鸡骨草胶囊的高、中、低剂量组都能显著提高SOD含量，且无剂量上的差别。表明鸡骨草胶囊能很好的降低MDA含量，提高SOD的含量，减轻脂质过氧化的损伤，保护肝脏。同时，鸡骨草全草主要含相思子碱、甾醇、化合物、皂苷、黄酮类、大黄酚、大黄素、甲醚、氨基酸、胆碱、蒽醌类、糖类等化合物[13,14]。其主要有效活性成分为黄酮类和生物碱类物质[15]。毛鸡骨草主要成分为脂肪酸、三萜皂苷、甾体和异黄酮类化合物[16]。以上大部分化学成分具有抗氧合作用，稳定细胞膜，从而维护肝细胞免受氧化损伤所造成肝纤维化。实验也证明，鸡骨草胶囊能改善肝功能，对肝损伤具有明显的保护作用，能显著减轻肝纤维化程度。

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