咪达唑仑共轭体系的研究

2010-06-05符义刚,李莉娥,李杰等

化学与生物工程 2010年10期

咪达唑仑(Midazolam)是一种苯二氮卓类药物，临床上常用于麻醉诱导的术前用药和维持、诊断性或治疗性操作的镇静等。咪达唑仑在强碱条件下不溶，因此临床应用时注射液采用其盐酸盐、口服制剂采用其马来酸盐。咪达唑仑盐酸盐显弱酸性，文献报道其水溶液具有共轭性质，但没有说明引起共轭现象的具体条件，因此在进行药物分析、药物配伍及药代动力学研究时常误将咪达唑仑的共轭化物当成其有关物质[1～3]。

作者以高效液相色谱法为分析手段，考察了溶液pH值、放置时间以及溶液稀释浓度对咪达唑仑共轭体系的影响。

1 实验

1.1 试剂与仪器

咪达唑仑注射液(批号：090301，090508)，宜昌人福药业有限责任公司；甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。

高效液相色谱仪(配有Waters e2695进样系统、Waters 2489紫外可见检测器、Empower色谱数据处理系统)，美国Waters公司；FE20型pH计，Mettler Toledo公司。

1.2 色谱条件

色谱柱：CPS-2 HYPERSIL(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-缓冲溶液(0.1 mol·L-1磷酸与0.03 mol·L-1三乙胺等量混合，用0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液调pH值至3.5)=65∶35，流速1.0 mL·min-1，检测波长220 nm，柱温40℃，进样量20 μL。

1.3 方法

(1)取咪达唑仑注射液(规格2 mL∶2 mg)调成不同pH值样品若干份，均用流动相稀释到0.5 mg·mL-1，放置3 h后测其pH值，然后采用HPLC法测定咪达唑仑的闭环物及开环物，并用归一法计算含量。

(2)取咪达唑仑注射液(规格2 mL∶2 mg)，放置不同时间，然后采用HPLC法测定咪达唑仑的闭环物及开环物，并用归一法计算含量。

(3)取不同规格咪达唑仑注射液，加入不同量的流动相得到不同稀释浓度(以流动相与样品体积比表示)样品(表1)，终浓度均为0.5 mg·mL-1，放置3 h后测其pH值，然后采用HPLC法测定咪达唑仑的闭环物及开环物，并用归一法计算含量。

表1 不同稀释浓度样品的配制

2 结果与讨论

2.1 共轭体系的确定

实验发现，咪达唑仑注射液的液相色谱图中在相对主峰保留时间为0.6 min的地方出现一未知杂质峰，其峰面积随着条件的改变发生变化。采用HPLC-MS方法，测定该杂质分子量为343，经确认为化合物Ⅱ，即咪达唑仑的开环物；主峰分子量为325，经确认为化合物Ⅰ，即咪达唑仑闭环物。说明咪达唑仑水溶液中确实存在共轭平衡体系(图1)。这可能是因为咪达唑仑在酸性溶液中，会在4,5双键处开环，形成相应的开环物，并以开环和闭环的形式均衡存在于溶液中。