Ezrin蛋白和CD44在卵巢癌中的表达及意义

姜永梅，陈爱平 (青岛大学医学院附属医院，青岛市 266003)

卵巢癌是女性生殖系统三大常见恶性肿瘤之一，但死亡率居于首位，卵巢癌的转移是患者死亡的主要原因。因此，人们一直致力于寻找对卵巢癌的侵袭和转移有价值的预测指标。近年来研究发现，Ezrin在肿瘤细胞中异常表达，在恶性肿瘤的浸袭和转移机制中发挥重要作用，而且，Ezrin与肿瘤转移有关的分子相互作用，参与多个环节。CD44是一个跨膜糖蛋白，参与了细胞的黏附和迁移，在很多有转移和侵袭的肿瘤中表达增加。因此，我们探讨了卵巢癌组织中Ezrin和CD44的表达情况及二者的相关性，探索这两种因子与卵巢癌的发生、恶性程度及转移的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源及临床资料

全部标本均取自青岛大学附属医院妇科，2007年2月 ～2008年5月住院的患者手术切除组织，并经病理检查确诊，患者年龄33～74岁，平均年龄53.6岁。分为:(1)卵巢上皮性癌33例(黏液性癌10例、浆液性癌11例、内膜样癌2例、低分化腺癌10例)。全部恶性肿瘤均接受肿瘤细胞减灭术，并按FIGO(1988年)标准行术后病理分期。(2)卵巢良性肿瘤20例(黏液性瘤6例、浆液性瘤8例、良性畸胎瘤6例)。(3)正常卵巢组织20例。

1.2 实验方法

采用免疫组化S-P法。浓缩型鼠抗人Ezrin单克隆抗体购自NewoM2arkers公司。即用型 CD44单克隆抗体购自福州迈新试剂公司。采用免疫组化SP法。实验步骤按说明书进行。用已知的阳性切片作为阳性对照，用PBS液代替一抗作阴性对照。

1.3 结果判定及分析

Ezrin在胞质内表达，呈棕黄色颗粒。按染色强度和阳性细胞表达数，参考Mathew等［1］分级标准分为:(-)，无表达;(+)，＜50%细胞阳性表达;(++)，≥50%阳性表达。CD44以细胞质出现棕色颗粒为阳性细胞，计算每例切片5个高倍视野中阳性反应细胞的百分率，＜10%为(-)，≥10%为(+)。

1.4 统计学处理

Ezrin、CD44在不同卵巢组织中表达的差异及与临床病理因素的关系采用χ2检验，Ezrin、CD44表达的相关性分析采用Spearman等级相关分析法，P＜0.05及 P＜0.01为差异有统计学意义(应用SPSS10.0统计软件)。

2 结果

2.1 CD44和Ezrin在不同卵巢组织中的表达

Ezrin和CD44在不同卵巢组织中的表达，见表1。Ezrin在胞质呈棕色颗粒分布，肿瘤组织表达从局部或灶性至弥漫性均有，以弥漫性为主，正常卵巢组织及卵巢良性肿瘤阳性表达以弥漫性为主，Ezrin在20例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤和33例卵巢癌组织的表达阳性率分别为25.0%(5/20)、35.0%(7/20)和82.7%(24/33)。CD44在胞质呈棕色颗粒分布，CD44在20例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤和33例卵巢癌组织的表达阳性率分别为0(0/20)，25.0%(5/20)和63.7%(21/33)。Ezrin、CD44的表达在正常卵巢组织和卵巢癌以及良性卵巢肿瘤和卵巢癌之间差异有统计学意义(P＜0.05)，正常卵巢和良性卵巢组织之间差异无统计学意义(P ＞0.05)。

表1 Ezrin和CD44在不同卵巢组织中的表达Tab 1 Expression of Ezrin and CD44 in different ovarian tissues

2.2 Ezrin、CD44在卵巢癌中的表达与临床病理参数的关系

Ezrin、CD44在卵巢癌中的表达与临床病理参数的关系，见表2。Ezrin、CD44的表达程度均与卵巢癌的临床分期、腹水转移有关(P ＜0.01)，与卵巢癌的分化程度无关(P ＞0.05)。

表2 Ezrin和CD44的表达与临床病理学参数的关系Tab 2 Correlations between the expression of Ezrin and CD44 and patients’clinical pathological parameters in ovarian cancer

2.3 Ezrin、CD44在卵巢癌中表达的相关性分析

Ezrin、CD44在卵巢癌中表达的相关性分析，见表 3。Spearman等级相关分析显示Ezrin、CD44在卵巢癌中的表达呈显著正相关(P ＜0.01)。

3 讨论

3.1 Ezrin蛋白与卵巢癌的关系

Ezrin蛋白是一种将细胞骨架与细胞膜连接起来的特定蛋白，是 ERM(Ezrin，Radixin，Moesin)家族的一员，也是目前研究最多的一个成员［3］。Ezrin蛋白表达具有相对的组织和细胞特异性，常与Moesin，Radixin共同表达于细胞膜内面，在维持细胞形态和生存方面起重要作用，还参与多种疾病的发病过程。它和一些肿瘤的发生关系密切，主要通过与肿瘤细胞表面黏附分子发生作用来调节肿瘤细胞的特性，影响肿瘤的分化、侵袭和转移［4］。Ezrin在许多肿瘤组织中高表达。Ezrin对卵巢癌细胞的浸润是必需的，Ezrin表达是卵巢癌浸润生长的独立危险因素，在SKOV-3细胞中用 RNA干扰技术阻止 Ezrin表达后，SK2OV-3细胞的浸润性生长受到抑制［5］。

表3 Ezrin、CD44在卵巢癌中表达的相关性Tab 3 Correlations of the expression of Ezrin and CD44 in ovarian cancer

体外细胞培养表明，Ezrin的缺失与肿瘤的运动能力和侵。李琼等［6］对乳腺癌的研究也发现，Ezrin在乳腺浸润性导管癌中的表达明显高于良性病变，且有淋巴结转移者比无转移者更明显，认为Ezrin在乳腺癌中对肿瘤发生淋巴结转移有重要促进作用，可以作为预测乳腺浸润性导管癌淋巴结转移的肿瘤标志物。Song等［7］研究雌激素(E2)对上皮性卵巢癌细胞转移的作用时发现，E2能诱使细胞系SK2OV3和DOV13侵袭表型的出现，包括伪足伸出，细胞膜皱褶形成，同时使肿瘤细胞过表达Ezrin，并易位到细胞的边缘。而Ezrin过表达与 E2诱导的肿瘤细胞侵袭行为显著相关，E2可能通过诱使瘤细胞过表达Ezrin而赋予了侵袭能力。

我们的研究结果表明，Ezrin在卵巢癌中的表达显著高于正常和良性卵巢组织，并且其表达率和表达强度与肿瘤的临床分期和腹水转移情况密切相关，即随着卵巢癌恶性程度和临床分期的增高，Ezrin的表达随之增加，这一结论说明 Ezrin蛋白参与了卵巢癌的发生和转移过程。可见，在临床中，通过研究Ezrin表达水平可以判断卵巢癌的转移。治疗方面可以利用 RNAi技术［8］抑制 Ezrin表达，或者干扰 Ezrin活性，均能使癌细胞侵袭力下降，转移受阻。Ezrin可望成为抗肿瘤转移的有效生物靶点。

3.2 Ezrin、CD44与卵巢癌的侵袭、转移

卵巢癌具有癌细胞从癌体脱落，进入腹水，继而在腹膜、网膜、肠浆膜表面广泛种植转移等特点，因此它与细胞黏附分子的关系近年来倍受重视。其中以CD44整合素与卵巢癌的关系最为密切。CD44是分布极为广泛的细胞表面跨膜糖蛋白，按分子量大小可分为80～90 kD、110 kD～160 kD和180～215 kD 3类［9］。CD44是一个多功能的细胞表面黏附分子，作为透明质酸的受体，直接影响到肿瘤细胞与细胞外基质的结合能力，进而影响肿瘤的侵袭和转移［10］。CD44与透明质酸的受体结合并锚定在宿主细胞外间质及基底膜上，同时与毛细小静脉的高柱状内皮细胞结合，使脱落细胞进入循环和淋巴系统。另外，透明质酸降解产物也可促进细胞脱落和启动血管发生，为癌细胞侵润、转移奠定基础［11］。

近些年的研究表明，Ezrin与这些膜受体蛋白分子均具有复杂的相互作用［12］。Ezrin的过表达不仅影响肿瘤转移的某个环节，而且可能参与到肿瘤转移的多个环节，如:从原发灶脱落、侵入周边组织、侵入脉管系统、穿过基底膜、选择性地在靶器官增殖形成转移灶等。这说明Ezrin有可能作为肿瘤转移各环节、各通路的中心调控因素发挥作用。有研究发现，肝细胞生长因子刺激后 CD44过表达，导致Ezrin集中［13］，Ezrin改变CD44的胞质尾区(Cytop lasmic tail)并结合后与细胞骨架蛋白作用，是肿瘤转移的前提条件［14］。我们的研究发现，CD44在卵巢癌中的阳性表达率显著高于正常卵巢组织和良性卵巢组织，且其阳性表达与肿瘤的临床分期、腹水转移有关，CD44的表达Ezrin的表达间存在显著正相关，证实了 Ezrin发挥作用需要与肿瘤转移有关的粘附分子相互作用，二者的联合检测有助于综合判断卵巢癌的恶性程度和转移潜能。

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