舒肝益脾颗粒中五味子醇甲的含量测定

李春生

舒肝益脾颗粒系山茵陈、五味子、茯苓、山楂、黄芪等 6味中药组成的复方中药制剂具有清热化湿,舒肝利胆的功效,原标准中没有制定含量测定的方法,为了更有效的控制该制剂的质量,笔者采用高效液相色谱法(HPLC法)测定,效果满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilentll00series高效液相色谱仪。

1.2 试药 五味子醇甲对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110857-200203),甲醇为优级纯,其余试剂均为分析纯;水为二次重蒸馏水;舒肝益脾颗粒,五味子药材均为本院制剂室提供。

2 试验方法

2.1 色谱条件 色谱柱 DiamonsiCl8(4.6 mm～250 mm,5μm);流动相为甲醇-水(64:36);流速为 1.0ml/min;柱温30℃,检测波长为 250 nm。理论板数按五味子醇甲峰计算为5732。在此条件下所得色谱图见图 1,结果表明,五味子醇甲色谱峰与阴性样品溶液色谱峰没有重叠,分离良好。

图1

图 1 高效液相色谱图

2.2 溶液的制备 ①对照品溶液:精密称取五味子醇甲对照品适量,加甲醇制成每 lml含 20ug的溶液,即得;② 供试品溶液:取本品细粉 5 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 100ml,密塞,称定重量,超声处理 30 min,放冷,再称重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取滤液 50m l,蒸干,残渣加水 20ml使溶解,置分液漏斗中,加正己烷提取 5次(20、20、20、10、10min),合并正已烷提取液,低温蒸干 ,残渣加甲醇定容于 5ml量瓶中,摇匀,即得;③阴性对照品溶液:以缺五味子药材的空白样品,按同样条件提取制备阴性对照品溶液。

2.3 线性关系 分别精密吸取五味子醇甲对照品溶液(0.03864ms/m l)1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 μl,按上述色谱条件测定峰面积积分值,以五味子醇甲的进样量(μg)为横坐标,以峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,得回归方程为Y=2049.03X-3.703R=0.9999(n=5),结果表明,五味醇甲进样量在 0.04-0.35μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 精密吸取 0.01932mg/ml的对照品溶液,连续进样 5次,每次 10μl,测定五味子醇甲峰面积值为392.1697,RSD=0.38%。

2.5 重现性试验 取同一批样品(批号:5)依本法独立测定5次,结果:五味子醇甲含量平均值为 31.5μg/g,RSD=0.94%。

2.6 稳定性试验 取同-供试品溶液,分别于:0,4,8,18,24 h重复测定,RSD为 1.89%,结果供试品溶液中五味子醇甲的含量在 24 h内基本稳定。

2.7 回收率试验 精密取同法测定的已知含量的舒肝益脾颗粒(批号 1,含量 32μg)适量,加入五味子醇甲对照品溶液(0.0966mg/m1)0.75ml,依法测定,计算回收率。见表 1。平均回收率为 99.08%,RSD=0.50%(n=5),表明本法回收率高。

表1 加样回收率情况

表2 舒肝益脾颗粒 5批样品含量测定情况

2.8 样品的含量测定 依法测定本院提供样品 5批,结果见表 2五批样品的平均含量 32.22μg/g,考虑到生产及工艺中的损失,暂定本品每 1 g含五味子的五味子醇甲(C24H32O7)不得少于 25μg。

3 讨论

3.1 在实验过程中,曾经用过不同的色谱柱,①Diamonsi C18(250mm×4.6mm)(迪马公司);②Shim-packODS(150mm×6.0mm)(日本岛津);③ZORBASExtend-C18(250 mm×4.6 mm)(美国安捷伦)。经比较后,①的效果最好。

3.2 用流动相为甲醇-水(64:36);流速为 1.0ml/min;柱温30℃,检测波长为 250nm。分离效果最好且没有干扰峰。

3.3 本方法简便、准确、精密度高、重现性好,能够有效的控制舒肝益脾颗粒的质量。

[1］药典委员会.中华人民共和国药典(一部).化学工业出版社,2000:48-49.

[2］王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究.中国医药科学技术出版社,2004:28-31.