落新妇提取物的制备与质量控制方法研究

2010-06-01王锦红吴朦俊

中国药业 2010年8期

王锦红，吴朦俊

（贵州省毕节地区药品检验所，贵州毕节 551700）

落新妇具有活血、散瘀、止痛的功效，用于治疗跌打损伤、风湿痹痛、筋骨疼痛。落新妇提取物在愈伤灵胶囊中作为原料药入药，原标准中无其制备和质量控制方法[1]。为了有效控制制剂质量，现将其制备工艺及质量控制方法报道如下。

1 仪器与试药

TQWZ提取浓缩机组（浙江瑞安回方药化机械有限公司）；美国SSI型高效液相色谱仪，包括Model 500型可变波长紫外检测器，ScriesⅢ型输液泵，SDC15型注温箱，Anastar工作站；薄层层析硅胶G（青岛海洋化工厂）；ZF-Ⅰ型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）。岩白菜素对照品（批号为110765-200205，中国药品生物制品检定所，供含量测定用）；甲醇（色谱纯），其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 制备方法

取落新妇根，加30%的乙醇回流提取3次，第1次加5倍量的30%的乙醇，浸渍1 h，第2次、3次各加4倍量30%的乙醇，每次提取2 h；滤过，合并提取液，滤液回收乙醇，挥净残留乙醇至相对密度为1.01（80℃测），4℃下冷藏72 h；倾出上层母液，将沉淀抽滤得黄色结晶，结晶于80℃干燥（水分在5.0%以下），再将母液4℃下冷藏36 h，弃去母液，将沉淀抽滤得黄色粉末，80℃干燥，合并两次干燥物，称重，即得落新妇提取物。

2.2 一般质量控制

性状：本品为黄色的结晶和粉末，味苦。鉴别[2]：取落新妇提取物15 mg，加5 mL甲醇使溶解，作为供试品溶液。取岩白菜素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱（TLC）法[2005年版《中国药典（一部）》附录ⅥB]试验，吸取上述2种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水（11∶6∶2）的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同的颜色荧光斑点（图1）。

检查[3]：取本品，在105℃干燥至恒重，水分不得超过5.0%。

图1 薄层色谱图

2.3 岩白菜素含量测定[2]

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Lichrospher 5-C18柱（200 mm ×4.6 mm，5 μm，江苏汉邦）；流动相:甲醇 - 水（24 ∶76）；流速:1.0 mL/min；柱温：30 ℃；检测波长：275 nm；进样量：5 μL。在此条件下，理论塔板数以岩白菜素峰计算应不低于2 500，色谱图见图2。结果表明，岩白菜素色谱峰与阴性对照品溶液色谱峰没有重叠，对照品及供试品溶液色谱峰形良好。

图2 高效液相色谱图

2.3.2 溶液制备

精密称取岩白菜素对照品适量，加甲醇制成每1 mL含2.0 mg的溶液，即得对照品溶液。取落新妇提取物约50 mg，精密称定，置10 mL量瓶中，加甲醇适量使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3.3 测定法

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.3.4 方法学考察

线性关系考察：精密吸取质量浓度为1.96 mg/mL的对照品溶液 1.0，2.0，3.5，5.0，6.5，9.0，10.0 μL，以峰面积 Y 和进样量 X（μg）进行线性回归，得线性回归方程 Y=889 331.37X-80 636.99，r=0.999 5（n=7）。结果表明，岩白菜素进样量在 1.96 ～19.60 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取质量浓度为1.96 mg/mL的对照品溶液，重复进样6次。结果峰面积的 RSD为0.56%（n=6），表明仪器精密度良好。

重现性试验：精密称取同一批（批号为0901）样品6份，每份50 mg，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法进样。结果平均相对百分含量为61.34%，RSD=0.92%（n=6）。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于常温条件放置0，2，4，8，12 h时依法进样。结果峰面积的 RSD为0.85%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

加样回收试验：分别精密称取已知含量的样品（批号为0901，含量为61.34%）6份，每份25 mg，精密加入质量浓度为1.96 mg/mL对照品溶液10，8，6 mL，按供试品溶液制备方法制备溶液并依法进样，测定含量，计算回收率。结果见表1。

2.3.5 样品测定

按拟订方法测定样品10批。结果见表2。

3 讨论

岩白菜素是落新妇药材的主要活性成分，在甲醇中溶解，在水或乙醇中微溶，在热的水或乙醇中溶解性增强，故以岩白菜素作质量控制指标。采用薄层色谱法鉴别提取物中岩白菜素，色谱分离度好；用烘干法可作水分控制；用高效液相色谱法测定落新妇提取物中岩白菜素含量，方法简便、灵敏、重现性好。因此，落新妇提取物的质量控制方法可行。

根据10批样品的测定结果，其工艺合理稳定。为了有效控制落新妇提取物的质量，暂订落新妇提取率应不低于25.0 g/kg，落新妇提取物含岩白菜素应不低于45.0%。