TNF-α和 EGFR在胃癌中表达的相关性研究

张天彪,赵 滢,关一夫*

(1中国医科大学基础医学院,沈阳 110001；2中国医科大学附属盛京医院)

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是一种主要由单核巨噬细胞产生的多肽细胞因子,其主要生物学活性就是对某些肿瘤细胞的细胞毒作用[1]；表皮生长因子受体(EGFR)是肿瘤细胞增殖、分化和抗凋亡过程中的重要调节因子,其高表达可以促进肿瘤细胞增殖、黏附、侵袭和转移,诱导肿瘤新生血管形成[2]。2009年 1～12月,我们应用免疫组织化学方法检测68例胃癌、癌旁组织及 30例正常胃黏膜组织中两者的表达情况,探讨其与胃癌发生、发展的关系及临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 胃癌标本均取自中国医科大学附属盛京医院胃肠营养外科,其中男 35例、女 33例,年龄 33～72岁,平均 56岁。所有患者术前均未接受放化疗,以全国胃癌病理研究协作组规定作为病理诊断和分级标准。癌旁组织为距肿瘤≤1 cm；另取 30例正常胃黏膜组织作为对照组,标本用 4%多聚甲醛固定,常规石蜡包埋,连续石蜡切片,厚度 4 μm,常规 HE染色。

1.2 主要试剂 鼠抗人 TNF-α和 EGFR的单克隆抗体购于 Santa Cruz公司；免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒购于武汉博士德生物工程有限公司。

1.3 免疫组织化学 采用免疫组织化学 SABC法,第一抗体稀释倍数:TNF-α为 1∶200,EGFR为1∶100,以 PBS替代第一抗体作为阴性对照。TNF-α和 EGFR阳性细胞表现为呈棕黄色颗粒的阳性反应产物,连续观察 10个高倍视野,计数每高倍视野100个细胞中的阳性细胞数,计算其平均值。阳性细胞数 ＜10%为组织表达阴性(-),阳性细胞数10%～25%为低度表达(+),阳性细胞数 26% ～50%为中等度表达(++),阳性细胞数 ＞50%为强阳性表达(+++)。

1.4 统计学方法 采用 SPSS 13.0软件处理系统分别进行分析,每组实验重复 3～4次,以 P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 TNF-α和 EGFR蛋白的表达情况 TNF-α阳性染色定位于细胞质,呈棕黄色颗粒,表达较强时为深棕黄色,部分胞膜有着色,阳性细胞由远癌区向中心区呈逐渐增多趋势。正常胃黏膜、癌旁组织和胃癌组织中 TNF-α的阳性表达率分别为 16.7%(5/30)、33.8%(23/68)及 54.4%(37/68)。 EGFR表达主要分布于细胞膜和细胞质。正常胃黏膜、癌旁组织和胃癌组织中 EGFR的阳性表达率分别为6.67%(2/30)、14.7%(10/68)及 51.5%(35/68)。三组 TNF-α、EGFR表达差异显著(P＜0.05)。

2.2 TNF-α和 EGFR蛋白的表达与胃癌临床病理特征的关系 见表1。

2.3 相关性分析 68例胃癌组织中 TNF-α和 EGFR表达之间呈正相关(r=0.479,P=0.026)。

3 讨论

表1 TNF-α和EGFR的表达与胃癌临床病理特征的关系[例(%)]

TNF-α是一种多肽激素,对肿瘤细胞具有一定的杀伤作用,并可使肿瘤发生坏死,具有明显的抗肿瘤作用 。 TNF主要包括 TNF-α和 TNF-β。 TNF-α与 TNF-β的细胞来源及其蛋白质的高级结构虽有差别,但其一级结构有 30%同源,生物学活性也极为相似。TNF-α除介导肿瘤出血坏死,杀伤肿瘤细胞外,还具有诱发炎症反应、免疫调节和抗病毒等作用[3]。本研究显示,胃癌组织中较癌旁组织和正常胃黏膜具有较高水平 TNF-α表达,且随胃癌组织分化程度不同而递增。原因首先是肿瘤的发生可诱导体内淋巴细胞过度释放 TNF-α,其次肿瘤细胞自分泌也导致患者的 TNF-α升高[4]。由此推测 TNF-α可通过自分泌和旁分泌过程参与并促进胃癌的发生发展,对其监测可间接反应胃癌的严重程度及预后。胃癌伴远处转移者 TNF-α显著提高,提示其在肿瘤转移中参与了一定机制。

EGFR与配体结合,可以激活酪氨酸激酶信号通路和 PI3K/Akt信号通路,并上调 VEGF和 FGF表达,所以在此通路的过度激活将促进肿瘤的增殖、侵袭性及转移能力[5]。本研究结果中,胃癌患者EGFR水平显著高于癌旁组织和正常胃黏膜组织；且胃癌伴远处转移者 EGFR升高明显；胃癌 EGFR表达和浸润及淋巴结转移有关,但和组织学分化无关。侵至浆膜层并伴有淋巴结转移组中,EGFR表达明显提高,提示随着 EGFR表达的进一步增加,可不断刺激细胞的增殖,从而促进肿瘤的进展及淋巴结的转移。上述现象均说明 EGFR参与了胃癌的发展,EGFR在侵袭浆膜组及具淋巴结转移组的阳性表达率较高,显示侵袭力强者 EGFR显著增加。胃癌的预后虽然受到多种因素影响,肿瘤的浸润深度和淋巴结转移无疑对预后起决定作用[6],EGFR的检测可作为胃癌发生发展和浸润、转移程度及预后判断的一个重要指标。

综上所述,TNF-α和 EGFR在胃癌中的表达呈正相关,两者表达水平的联合检测可以作为胃癌诊断、病情分析的一种生物学指标。

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