不同厂家华法林钠片的质量评价

黎月玲，古淑仪，陈青青

（1.广州市红十字会医院，广州市 510220；2.广东药学院，广州市 510006）

华法林钠（Warfarin sodium）为香豆素类口服抗凝药，是临床常用的口服抗凝药物。目前临床使用的华法林钠片有国内、外不同的生产厂家。据临床反映，国产华法林钠片的临床疗效与进口品比较有差异，且不同厂家产品之间的疗效、不良反应差异也较大。由此导致的后果是患者从进口产品换为国产品或国产不同产品之间更换时，往往需要调整剂量，否则会影响治疗效果或易致出血。这对于需长期服用华法林的患者造成极大的不便，也存在安全隐患。为了解目前市面销售的华法林钠片的质量，本文对国内、外4厂家的华法林钠片进行质量对比，为临床合理用药提供参考。

1 仪器与试药

RCZ-5A药物溶出仪（天津大学精密仪器厂）；高效液相色谱仪，包括515型泵、996二极管阵列检测器、柱温箱、Millennium工作站（美国Waters公司）；AEG-220电子分析天平（日本岛津制作所）；101-2-S型电子恒温鼓风干燥箱、TSHZ-A台式水浴恒温振荡器（上海跃进医疗器械厂）；HN10068超声清洗器（广州华南超声设备厂）；YXI-3恒温水浴锅（广州市越秀区医疗器械厂）。

华法林钠片：A厂，产地：芬兰，批号：1212624，规格：每片3 mg；B厂，产地：河南，批号：0701161，规格：每片2.5 mg；C厂，产地：山东，批号：703007KA，规格：每片2.5 mg；D厂，产地：上海，批号：070901，规格：每片2.5 mg；华法林钠对照品（齐鲁制药有限公司，含量：102.72%）；亚苄基丙酮（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20070727）；对羟基苯甲酸丙酯（天津基准化学试剂有限公司，批号：20070920，含量：＞99.5%）；甲醇为色谱纯；水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定

2.1.1 溶液的制备。溶液Ⅰ：取磷酸二氢钾1.36 g，加水50 mL溶解，加入0.2 mol·L－1氢氧化钠溶液39.1 mL，再加水至200 mL，以氢氧化钠溶液或磷酸调至pH（7.4±0.1），得磷酸盐缓冲液。取上述磷酸盐缓冲液与乙腈以85∶15的比例混合均匀，得溶液Ⅰ。

内标液：取对羟基苯甲酸丙酯适量，精密称定，加乙腈溶解，使成浓度为1 mg·mL－1的溶液。

对照品溶液：取华法林钠约31.2 mg，精密称定，置于100 mL容量瓶中，加0.1 mol·L－1氢氧化钠溶液 39 mL溶解，再加入0.2 mol·L－1磷酸二氢钾溶液25 mL，加水稀释至刻度，摇匀。精密量取15.0 mL置于50 mL容量瓶中，加内标液5.0 mL，以溶液Ⅰ稀释至刻度。

2.1.2 色谱条件。色谱柱：Hypersil C18（25 cm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（68∶32∶1）；流速：1.0 mL·min－1；测定波长：280 nm。

2.1.3 样品含量测定。按美国药典（USP 30）[1]的方法和标准进行测定。取华法林钠片20片，研成粉末，取粉末适量（约相当于华法林钠5 mg），精密称定，置于50 mL容量瓶中，加入内标液5 mL及溶液Ⅰ30 mL。超声10 min，振摇60 min。加入溶液Ⅰ稀释至刻度，滤过，得供试液。取对照品溶液、供试液各20 μL，分别注入色谱仪，记录峰面积，计算华法林钠的含量，应为标示量的95.0%～105.0%。4厂家产品标示百分含量见表1。

表1 4厂家华法林钠片含量、含量均匀度、有关物质及溶出度测定结果Tab 1 Determination of content，content uniformity，related substances and dissolution of Warfarin sodium tablets from four pharmaceutical manufacturers

2.2 含量均匀度

按USP 30的方法进行检查[1]。每个厂家的产品各抽取10片，按照“2.1”项下的操作逐片测定含量，计算平均标示百分含量（），再根据接受值（AV）公式计算AV。若AV≤15.0%，则判为合格。4厂家华法林钠片的AV值见表1。

2.3 有关物质检查

参照英国药典（BP 2003）[2]，取粉碎后的华法林钠片适量（约相当于华法林钠40 mg），加水30 mL，振摇15 min，再加盐酸0.1 mL。以氯仿萃取3次，每次10 mL，提取液以无水硫酸钠脱水，合并萃取液，置于恒温水浴锅上蒸干（40℃），残渣以丙酮2 mL溶解，得溶液a。精密量取溶液a 0.01 mL，以丙酮稀释至2.0 mL，得溶液b。取亚苄基丙酮适量，以丙酮溶解，制成0.0020%（W/V）的溶液c。取溶液a、b、c各20 μL，在同一硅胶GF254薄层板上分别点样，以氯仿-环己烷-冰醋酸（5∶5∶2）为展开剂，展开，晾干，置于紫外光灯（254 nm）下检视。在溶液a色谱中，在与亚苄基丙酮斑点相应的位置上若有斑点，斑点颜色不得深于溶液c（限度为0.0020%）；其余杂质斑点颜色不得深于溶液b的主斑点（限度为0.5%）。

薄层色谱结果显示，在4厂家的溶液a色谱中，在与亚苄基丙酮斑点相应的位置上，所显斑点的颜色均浅于溶液c，即亚苄基丙酮含量均低于0.0020%；但其余杂质斑点中均有深于溶液b主斑点的情况，即未知杂质的含量大于0.5%，结果详见表1。

2.4 溶出度测定

2.4.1 溶液的制备。内标液：取对羟基苯甲酸丙酯适量，精密称定，加水溶解，使每1 mL中对羟基苯甲酸丙酯含量约为华法林片剂标示量的1/400，必要时可加少量甲醇助溶。

标准贮备液：取华法林钠适量，精密称定，加水溶解使成浓度为0.0011L mg·mL－1溶液（L：华法林片剂中华法林钠的标示量（mg））。必要时可加入少量0.1 mol·L－1氢氧化钠溶液助溶。

标准溶液：精密量取标准贮备液3.0 mL，加入内标溶液1.0 mL，混匀，即得。

供试液：取溶出度试验溶液适量，滤过，取续滤液3.0 mL，加入内标溶液1.0 mL，混匀，即得。

2.4.2 色谱条件。同“2.1.2”项。

2.4.3 溶出液制备及测定。同一批号的华法林钠片各取6片，照USP 30溶出度测定法[1]中的桨法进行测定。溶出介质为纯化水，体积900 mL；转速 50 r·min－1；温度（37±0.5）℃。于30 min时从溶出缸中抽取试验溶液适量，滤过。取续滤液3.0 mL，加入内标溶液1.0 mL，制成供试液。取标准溶液、供试液各40 μL，注入色谱仪，测定，以内标法计算溶出量，最后求出溶出度。30 min的溶出度应不少于标示量的80%。

2.4.4 结果。4厂家华法林钠片的溶出度见表1。对所得数据进行单因素方差分析（F-检验），结果4厂家的华法林钠片溶出度均数之间有极显著性差异；再作进一步的多重比较，结果A与B、A与C、B与C、B与D、C与D之间均数差别均具有高度显著性，A与D均数不具有显著性差异。溶出度的方差分析见表2，多组均数间两两比较结果见表3。

表2 4厂家华法林钠片溶出度的方差分析Tab 2 Variance analysis on dissolutions of Warfarin sodium tablets from four pharmaceutical manufacturers

表3 多组均数间两两比较结果Tab 3 Pairwise comparisons of mean data between groups

由表2和表3可见，经方差分析和多重比较可知，A厂和D厂的差异不具有显著性，二者与B厂的差异则具有统计学意义。按溶出度大小排列为A厂＝D厂＞B厂＞C厂。

3 讨论

华法林钠片的质量标准在《中国药典》（2005年版）、USP 30、BP 2003均有收载[1～3]，各药典所用的方法和标准有所差异。本文通过比较不同国家的标准，结合实际情况，选择了标准较高、操作相对简便的方法，从有关物质、溶出度、含量均匀度和含量等方面对4厂家的华法林钠片进行质量对比研究。

在含量测定方面，无论从方法还是限度范围，USP 30要求最为严格。因此，本试验采用USP 30的方法，结果4厂家的产品均符合USP 30的要求。

含量均匀度检查，BP 2003采用计数法，以实测含量的平均值表示，而USP 30和《中国药典》（2005年版）则采用计量法，根据统计量进行判断。从统计学意义上讲，计量法比计数法的科学性强，错判率低；另有研究结果显示USP 30以AV的大小为判断标准，判断准确性较《中国药典》（2005年版）高[4，5]。因此，本试验应用USP 30的标准作含量均匀度检查，结果4厂家的产品均符合USP 30的要求，但值得注意的是，C厂产品的含量均匀度判定值——AV接近界限值15.0%。

对于有关物质检查，USP 30未作规定，《中国药典》（2005年版）和BP 2003则采用薄层色谱法进行检查，BP 2003对已知杂质和未知杂质均设立了限量要求，对杂质的控制比《中国药典》（2005年版）更为明确和严格。因此，本试验采用BP 2003的方法对有关物质进行检查，结果4厂家产品中亚苄基丙酮（杂质之一）含量均小于0.0020%，但其它未知杂质限量则超过0.5%的限度范围。华法林钠片的不良反应是否与未知杂质有关，有待进一步研究。

在溶出度检查中，以USP 30的规定最为严格。本试验采用USP 30的方法作溶出度检查。从溶出度试验结果可知，A厂和D厂的片剂30 min内几乎全部溶解，B厂片剂的溶出度稍低，但仍大于标示量的80%，所以A、B、D厂的华法林钠片均符合USP 30的要求。C厂产品不符合USP 30及《中国药典》（2005年版）的要求。结果，A厂与D厂的溶出度比较无显著性差异，二者与B厂比较具有统计学意义差异。溶出度大小排列为A厂＝D厂＞B厂＞C厂。溶出度的差异可能与不同厂家所用的辅料不同、生产工艺不同等因素有关。

体外溶出度的大小反映了药物从制剂中溶出的速度和程度，并与口服生物利用度密切相关。相同剂量下，溶出度大的片剂往往能产生较强的药理效应或毒理作用，临床上观察到的疗效差异可能与此相关。

综上所述，4厂家的华法林钠片在质量上存在一定差异，进口品与某一国产品质量接近，并优于其它国产品。总体质量评价为A厂与D厂好于B厂，更优于C厂，C厂的产品质量较差。

[1]美国药典委员会编.美国药典[S].第30版.USP，2006：3471、附录711.

[2]英国药品委员会编.英国药典[S].2003版.BP，2003：2990.

[3]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：204.

[4]陶巧凤，赵昱，罗旭.《美国药典》29版含量均匀度检查方法的统计特性分析[J].中国药学杂志，2007，42（12）：932.

[5]孙苓苓.中国药典含量均匀度检查法与美英日药典的比较[J].中国药品标准，2003，4（3）：13.