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藕节炭的TLC鉴别和浸出物含量测定Δ

2010-05-22刘善新靳光乾郭承军刘欣欣山东省中医药研究院济南市5004山东中医药大学济南市50355

中国药房 2010年7期
关键词:藕节谷甾醇白桦

刘善新,靳光乾,郭承军,刘欣欣(.山东省中医药研究院,济南市 5004;.山东中医药大学,济南市 50355)

藕节为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根茎节部,具有止血、祛瘀的作用,用于治疗吐血、咳血、尿血、衄血、崩漏。2005年版《中国药典》(一部)记载藕节的加工炮制方法为加工制成藕节炭,但藕节炭的质量标准比较简单,仅有加工程度描述,缺乏鉴别、浸出物、含量测定等项[1]。为此,笔者对不同地区市售藕节炭的鉴别及浸出物进行了研究,旨在为制定藕节炭的质量标准提供参考依据。

1 仪器与试药

BP211D型电子天平(德国Sartorius公司)。3-表白桦脂酸标准品(笔者从藕节炭中提取分离制得,纯度:98.57%);β-谷甾醇对照品(中国药品生物制品鉴定所,批号:110851-200202);乙酸乙酯、乙醇等试剂均为分析纯。藕节炭为购于全国不同地区的市售品,粉碎过50目筛,备用;生藕节购于济南建联药材公司,经山东中医药研究院钟方晓研究员鉴定为真品,炒制成藕节炭,粉碎过50目筛,备用。

2 方法与结果

2.1 藕节炭鉴别

2.1.1 供试品溶液的制备:取各地市售藕节炭样品1.0 g,分别加入乙酸乙酯50 mL,回流提取0.5 h,过滤,滤液浓缩至约2 mL,转移至5 mL量瓶中,以乙酸乙酯稀释至刻度,摇匀,即得。

2.1.2 标准、对照品溶液的制备:(1)3-表白桦脂酸标准品溶液的制备:称取3-表白桦脂酸标准品4.21 mg,置2 mL量瓶中,加乙酸乙酯至刻度,制成每1 mL含2.11 mg的3-表白桦脂酸标准品溶液。(2)β-谷甾醇对照品溶液的制备:称取β-谷甾醇对照品2.46 mg,置2 mL量瓶中,加乙酸乙酯至刻度,制成每1 mL含1.23 mg的β-谷甾醇对照品溶液。

2.1.3 薄层层析:照薄层色谱(TLC)法[1]试验。精密吸取供试品溶液、3-表白桦脂酸标准品溶液各5µL,分别点于同一以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,以10%硫酸乙醇喷雾,105℃加热显色至斑点清晰,自然光下检视,供试品色谱中在与标准品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点;365 nm紫外光灯下检视,供试品色谱中在与标准品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。所得TLC见图1。

精密吸取供试品溶液、3-表白桦脂酸标准品溶液、β-谷甾醇对照品溶液各5µL,分别点于同一以0.3%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(8∶5)为展开剂,展开,取出,晾干,以10%硫酸乙醇喷雾,105℃加热显色至斑点清晰,自然光下检视,供试品色谱中在与标准、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点;365 nm紫外光灯下检视,供试品色谱中在与标准、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点。所得TLC见图2。

2.2 浸出物测定

2.2.1 提取溶剂乙醇百分数的确定:取自制藕节炭样品2.0 g,精密称定,分别精密加入95%、85%、75%、65%、55%乙醇50 mL,按2005年版《中国药典》(一部)浸出物测定法项下热浸法[1]操作,结果见表1。

图1 藕节炭的TLC(以3-表白桦脂酸为对照)Fig 1 TLC of charred N.nucifera(3-epibetulinic as reference substance)

图2 藕节炭的TLC(以3-表白桦脂酸、β-谷甾醇为对照)Fig 2 TLC of charred N.nucifera(3-epibetulinic and β-sitosterol as reference substance)

表1 不同浓度乙醇浸出物测定结果(n=3)Tab 1 Result of determination of the extract under different alcohol concentration(n=3)

由表1可见,55%乙醇不易过滤,95%、85%、75%乙醇虽然易于过滤,但其对应的浸出物含量偏低。结合藕节炭活性部位筛选情况,确定采用65%乙醇作为溶剂进行浸出物测定。

2.2.2 浸出物含量测定:取各地市售藕节炭样品2.0 g,精密称定,分别加入65%乙醇50 mL,按2005年版《中国药典》(一部)浸出物测定法项下热浸法[1]操作,测定各地藕节炭的浸出物含量,结果见表2。

表2 藕节炭浸出物含量测定结果Tab 2 Determination of the extract of charred N.nucifera

3 讨论

文献报道生藕节中含有3-表白桦脂酸[2]。目前,藕节、藕节炭止血有效成分尚不明确。笔者从藕节炭的乙酸乙酯提取部位中分离出3-表白桦脂酸、β-谷甾醇,并以3-表白桦脂酸、β-谷甾醇为对照鉴别藕节炭。结果表明,9个市售藕节炭样品在与标准、对照品色谱相应的位置上显相同颜色的斑点,而福州藕节炭斑点不明显,扩大点样量斑点亦不清晰;这是否与加工工艺有关有待研究,因为其它藕节炭样品均为原药材直接炒制而成,而福州藕节炭为藕节切成片状后的加工品。

对自制藕节炭样品采用毛细管凝血法进行止血活性部位筛选,结果乙酸乙酯、水提取物部位均具有止血活性。笔者在试验中曾拟以乙酸乙酯、水为溶剂,取藕节炭2.0 g,按2005年版《中国药典》(一部)浸出物测定法项下热浸法[1]操作,分别测定藕节炭的乙酸乙酯、水浸出物。结果,乙酸乙酯浸出物含量太低,测定误差较大;水浸出物测定时过滤困难,不便于操作。因此,考察了系列乙醇百分数为溶媒,其浸出物的测定过程及结果,最后采用65%乙醇为溶剂测定藕节炭的浸出物。

测定结果表明,不同市售地藕节炭65%乙醇浸出物含量差异较大,为10.91%~20.88%。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典(一部)[S].2005年版.北京:化学工业出版社,2005:264~265,附录38、56.

[2]周军平,王爱兰,潘仁满.藕节中3-表白桦脂酸的分离与鉴定[J].同济医科大学学报,1995,24(1):52.

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