KU80蛋白在非小细胞肺癌中表达的临床意义

蔡 云 罗庆丰 高 玟 詹勤元

非小细胞肺癌是发病率和死亡率增长最快的恶性肿瘤，且治疗效果较差。目前大量的研究证明Ku蛋白在肿瘤发生、发展、诊断、治疗和预后等方面具有重要的临床意义，结合病理学检查和TNM分期来估计肺癌的恶性程度、转移复发的危险度，能更精确地判断患者的预后，特别能为非小细胞肺癌患者术后的个体化综合治疗提供依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集我院2005年6月至2007年12月住院患者88例，年龄56～72岁，中位年龄66岁，患者均有明确的病理组织学诊断，其中高分化鳞状细胞癌8例，中分化鳞状细胞癌20例，低分化鳞状细胞癌22例，中分化腺癌18例，低分化腺癌20例。

1.2 方法

采用MaxvisionTM免疫组化法，按照免疫组化试剂盒的操作说明进行。P-ERK为工作液，由美国基因公司提供。具体步骤:①4μm连续切片，裱于涂有APES的载玻片上，70℃烤片2 h;②二甲苯脱蜡，梯度酒精入水;③3%过氧化氢室温孵育30 min，消除内源性过氧化物酶;④抗原修复:切片浸于pH6.0柠檬酸溶液中，电饭锅中煮沸5 min，保温10 min，自然冷却;⑤ PBS洗5 min×2次;⑥ 加入适当稀释倍数的一抗，4℃冰箱12 h;⑦ 复温，PBS洗去一抗;⑧加Maxvision试剂，室温作用1 h;⑨PBS洗2次;⑩ DAB显色，苏木精复染，酒精脱水，二甲苯透明，封片光镜下观察抗原在癌组织中表达。

1.3 结果判断

棕黄色颗粒在细胞核沉着为阳性，随机选择4个高倍视野，记数400个细胞。①按切片中细胞显色有无及深浅评分:无显色为0分，淡黄色为1，棕黄色为2分，棕褐色为3分。②根据显色癌细胞的比例记分:阳性细胞数1% ～25%，计1分，26% ～50%计2分，51%～75%计3分，76% ～100%计4分。每例肿瘤的积分=①×②［1］。按积分高低分为:0分为“－”，1～3分者为“+”，4 ～8分为“++”，9～12分为“+++”。结果由两位病理医师分别诊断，不同结果讨论决定，保证结果的客观性。

1.4 统计学分析

采用卡方检验和等级秩和检验。

2 结果

88例非小细胞肺癌KU80蛋白阳性表达率为54.5%(48/88)。肿瘤直径≤2 cm组与＞2 cm组的KU80阳性表达率结果差别具有非常显著性意义(χ2=11.17，P=0.001)，有淋巴结转移组与无转移组KU80阳性表达率结果差别具有非常显著性意义(χ2=14.58，P=0.0008)，进展组、缓解组与稳定组 KU80阳性表达率结果差别具有显著性意义(χ2=7.61，P=0.02);KU80阳性表达率与病理类型和TNM分期无关(P ＞0.05)，见表1。

表1 KU80蛋白与肺癌临床病理参数的关系(例)

3 讨论

KU蛋白是DNA结合蛋白，是 KU70/KU80异源二聚体，这个复合体能补充、活化DNA依赖激酶催化亚单位(DNA-PKcs)共同组成DNA依赖激酶(DNAPK)。DNA-PKcs作为1种丝氨酸/苏氨酸激酶，促进p53蛋白的磷酸化，p53蛋白表达增加，同时反式激活上调另1种抑癌基因WAFl/CIPI，表达产物为p2l蛋白。p21抑制增殖细胞核抗原(PCNA)和多种细胞周期素，使受损的细胞阻滞在 G1期，以修复损伤的DNA，如损伤严重不能修复则启动细胞凋亡［2］。而对于肿瘤细胞来说，如果能缺乏 KU蛋白和DNA-PK的作用，肿瘤细胞将进入永生化，促进细胞增殖和转移，抑制DNA的修复，促进肿瘤演进，同时对放射线出现超敏反应。这证明Ku蛋白和DNA-PKcs在维持人体正常免疫功能，调节 DNA修复，防止细胞恶变方面有很重要的作用［3］。最近的研究表明:在缺乏KU基因的胚胎干细胞，对放射线照射非常敏感，KU70/KU80阴性表型的DNA-PKcs阴性鼠，不仅DNA双链断裂的修复和V(D)J重排的编码终止，而且出现生长迟缓，对放射线超敏反应及淋巴瘤的发生。

近两年来KU蛋白在肿瘤预后、发生发展、诊断和治疗等研究中已经开始受到重视，KU80具有促进肿瘤细胞增殖、黏附和侵袭能力及在非小细胞肺癌发生、发展中起着重要作用［4］。准确判断非小细胞肺癌患者的预后，制定合理的个体化治疗，为非小细胞肺癌的防治开辟1个新的途径。

本研究发现KU80蛋白在非小细胞肺癌发生发展和转移中有重要意义，其阳性表达率与肿瘤的大小、淋巴结转移和治疗效果密切相关。Wilson等［5］报道KU蛋白缺乏导致某些肿瘤放射敏感性增加，KU蛋白将是预测疗效的蛋白之一，与本研究结果相一致。关于KU有关的抗肿瘤药物的敏感性以及肿瘤放射增敏机制，有待进一步研究。

［1］ 许良中，杨文涛.免疫组织化学反应结果的判断标准〔J〕.中国癌症杂志，1996，6(4):229.

［2］ Pueei S，Mamarelli P，Rabitti C，et al.Tumor specific modulation of Ku70/Ku80 DNA binding activity in breast and bladder human tumor biopsies〔J〕.Oneogene，2001，20(6):739.

［3］ 王晓莉，张 明，李文辉.DNA—PK亚单位Ku70、Ku80在不同分期乳腺癌中的表达情况〔J〕.昆明医学院学报，2009，30(2):114.

［4］ 严珊珊，刘 莉，刘志刚.Ku80在鼻咽癌中的表达及其临床意义〔J〕.肿瘤防治与研究，2008，21(1):49.

［5］ Wilson CR，Davidson SE，Margison GP，et al.Expression of Ku70 correlates with survival in carcinoma of the cervix〔J〕.Br JCancer，2000，83(12):1702.