黄瓜枯萎病菌产生厚垣孢子诱导条件的研究

张定法，刘鸣韬，朱盛安

（1.河南科技学院，河南新乡 453003；2.新乡市农业局，河南新乡 453000）

研究黄瓜枯萎病菌（Fusarium.oxysporiumf.sp.cucumarinumOwen.）的生物学特性及防治方法等需要大量的厚垣孢子，而该菌在人工培养基上不易产生厚垣孢子[1]，这方面的研究又很少.为此，本文研究培养液、pH值、温度、光照、振荡条件对黄瓜枯萎病菌产生厚垣孢子的影响.

1 材料与方法

1.1 菌株来源

黄瓜枯萎病尖孢镰刀菌黄瓜专化型（Fusarium.oxysporiumf.sp.cucumarinumOwen.）由河南科技学院植物病理实验室提供.

1.2 培养液对厚垣孢子产生的影响

本实验选用8种培养液:马铃薯葡萄糖培养液(PD)、马铃薯蔗糖培养液(PS)，Richards培养液[2-3]、马铃薯培养液P1(马铃薯200 g，水1 000mL)、马铃薯培养液P2(马铃薯100 g，水1 000mL)、马铃薯培养液P3(马铃薯75 g，水1 000mL)、马铃薯培养液P4(马铃薯50 g，水1 000mL)、马铃薯培养液P5(马铃薯25 g，水1 000mL).将黄瓜枯萎病菌接种在PDA(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)平板上，28℃培养4 d，用打孔器从菌落边缘取直径5 mm的菌饼，接种到装有50 mL上述培养液的三角瓶中，每瓶接种1个菌饼，25℃黑暗静止培养15 d，用血球计数板计数每毫升培养液中厚垣孢子的数量[4].重复3次，取平均值（下同）.

1.3 温度对厚垣孢子产生的影响

设20℃、25℃、30℃、35℃、40℃共5个处理.将黄瓜枯萎病菌接种到装有马铃薯培养液P4的三角瓶中，放在不同温度的温箱中黑暗静止培养15 d，用血球计数板计数每毫升培养液中厚垣孢子的数量.

1.4 光照对厚垣孢子产生的影响

设24 h黑暗、24 h日光灯、12 h日光灯与黑暗交替3个处理.将黄瓜枯萎病菌接种到装有马铃薯培养液P4的三角瓶中，放在不同的光照条件，25℃静止培养15 d，用血球计数板计数每毫升培养液中厚垣孢子的数量.

1.5 pH值对厚垣孢子产生的影响

用 1mol/L 的 NaOH 和 1mol/L 的 HC1，将马铃薯培养液 P4 的 pH 值调整为 4、5、6、7、8、9、10，装入三角瓶中，接种黄瓜枯萎病菌，25℃黑暗静止培养15 d，用血球计数板计数每毫升培养液中厚垣孢子的数量.

1.6 振荡对厚垣孢子产生的影响

设静止和振荡（100 r/m）两个处理.将黄瓜枯萎病菌接种到装有马铃薯培养液P4的三角瓶中，分别放在振荡培养箱及普通培养箱中，25℃黑暗培养15 d，用血球计数板计数每毫升培养液中厚垣孢子的数量.

2 结果与分析

2.1 培养液对厚垣孢子产生的影响

在供试的8种培养液中，马铃薯培养液P1、P2、P3、P4、P5产生了厚垣孢子，其中P4培养液产生厚垣孢子的数量最多，为269个/mL.其次为P3、P2培养液，分别为215个/mL、181个/mL.PD、PS、Richards培养液未产生厚垣孢子（图1）.

图1 培养液对黄瓜枯萎病菌厚垣孢子产生的影响

2.2 温度对厚垣孢子产生的影响

不同温度对黄瓜枯萎病菌产生厚垣孢子有较大的影响.30℃产生厚垣孢子的数量最多，为293个/mL；其次是25℃，为271个/mL；40℃不产生厚垣孢子（图2）.

图2 温度对黄瓜枯萎病菌厚垣孢子产生的影响

2.3 pH值对厚垣孢子产生的影响

在设置的7个pH值处理中，都产生了厚垣孢子，其中pH值6产生厚垣孢子的数量最多，为287个/mL.其次pH值7，为263个/mL；pH值4、pH值10产生厚垣孢子的数量较少(图3).

图3 pH值对黄瓜枯萎病菌厚垣孢子产生的影响

2.4 光照对厚垣孢子产生的影响

黄瓜枯萎病菌在24 h黑暗、24 h日光灯、12 h日光灯与黑暗交替3处理条件下，每毫升培养液产生厚垣孢子的数量分别为246个、543个、725个.由此可知，光照，特别光暗交替更有利于厚垣孢子的产生.

2.5 振荡和静止对厚垣孢子产生的影响

在振荡和静止条件下，每毫升培养液产生厚垣孢子的数量分别为317个、239个，可见振荡有利于厚垣孢子的产生.

3 小结与讨论

真菌的生长发育需要一定的环境条件，有利于营养生长的条件，不一定有利于孢子的产生[5].真菌厚垣孢子是在环境条件差的情况下产生的，它是真菌渡过不良环境条件的一种方法.本试验中用的PD、PS、Richards培养液中营养含量较高，未产生厚垣孢子，而马铃薯培养液P1、P2、P3、P4、P5营养含量较低则产生了厚垣孢子.不同温度对黄瓜枯萎病菌厚垣孢子的产生也有明显的影响，30℃产生厚垣孢子的数量最多，其次是25℃，40℃不产生厚垣孢子.厚垣孢子在pH值4～10的范围内都能产生，pH值6产生的数量最多，pH值4、pH值10产生厚垣孢子的数量较少.光照、振荡有利于厚垣孢子的产生.

[1]董金皋.农业植物病理学[M].北京：中国农业出版社，2001：411-412.

[2]孙广宇.植物病理学实验技术[M].北京：中国农业出版社，2002：203-204.

[3]方中达.植病研究方法[M].北京:中国农业出版社，1998：49-50.

[4]秦芸，叶华智，黄云张.影响木霉菌厚垣孢子产生因素初探[J].云南农业大学学报，2002，17（4）：15-16.

[5]程明渊，刘洪涛，阎万元.人工条件下稻曲病菌厚垣孢子产生因素初探[J].吉林农业科学，1996，（3）：62-64.