HPLC法测定强脉胶囊中丹参酮ⅡA的含量

段秀俊，裴妙荣，段晓军

（山西中医学院，山西 太原 030024）

强脉胶囊由丹参、当归、川芎等18味中药组成，具有温经通脉、活血化瘀的功效，用于治疗经脉阻塞及血栓闭塞性脉管炎等并发症。为了更好地控制其质量，本文建立了丹参酮ⅡA的含量测定方法对其质量进行控制。

1 实验材料

1.1 实验仪器

Alltech 426型高效液相色谱仪，Linear 201型紫外检测器，Allchrom Plus色谱工作站。

1.2 药品与试剂

强脉胶囊（自制，三批批号为080424，080425，080426），丹参酮ⅡA对照品（购自中国生物制品检定所，批号110766-200314）；甲醇为色谱纯，水为二次重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适应性［1-11］

色谱柱为Hypersil ODS C18色谱柱（4.6 nm×200 nm，5 μm）；流动相为甲醇-水（75∶25）；检测波长为270 nm（见图 1），流速为 1.0 mL/min；理论塔板数以丹参酮ⅡA计，不少于3000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液 取本品粉末约3.0 g，精密称定，取100 mL具塞三角瓶，精密加入甲醇50 mL，称重，超声提取20 min，放冷，称重，用甲醇补足减失的重量，滤过，滤液再用微孔滤膜（0.45 nm）滤过，即得。

2.2.2 对照品溶液 精密称定丹参酮ⅡA 1.22 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作为储备液。取1mL储备液于10 mL的容量瓶中，加甲醇稀释到刻度，制成每1 mL含丹参酮ⅡA 12.2 μg的对照品溶液。

2.2.3 阴性溶液 按强脉胶囊的处方组成和比例，制备缺丹参的阴性空白胶囊，按2.2.1项方法制备阴性样品溶液。

2.3 空白实验

按上述色谱条件，取丹参酮ⅡA对照品溶液、批号为080424的供试品溶液、阴性溶液各10 μL分别注入液相色谱仪，测定。结果供试品溶液与对照品溶液在相同的保留时间处均出现色谱峰，且基线平稳，分离度好，而阴性样品无干扰（见图2-4）。

2.4 线性关系考察

精密称取丹参酮ⅡA对照品0.90 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液（0.09 mg/mL）。精密吸取上述对照品母液0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL、1.6 mL、2.0 mL、2.4 mL 分别置6个10 mL容量瓶中，各加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。分别吸取上述对照品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定丹参酮ⅡA的峰面积值。以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y=939210X-1947.7，r=0.9997，丹参酮ⅡA 在进样量 0.036 μg～0.216 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度实验

取对照品溶液（12.2 μg/mL）重复进样 6 次，每次10 μL，依法测定丹参酮ⅡA峰面积值，结果RSD值为1.33%，说明仪器的精密度好。

2.6 稳定性实验

取供试品溶液（080424），分别于 0 h，2 h，4 h，8 h，12 h，进样10 μL，依法测定丹参酮ⅡA峰面积值，结果RSD值为1.84%，说明供试品溶液在12 h内稳定。

2.7 重复性实验

取同一批号样品（080424）6 份，每份 3.0 g，按2.2.1项下方法制备供试品溶液，测定其丹参酮ⅡA含量，6份样品的含量平均值为0.0475 mg/粒，RSD值为 2.03%（n＝6），说明本法重复性好。

2.8 加样回收实验

分别取已测知含量的样品（080424）6份，每份1.5 g，精密称定，每份分别精密加入丹参酮ⅡA对照品0.122 mg，按2.2.1项下方法制备供试品溶液，测定，计算回收率，结果平均回收率为99.92%，RSD值为 1.91%（n＝6），说明本法准确度高。

2.9 样品测定

按上述测定方法，测定 3批样品（080424、080425、080426）中丹参酮ⅡA的含量，结果见表1。

表1 样品中丹参酮IIA的含量 （n＝2）

3 讨 论

丹参酮ⅡA对光热敏感，不稳定，在供试品溶液的制备过程中应加以注意，供试品溶液与对照品溶液均应低温避光保存。

在样品处理中，考察了加热回流提取及超声提取，结果超声提取20 min与加热回流提取1 h，测得的药材含量无显著差异，为尽可能避免丹参酮ⅡA破坏，故选用超声波提取20 min。

在丹参酮ⅡA的含量测定中，曾试用不同比例的甲醇-水作为流动相考察其分离情况，由于丹参酮ⅡA的脂溶性较大，结果以75∶25分离效果较好，并且处方中其他药味对测定无影响。

丹参酮ⅡA是醌式结构，实际名称应该是丹参醌ⅡA，国家十五规划教材《中药化学》中其名称就是丹参醌ⅡA。但是包括2005年版中国药典在内，一般均称之为丹参酮ⅡA，笔者认为还是按照其实际结构规范命名，称之为丹参醌ⅡA合理。

［1］中华人民共和国药典委员会.中国药典（一部）［S］.北京：化学工业出版社，2005：52.

［2］杜憬生，吴晓薇，吴寿海.益肝冲剂质量标准研究［J］.中华实用中西医杂志，2009，22（15）：1243-1244，1246.

［3］方万芬.癥瘕消散丸质量标准研究［J］. 中国实用医药，2008，3（33）：141-142.

［4］苏丹，胡容峰，杨敏，等.HPLC法测定复方丹参渗透泵型控释片中丹参酮ⅡA 的含量［J］.亚太传统医药，2008，4（2）：42-44.

［5］李积东，李向阳.人血浆中丹参酮ⅡA的反相高效液相色谱检测［J］.青海医学院学报，2007，28（1）：26-28.

［6］王利彦，赵明，王津慧，等.甘西鼠尾草中丹参酮ⅡA的含量测定［J］.青海医学院学报，2006，27（4）：262-264.

［7］于彤，吴秀清.高效液相色谱法测定复方丹参颗粒中丹参酮ⅡA含量［J］.中药材，1998，21（8）：421-422.

［8］蒋学华，许启荣，罗娟，等.高效液相色谱法测定复方丹参片中丹参酮ⅡA 的含量［J］.华西药学杂志，1996，11（2）：102-104.

［9］齐永秀，李香，万建建，等.高效液相谱法测定白花丹参中总丹参酮和丹参酮ⅡA 含量［J］.医药导报，2007，26（7）：796-798.

［10］梁贵键，张华，张蔚君，等.高效液相色谱法测定抗痤霜中丹参酮ⅡA 的含量［J］.空军总医院学报，2006，22（3）：152-153，161.

［11］孙波，童功金.高效液相色谱法测定丹贝止咳喘胶囊中丹参酮ⅡA 的含量［J］.时珍国医国药，2000，11（6）：509.