胃癌组织中 PTEN的表达与幽门螺旋杆菌感染的关系

延安大学附属医院(延安 716000)马 鹏 谈晓红 冯义朝

张力蛋白同源、第 10染色体丢失的磷酸酶基因(Phosphatase and tension homology deletedon chromosome ten,PTEN),是目前发现的第一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,参与细胞凋亡调控[1]。幽门螺杆菌(HP)是胃癌重要的致癌因素已受到越来越多的资料的证实,但其确切的致癌机制尚不明确。我们应用免疫组化技术探讨胃癌组织中PTEN的表达与幽门螺旋杆菌感染的关系。

材料和方法

1 材 料 2003～ 2005年我院普外科术后胃癌大体标本 80例,其中男 56例,女 24例,年龄 23～ 72岁 (平均54岁 )。均经 HE染色,病理确诊并分型,其中高-中分化腺癌为32例,低分化腺癌48例。癌旁组织为与癌组织最远处,也经病理确诊并分型,其中肠化生26例,胃炎 54例,所有患者受检前均未经放化疗等治疗。所有患者术前均禁食 10h后于胃镜直视下取标本,取胃组织 3块,并经快速尿素酶实验检查,以确定有无 HP感染,之后再用于组织学检查。所有标本经10%甲醛固定,石蜡包埋,连续切片厚 4mm.常规 HE染色及甲苯胺蓝染色,根据组织结构和细胞形态诊断胃炎组织、肠化生组织、胃癌组织和有无 HP感染。PTEN单克隆抗体(浓缩液)、(S-P)试剂盒及(DAB)购自北京中杉生物技术有限公司。

2 方 法 标本经 10%甲醛固定,石蜡包埋,4 μ m厚的石蜡切片 65℃烘烤,脱蜡,3%过氧化氢灭活内源性过氧化物酶,微波修复抗原,10%正常山羊血清封闭,PTEN单克隆兔抗体(1∶50)4℃过夜孵育,磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗,加生物素标记鼠抗人 IgG药置于室温下 30min,冲洗,辣根酶标记链霉卵白素室温下孵育30min,冲洗后DAB显色,苏木素染色,封片。光镜观察。用已知阳性胃癌切片作阳性对照,用 PBS代替一抗作阴性对照。采用快速尿素酶试验、甲苯胺蓝染色组织病理学检查两种方法检测 HP感染情况。

3 结果判断 PTEN染色定位在细胞质内,以细胞质呈棕黄色颗粒为阳性。由两位病理科医师随机选择5个有代表性的视野计数200个细胞,按阳性细胞占同类记数细胞的百分比将免疫组化结果分为阴性,即百分比＜10%;阳性即百分比＞10%。 HP感染情况采取快速尿素酶试验和甲苯胺蓝染色组织病理学检查两种方法检测,以结果一致者作为研究样本,实验结果拍摄成像。

4 统计学方法 采用 SPSS10.0统计学软件进行统计学分析,采用χ2检验对免疫组化结果进行分析处理,以P＜0.05为差异具有显著意义。

结 果

1 PTEN在胃癌及癌旁组织中PT EN的表达:胃癌组织 PTEN的表达在 80例胃癌组织中有 37例PTEN阳性,阳性率46.3%。80例癌旁组织中有69例PTEN阳性,阳性率为86.3%,二者之间有显著性差异(P＜0.01)。

2 胃癌中 HP感染和 PT EN表达的关系:在 HP阳性和 HP阴性胃癌中,PTEN表达阳性率分别为 38.9%和52.3%,HP阳性者PTEN蛋白表达虽然低于HP阴性者,但二者之间无显著差异(P＞0.05)

讨 论

PTEN作为一种抑癌基因,参与细胞凋亡调控[1]。近年研究发现,其表达与一些恶性肿瘤发生发展、生物学行为和预后有密切的关系[2,3],但对PT EN在胃癌中的表达却有不一致的报道[4,5]。本研究显示:PTEN在癌组织中的表达明显低于癌旁组织,二者之间有显著性差异,提示:在胃癌组织中 PT EN表达下调,在由胃炎组织或肠化生组织向癌组织进化演变中,抑癌基因PTEN的缺失会导致其对肿瘤的抑制作用的减弱,说明 PTEN基因与胃癌的发生、发展有关。

幽门螺杆菌(HP)是重要的致癌因素已受到越来越多的资料的证实[6,7]。当幽门螺杆菌感染后,宿主细胞对 HP产生的反应分为速发性和迟发性两类,迟发性反应多数涉及到基因表达的变化[8]。近期一些研究者应用cDNA array分析了HP诱导的胃上皮细胞基因表达谱的变化。Chiou等报道,在HP的刺激下,胃癌细胞株有21个基因上调和17个基因下调[9]。所以对基因表达变化的进一步研究,将有助于了解宿主细胞的抵抗策略和适应性变化的根本机制,从而为干预有关环节,减轻宿主细胞对H.pylori的易感性提供新的思路。本研究显示:PT EN的阳性表达在 HP阳性的组织中与 HP阴性组织中分别为38.9%及52.3%,HP阳性者PTEN蛋白表达虽然低于 HP阴性者,但二者尚无统计学差异。提示:PTEN在胃癌中的表达变化可能与HP感染无明显相关性,HP的致癌机制中可能没有抑癌基因PT EN的参与。其结果与周庆华[10]等研究不同,可能与样本量的大小、检测前是否服用过抗 HP的药物等因素有关。关于PTEN与 HP感染的关系,文献报道甚少,其他抑癌基因和癌基因与 HP在胃癌的关系研究亦鲜有报道,因此,HP感染导致胃癌的途径有很多种[11,12],能否通过对抑癌基因 PTEN的影响而致癌,还需进一步研究。

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