乳腺增生大鼠模型血清和乳腺VEGF、b FGF的变化△

河北医科大学中西医结合学院(石家庄 050091)

段彦苍 杜惠兰* 靳亚慈

乳腺增生病为乳腺常见病、多发病,被认为是乳腺癌癌前的一种良性病变。在病理方面除了表现在上皮细胞、间质细胞、腺泡、导管等组织的增生外,亦存在着血管的增生[1]。血管增生在乳腺肿瘤的生长、转移过程中起到了重要作用。血管的生成与血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生成因子(Basic fibroblast growth factor,b FGF)密切相关。本研究采用肌注外源性激素刺激大鼠乳腺增生,测定其血清VEGF和b FGF及其在乳腺组织中的表达强度,以期研究V EGF和bFGF在大鼠乳腺增生中的作用。

材料和方法

1 动物模型的建立与分组 动物:75～85日龄健康清洁级雌性Wistar大鼠20只(河北医科大学实验动物中心提供,合格证号:602089),体重220±20g。适应性喂养 2周后,按随机数字表法将其分为2组,每组10只:即正常对照组、模型组。正常组大鼠常规喂养,模型组参照张璐[2]等造模方法。大鼠腹腔注射苯甲酸雌二醇(天津金耀氨基酸有限公司)0.5 mg/(kg· d),连续 25d,然后注射黄体酮(天津金耀氨基酸有限公司)5 mg/(kg· d),连续 5d,建立大鼠乳腺增生的模型。

2 方 法 30d后,用游标卡尺测量第2对乳房的直径。同时取血离心保存,用酶联免疫法测定血清VEGF和bFGF的含量。切取第2对乳房,甲醛液固定,常规 HE染色及免疫组织化学染色(按 ABC试剂盒操作指南进行)。光镜观察乳腺组织形态学变化,应用日本 Nikon E800显微镜进行观察,美国 IPP(Imageproplus)分析软件对免疫组化染色切片进行图像分析,每个切片采集5个视野,得出度量物质含量信息的灰度等级,将所得灰度值取平均数作为统计指标。平均灰度与阳性表达强弱成反比,灰度值越小,阳性染色越强,蛋白表达越多。

3 统计学分析 用 SPSS11.5统计软件进行统计处理,数据用均数±标准差(±s)表示。对所测定结果进行正态性及方差齐性检验,组间比较用单因素方差分析,检验以P＜0.05为有统计学意义。

结 果

1 大鼠乳头直径的变化:正常组大鼠乳房大小正常,色淡红,质软,用棉签触压时大鼠无明显的痛苦感,隔毛看不见乳头位置,将毛分开后,仅见乳头呈小米样,紧贴在皮肤上,苍白、柔软、个别稍隆起 1 mm左右。模型组大鼠乳房乳头增大,色鲜红,质硬,用棉签触压时大鼠出现明显的痛苦感,易激惹。乳头竖起,较坚实,充血,增高 2～3 mm。

2 血清生殖激素变化:正常组大鼠血清为E2(15.238±8.218)pg/ml,模 型组 为E2(36.864±20.599)pg/ml,两组相比有统计学差异(P＜0.01);正常组大鼠血清 P(57.047±17.014)ng/ml,模型组大鼠血清 P(31.571±5.821)ng/ml,两组相比有统计学差异(P＜0.01);正常组大鼠血清 PRL(7.947±1.459)ng/ml;模型组大鼠血清 PRL(9.912±4.206)ng/ml,两组相比有统计学差异(P＜0.05)。

3 血清 VEGF、bFGF含量:正常组血清 VEGF为(16.414±3.798)pg/ml,模型组为(21.357±4.816)pg/ml;正常组血清 b FGF为(244.370±57.431)pg/ml,模型组为(507.900±79.051)pg/ml。与正常组相比,模型组大鼠血清中 VEGF和bFGF含量均明显升高(P＜0.01)。

4 乳腺组织 V EGF、b FGF的表达:乳腺 VEGF、b FGF的阳性表达定位于细胞浆内,为棕黄色染色。正常组乳腺组织 VEGF表达平均灰度为84.76±8.30,模型组为62.89±8.05;正常组乳腺组织 bFGF表达平均灰度为102.00±4.90,模型组为77.61±5.08。与正常组相比,模型组大鼠乳腺组织中 VEGF、bFGF的表达增强(P＜0.01)。

讨 论

研究表明乳腺癌患者VEGF蛋白在乳腺的表达和MVD数值呈正相关[3]。乳腺癌中彩色血流分级随着VEGF表达水平的增强而明显增高[4]。V EGF是目前已知的促使血管内皮细胞通透性增加的作用最强的诱发因子[5]。VEGF又称为血管渗透因子,是一种内皮细胞特异性有丝分裂原,具有核心作用,还能诱导内皮细胞增殖、迁移,具有特异性促进内皮细胞分裂增殖并增加血管通透性的活性促进血浆蛋白外漏,基底膜降解,最终导致新的基质及新生血管形成。因此在乳腺癌的发生、发展、浸润和转移中发挥重要作用[6,7]。

在血管形成的调控中,b FGF起着关键作用。bFGF能促进表皮、内皮细胞再生,促进血管内皮细胞分裂,诱导其从基膜中分离出来,以刺激内皮细胞向肿瘤组织趋化运动,并形成管状结构,还可提高组织中血纤维蛋白溶解酶原激活因子类(PAs),诱导内皮细胞产生其他蛋白酶,是血管形成较为直接的诱导物[8]。

经典理论认为乳腺增生病的发生与内分泌紊乱,卵巢功能失调有关。体内长时间的孕激素(P)不足与雌二醇(E2)绝对或相对增多,是乳腺组织发生增生的主要原因。依据该理论,近几年,研究学者常采用肌注外源性激素的方法或摘除实验动物双侧卵巢的方法来复制动物乳腺增生的模型,我们认为通过手术摘除动物的卵巢本身会对实验动物造成机体的损害,可能影响实验的准确性,所以本实验采用保守的肌注外源性激素的方法来复制大鼠乳腺增生的模型。造模后,与正常组相比,模型组大鼠的乳头竖起,较坚实,充血,增高 2～3mm,模型大鼠VEGF和bFGF在乳腺组织的表达均较正常组明显升高,提示模型组大鼠体内存在的某些血管因子被激活后,直接或间接促进了局部乳腺组织血管的增生而造成乳腺增生。有学者证实乳腺癌患者血清VEGF表达明显高于健康志愿者,并与与乳腺癌的进展、恶性程度、腋窝淋巴结转移相关,认为可作为判断乳腺癌恶性程度和淋巴结转移的一个生物学指标[9],在本实验中模型大鼠血清VEGF和b FGF水平均较正常组明显升高,提示血管生成因子表达的强弱可能与乳腺肿瘤的发展密切相关。

[1] 刘胜春,吴凯南,历江元.血管生成在乳腺非典型增生病变过程中的作用.中国肿瘤临床,1998,23(6):421.

[2] 张 璐,乔国芬,杨宝峰.中药乳腺丸对乳腺增生的影响.中国中西医结合外科杂志,2003,9(1):39-41.

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[8] 易文君,唐中华,杨竹林,等.青年和绝经女性乳腺癌V EGF、b FGF及其受体表达的差异.中华肿瘤杂志,2003,25(2):141-145.

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