LightCycler480实时荧光定量 PCR仪在献血者血液筛查中的应用

孙秋影,卢长春,魏 强,庞淑芬

(黑龙江省血液中心,黑龙江哈尔滨 150056)

输血相关传染病的预防和控制已经成为全社会关注的焦点,新技术的引进是进一步提高血液安全性的重要一环。应用PCR进行早期筛查主要是因为PCR的高灵敏和短的窗口期。核酸检测(NAT)是直接检测病原体核酸的一系列技术的总称,灵敏度高,可检出标本中极微量的核酸,在病毒感染后数天即能检出,可大大缩短病毒检测“窗口期”,提高输血安全性。

我站应用 LC480系统进行的 96或 384个样本快速循环扩增PCR反应。通过监测核酸扩增时的荧光,可对产生的结果定量检测和同时进行分析。

LC 480仪器是一种具有实时在线检测综合能力的快速热循环仪。安装后能实施条件一致的 PCR,例如,同时扩增和检测靶核酸。通过加入双链DNA特异性荧光染料或荧光基团标记的序列特异性寡核苷酸探针检测靶核酸。这两种途径都能在扩增时测量PCR产物,为定量 PCR的基础。

我站采用了 HBV/HCV/HIV三联核酸检测试剂盒(荧光PCR),应用DP1000上海科华生物工程有限公司的核酸提取仪,8人份血样混合提取核酸,应用 LightCycler·480实时荧光定量PCR仪进行HBV、HCV、HIV三联检测,LightCycler·480PCR仪基于实时荧光 PCR反应原理,能对靶核酸进行快速、准确的检测。该仪器灵敏准确自动化程度高,操作维护简单方便,可检出标本中极微量的病毒核酸,在病毒感染后数天即能检出,可大大缩短血液中病毒检测的“窗口期”,极大提高了血液制品的安全的性,保证了输血安全。应用PCR进行早期筛查主要是因为PCR的高灵敏和短的窗口期,方法学能够互补,与酶免检测互补,可以避免亚型或免疫沉寂引起的漏检。

为迎接 2009年在哈尔滨市召开的世界大学生冬季运动会,我站在 2008年应用了核酸检测技术,为大冬会筛检部分全血及成分血,为我省输血事业的发展作出了贡献。目前全国采供血机构的血液制品传染病指标的检测主要是使用ELISA方法,但受方法学的限制,其病毒检测“窗口期”再缩短已经很难,通过引进病毒核酸检测技术(NAT),将会大大减少输血感染疾病的发生。卫生部也在讨论使用 ELISA和NAT两种方法对发往临床的血液制品进行检测。我站具有前瞻性,应用此技术,对推动和提高采供血机构的检测能力具有重要影响。

我站于 2008年 2月至 2009年 3月正式应用此项技术,开展了部分全血及成分血的病毒核酸筛查工作,并在世界大学生冬季运动会期间,作为供血单位。我站为大冬会储备的血液制品全部经过核酸检测,使大冬会储备血液制品与北京奥运会的储备血液制品质量标准一致。通过为世界性运动赛事提供医疗保障,大大提高了我站的检测水平和能力。该技术的引进及应用有助于快速、准确的筛查出标本中极微量的核酸,在病毒感染后数天即能检出,可大大缩短病毒检测“窗口期”,提高输血安全性,具有极好的社会效益。