计算机辅助精液分析(CASA)的质量控制

李文峰 王兴华

随着男性不孕症的增加，常规手工检查精液已不能满足患者的需求。计算机辅助精液分析(CASA)具有检测快、分析项目多、操作简便等优点而用于精液分析，经过几年的实际使用，已得到广大患者的普遍认可，并已逐步普及开来。因此，为了提高精液分析检测的准确度，CASA的质量控制显得越来越重要。精液分析的质量控制分为分析前、分析中、分析后3个环节。

1 分析前的质量控制

分析前的质量控制包括患者在家中准备直到精液标本送到检验人员手中，同时了解患者可能影响精液检测的疾病及用药等情况。此过程对精液分析的准确至关重要。

1.1 禁欲时间 精液采集前应禁欲至少24h，但不超过7d，最好3～5d。禁欲时间过短，容易导致精液量过少，精子密度和精子总数偏低；禁欲时间过长，会导致畸形精子数增加，精子活动力降低。最初检查应分析2份标本，且2次采集的时间应大于7d，不超过3周。如果2次的结果有明显较大的差异，则应再取标本进行检测，因精液分析结果受多种因素的影响可有较大的波动。

1.2 标本采集方式 有手淫法、特制避孕套法、电振动或前列腺按摩法。手淫法是指患者手淫取精液后置于干净的广口瓶内送检；普通避孕套因含有润滑剂和杀精子药物，故可让取精液困难者使用特制避孕套法取精液；电振法或前列腺按摩法用于不能自行排精的患者，需要医师帮助。不可采用性交中断法取精液，因为射精最初部分可能丢失，而这部分精子密度、精子活动率、精子形态和精子顶体完整性都显著高于后部分精液[1]。无论使用何种取精方法，均应注意取全，精液采集不准，精液分析就不准，就会做出误差较大的检测报告。

1.3 送检温度和时间 精液采集后应注意保温，最好控制在37℃左右，温度过高或过低均会影响精液的检测结果。应注意及时送检，最好在10min内送检，因为正常精液标本在60min内液化，但常常在15min内已液化；送检时间过长，则无法观察液化时间，还会导致精液检测的各项结果偏低，故应保温及时送检。

1.4 患者检测前准备 患者检测前应保持平时生活状况，不特殊饮食、不剧烈运动、不使用药物等。因为微量元素的含量、泌尿生殖道的感染、饮食、烟酒、农药接触以及剧烈运动均会对精液质量产生影响[2]。

1.5 检验人员培训 无论使用何种精液分析仪，都必须由检验人员来操作完成，而检验人员除了掌握精液的组成、性状及各种参数外，还应掌握自己使用的CASA系统的原理、性能和操作方法。故对检验人员的培训应从标本和仪器两方面进行。

2 分析中的质量控制

分析中的质量控制是严格、规范、正确的实验操作，以及控制精液分析仪处于最佳或正常的工作状态完成标本的检测过程。

2.1 液化 使精液处于37℃的恒温水浴箱内充分液化。对60min不液化的精液，可直接以精液不液化报告。对60min液化不全的精液，可采用物理方法(如加等量的培养液并用加样器反复吹打)或化学方法(如加菠萝蛋白酶1g/L)使其液化。

2.2 粘稠度 精液的粘稠与不液化是2种不同的现象，应加以区分；评价粘稠度的方法是用一宽口的吸管吸取精液，若液滴形成大于2cm的拉丝，则为粘稠度异常。若以其他器物挑起精液观察粘稠度，正常精液拉丝长度亦不可超过2cm。

2.3 检测时间和温度 液化的精液应立即检测，如时间过长则会导致精子活动率及活动力降低。由于精子的运动特征对温度敏感，故精液应在室温20～40℃的环境中检测，特别是冬天应在实验室开启取暖设施，且分析过程不宜过长。另外，应提前开启显微镜电源，使显微镜载物台预热。

2.4 标本的制备 将彻底液化的精液轻轻充分混匀，用加样器吸取5～10μl于干净的专用精液计数池上，掌握滴加精液的量，使盖上玻片后，不产生气泡，且精液充满计数池而不溢出池外。切忌随意加样。

2.5 调节显微镜 调节灯光、光栅、载物台使背景呈灰白色，且所有精子头部均为黑色。

2.6 精子密度调整 CASA在计算精子活动率时，精子只有产生一定的位移，系统才会认为是活精子，对原地进行尾部摆动或不动的精子则认为是死精子。精子密度增加，A级精子在快速游动的过程中，会碰动一些死精子和各种非精子成分，使之产生一定位移，而系统则误认为所有产生位移的均为活动精子，最终使精子活动率增高。对低密度精子(大于10×106/ml，小于50×106/ml)及少白细胞、精原细胞和非细胞标本时，其结果具有可重复性和可信性。对高密度精子(大于50×106/ml)及白细胞、精原细胞和非细胞颗粒较多的标本，若每高倍镜视野(400倍)观察到50～100个精子时，取患者自身精浆按精液：精浆=1:1的稀释比例稀释，再计数；观察到100～150个精子时，则按1:2稀释；观察到150～200个精子时，则按1:3稀释；观察到200～250个精子时，则按1:4稀释[3]；稀释后应注意在稀释比例处填写清楚，否则电脑还按原液计数。对精子密度过低(小于10×106/ml)的精液标本，可采用2种方法：其一，选用低倍数物镜扩大视野，并加大视野数，增加统计量；其二，采用手工计算。

2.7 排除杂质 合并生殖道感染者，精液中出现的白细胞应与生殖细胞进行区别。对非细胞颗粒，可适当调节阈值剔除比精子大或小的杂质，对无法剔除的杂质，用手工剔除。

2.8 精子计数 用计算机对5～10个不同视野进行计数，检测时不可在计数池的某个区域进行，应在整个计数池内选择几个有代表性的视野计数。分析患者本次精液的2～3个标本，计数精子总数应大于200个，保证精液质量准确、全面、综合的报告。

2.9 无精症的检测 无精症的报告要慎重，高倍镜下未见精子，应在低倍镜下仔细检查。对低倍镜下亦未见精子者，用大于3000rpm离心15min，取沉渣经彻底检查仍未见精子者，才可判断为无精子。对无精子的标本，若pH小于7.0，可能存在射精管道的堵塞或双侧输尿管先天性缺失，所以无精子的标本应仔细检查pH值。因精液中可能含有血液等影响pH值的成分，建议无精子的精液离心后取上清液查pH值。

3 分析后的质量控制

分析后质量控制包括检验报告的审核、签发直至应用于临床，以及仪器的维护、保养。

3.1 报告的审核签发 检测结果必须经反复检查无误后，才能发出。对结果异常的标本，报告发出前应结合临床对各种数据进行回访，防止出现错误而导致的异常。

3.2 仪器的保养 应将仪器放在平稳的地板上，无日光照射，要求室温15～40℃保持仪器表面、显微镜的镜头干净。还应对电脑进行维护，防止因电脑系统故障而出现误差。建立专用仪器登记本，对每天仪器操作、出现故障及维修等情况逐一登记，全面了解仪器的工作状态。

4 讨论

计算机辅助精液分析具有较好的可靠性、重复性和稳定性，与传统的光学显微镜目测估计相比，更具有快速方便、对比性强、便于交流等明显优点[4]，大有取代手工分析的趋势。由于不同实验室、不同型号仪器、不同实验人员的操作过程，造成结果的准确性也有很大差异，因此，为保证检验结果的准确，每个环节都应规范化和标准化，进行全面的质量控制。

[1]邓顺美,文任乾,黄健初,等.分段射精法收集少精子症患者精液质量比较[J].中国计划生育学杂志,2004,12(3):160-162.

[2]张玮玮.关于精液质量的影响因素分析[J].当代医学,2009,15(27):13.

[3]吴志平,吴祥林.高密度精子标本质量分析方法探讨[J].临床输血与检验,2006,8(4):288-290.

[4]肖松山,范世福,李彦芳,等.计算机辅助精子运动分析系统的研究[J].天津大学学报,2000,33(6):811-813.