益气升白汤治疗放化疗后白细胞减少症的实验研究*

王慧凯 周 星 逄淑霞 林海燕

1滨州医学院中西医结合学院 烟台市 264003;2滨州医学院中药药理学教研室

益气升白汤治疗放化疗后白细胞减少症的实验研究*

王慧凯1周 星1逄淑霞1林海燕2

1滨州医学院中西医结合学院 烟台市 264003;2滨州医学院中药药理学教研室

目的 探讨益气升白汤治疗放化疗后白细胞减少症的效果。方法 用腹腔注射环磷酰胺的方法建立小鼠白细胞减少症模型;益气升白汤灌胃 7 d,测定用药前后白细胞总数变化;测定小鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)含量,做小鼠游泳实验,取胸腺、脾脏,对胸腺指数和脾脏指数进行统计学处理。结果 中药组与模型组、西药组在白细胞总数变化、血清SOD含量、游泳时间、胸腺指数和脾脏指数等方面均有显著性差异。结论 益气升白汤能明显改善放化疗后白细胞减少症。

益气升白汤;白细胞减少症;化疗

白细胞减少症(leukopenia)为常见血液病,临床多用鲨肝醇、利血生、瑞白等药物治疗,但疗效较差,且副作用较大。近年来采用的粒细胞集落因子虽有一定疗效但价格昂贵、副作用大,限制了药物的推广。

益气升白汤是由鸡血藤、五味子、鹿角胶、补骨脂、黄芪、党参、黄精、阿胶等十三味药物组成,其功能为补血养阴,调和阴阳。经多年的临床验证,对放化疗后白细胞减少症患者具有显著效果。为探讨其升高白细胞的可能机制,为临床提供科学依据,现将动物实验情况报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与药品试剂 动物:昆明种二月龄小鼠 60只,体重(20±2)g,雌雄各半,购自山东绿叶制药有限公司。药品与试剂:益气升白汤:鸡血藤、五味子、鹿角胶、补骨脂、黄芪、党参、黄精、阿胶等十三味药物由烟台中医世家提供,经中药药理学实验室鉴定符合《中药鉴定学》[1]要求。超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒由南京建成生产,批号:2009-04-19;环磷酰胺注射剂由上海华联制药有限公司,生产批号:2009306;鲨肝醇由广东市桥制药厂(番禺)生产批号:090309。

1.2 仪器 迈瑞 BC2300全自动血细胞分析仪;721分光光度计(上海第二分析仪器厂生产);恒温箱;GL218A高速离心机(江苏医疗器械厂生产);电动匀浆机,微量天平;秒表等。

1.3 制备方法 ①益气升白汤制备方法:中药先用蒸馏水浸泡 30min,武火煮至药沸后,文火煎 2次,每次60min,合并2次煎液,6层纱布过滤,80℃恒温水中浓缩为 50 m l,浓度为 1.0 g/ml,冰箱贮存。用时水浴加热。②环磷酰胺制备方法:按文献记载[2～8],用生理盐水配制成浓度为 10 mg/ml的混悬液,冰箱贮存备用。③鲨肝醇片配制方法:按文献记载[2～8],用生理盐水配制成浓度为 1mg/ml的混悬液,冰箱贮存备。

1.4 方法

1.4.1 实验方法:将 60只小鼠随机分成 4组:空白对照组、模型组、西药组、中药组。正常喂养 3 d后,除空白对照组外其余各组均腹腔注射环磷酰胺 100 mg/kg体重,1次 /天,连用 3 d造模,断尾取血测白细胞总数。造模完成后空白对照组、模型组、西药组、中药组分别灌胃生理盐水、生理盐水、鲨肝醇、益气升白汤,均按 0.3m l/10 g,连续用药 7 d。

1.4.2 检测指标及方法:灌胃 7 d后,各组小鼠尾静脉取血,测定白细胞总数。将各组小鼠全部称重,眶动脉和眶静脉取血 1 ml后,棉球压迫止血,测定血清 SOD含量(按说明书进行)。做小鼠抗疲劳实验,每只小鼠尾部坠一 2 g重物,在 40 cm×30 cm×20 cm玻璃容器,20℃水温下进行游泳实验,秒表计时,至小鼠浸入水下 10 s不能上浮为止,记录数据。解剖小鼠,取出胸腺和脾脏,生理盐水洗净,滤纸吸净血液。用微量天平测胸腺和脾脏重量,计算胸腺指数和脾脏指数。计算公式为:胸腺指数(脾脏指数)=胸腺 mg(脾脏 mg)/小鼠体重(10 g)。

1.5 统计学方法 统计分析采用 SPSS13.0软件对数据进行处理,计量资料以±s表示,采用方差分析和两两比较用 t检验。

2 结果

2.1 各组小鼠一般情况 空白对照组小鼠毛发正常,皮肤无松弛,活动正常,精神正常,活跃,食欲旺盛;模型组小鼠精神萎靡,食欲低下,运动少,嗜睡;中药组和西药组造模后同模型组,灌胃 3 d后情况改善,到灌胃第 7天小鼠毛发有光泽,皮肤恢复弹性,活泼好动,嗜睡减轻,食欲增长,大便干湿适中。模型组小鼠前后一般情况无显著性变化。

2.2 各实验数据及分析见表 1,2。

表1 小鼠外周血白细胞含量的比较(±s,109/L)

表1 小鼠外周血白细胞含量的比较(±s,109/L)

注:△表示模型组、西药组、中药组与空白对照组比较,P＜0.01;#表示西药组、中药组与模型组比较 P＜0.05

组别 n 造模后白细胞总数灌胃 7 d后白细胞总数空白对照组 12 6.92±1.62 7.08±1.32模型组 12 1.97±0.82△ 3.85±1.40西药组 12 1.86±0.62△ 6.89±1.36#中药组 12 2.11±0.59△ 7.32±0.68#

表2 小鼠血清 SOD含量及对胸腺指数、脾脏指数的影响(±s)

表2 小鼠血清 SOD含量及对胸腺指数、脾脏指数的影响(±s)

注:△表示西药组、中药组与模型组比较,P＜0.01;#表示中药组与西药组比较 P＜0.05

组别 n SOD(U/m l) 胸腺指数(mg/10 g) 脾脏指数(mg/10 g) 游泳时间(min)空白对照组 12 104.78±5.34 2.76±1.45 4.27±1.26 31.46±12.43模型组 12 47.25±3.67 0.46±0.38 4.32±0.82 7.07±4.06西药组 12 91.86±4.32△ 0.89±0.49△ 9.09±1.38△ 10.34±3.29△中药组 12 99.35±10.54△ 1.38±0.62△# 9.96±1.03△ 13.34±6.86△

3 讨论

白细胞减少症(leukopenia)为常见血液病,属中医虚劳、血虚范畴。西药多用鲨肝醇、利血生、瑞白等药物治疗,但疗效较差,且副作用较大。近年来采用的粒细胞集落因子虽有一定疗效但价格昂贵、副作用大,限制了药物的推广。采用中西药结合治疗对提高升白类药物的治疗效果,降低毒副作用,增强机体免疫力,具有很好的协同作用。但目前临床与实验未能很好的结合,很多中药临床证明有效,但未能进一步用实验数据来证明。

白细胞减少症中医辨证属气血两虚,脾肾不足证。中医认为:肾藏精,主骨生髓,为先天之本;脾主升清,运化水谷,为后天之本。肾气虚则精不足,髓不满,则生血无源;脾气虚则运化无力,精血亏虚。益气升白汤为补气养血,调和阴阳之剂。方中党参甘温,补益脾胃调节机体气机;茯苓降逆化痰;鸡血藤甘温补血行血;补骨脂温肾助阳,纳气;黄芪益气固表;黄精滋肾润肺,补脾益气;阿胶滋阴养血;鹿角胶温补肝肾,益精血;五味子敛肺滋肾,生津敛汗,涩精止泻;茯苓淡渗利湿助党参建脾运湿,下济肾脏通阳利水;黄芪益气助补骨脂、黄精、鸡血藤养阴生血。诸药共奏补气养血,调和阴阳之功。现代药理学也证实方中党参、鸡血藤、阿胶等均有确切的升高白细胞的作用[7]。

超氧化物歧化酶(orgotein superoxide dismutase,SOD)是一种源于生命体的活性物质,能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质[12,13],对人体不断地补充 SOD具有抗衰老的特殊效果。SOD是中国卫生部批准的具有抗衰老、免疫调节、美容功能的物质之一。研究表明 SOD是化疗副作用的消除剂。表 2示西药组、中药组与模型组比较有统计学意义(P＜0.01);中药组与西药组比较有统计学意义(P＜0.05)。胸腺指数、脾脏指数亦均为重要的免疫指标,结果表明益气升白汤能显著提高小鼠免疫功能。

本实验结果显示,益气升白汤对造模后白细胞降低有明显改善作用。血清 SOD含量、胸腺指数、脾脏指数、游泳时间较模型组均有显著性差异。益气升白汤在胸腺指数方面较西药组有显著性差异。

综上表明,益气升白汤对放化疗所致的白细胞减少症有显著治疗效果,根据实验结果推测可能与增强造血功能、提高机体免疫力、抗疲劳有关。

[1] 李家实.中药鉴定学[M].上海:上海科学技术出版社,1996:89-91.

[2] 陈书明,聂向庭,刘桂林,等.鹿茸醇提物对白细胞减少动物模型影响初探[J].实验动物科学与管理,1999,16(4):32-34.

[3] 张强,林立,张凯,等.Ge2132对人工诱导小白鼠苯中毒造血功能影响的初步研究[J].济宁医学院学报,2000,23(1):42-43.

[4] 夏薇,孙文欣,张长征,等.硫普罗宁对放疗所致小鼠白细胞减少的预防及治疗作用[J].河南肿瘤学杂志,2000,13(4):238-239.

[5] 周金黄,李晓玉,荣康泰.免疫药理学进展[M].北京:中国科学技术出版社,1993:185.

[6] 马增春,高月,刘永学,等.四物汤对环磷酰胺所致血虚证小鼠造血细胞作用的研究[J].中国实验方剂学杂志,2001,7(5):13-15.

[7] 沈云辉,陈长勋,徐振晔.双黄升白颗粒剂对小鼠白细胞减少症的影响[J].中国中药杂志,2005,30(16):1275-1279.

[8] 沈海中,刁东海,赵文明,等.MPS对环磷酰胺作用的小鼠白细胞的影响[J].首都医学院学报,1994,15(2):103-105.

[9] 潘明继.中医药对肿瘤放疗的增效减毒作用[J].中国中西医结合杂志,1992,12(2):138.

[10] 段萍,王再漠.黄芪在恶性肿瘤化疗中的增效减毒作用的临床研究[J].中国中西医结合杂志,2002,22(7):516.

[11] 全宏勋,张钦宪.黄芪抗辐射作用的实验研究[J].中草药,1993,24(8):423.

[12] 廖远朋,金文泉四物汤对大鼠有氧运动能力影响的研究[J].四川中医,2005,23(5):16-18.

[13] 吴旭增.脂质过氧化与机体损伤[J].铁道劳动卫生通讯,1984,(2):66.

Experimental study of Yiqisheng baidecoction on leukopenia after chemotherapy

WANG Huikai1ZHOU Xing1PANG Shuxia1LIN Haiyan2
1 School of Medicine,Binzhou Medical University;2 Teaching and Research of Pharmacology,Binzhou Medical University

ObjectiveTo p robe the effect Yiqishengbai decoction on leukopenia after chemotherapy from experimental study.MethodsThe method of the establishment of mice Leukopenia model is intraperitoneal injection of cyclophosphamide.After Yiqishengbai decoction was Ig for 7 days,determinate the changes of total Interleukin number before and afterusing the decoction.Determ inate the content of serum SOD,do swimming test in mice,remove thymus and spleen,and calculate thymus index and spleen index.Experimental data was statistical analysed.ResultsThe traditional Chinese medicine group,model group and western medicine group have significant differences in the changes of total Interleukin number,serum concentration of SOD,swimming time,thymus index and spleen index.ConclusionYiqishengbai decoction can improve leukopenia clearly after chemotherapy.

Yiqishengbai decoction,leukopenia,chemotherapy

R557

A

1001-9510(2010)01-0023-03

项目:滨州医学院大学生科技创新活动基金(BY 2008DKCX 09)

林海燕,E-mail:mailizhong@163.com

2009-11-06)