河南贲门癌高发区贲门腺癌组织化学染色分类与癌旁肠上皮化生的关系*

高社干,王立东,冯笑山,马宝根,孔国强,范宗民,高珊珊

1)郑州大学医学实验中心癌症研究室,河南省食管癌重点开放实验室郑州 450052 2)河南科技大学第一附属医院肿瘤科洛阳 471003 3)河南省人民医院肿瘤科 郑州 450003

△男,1968年生,博士,副主任医师,研究方向:食管癌/贲门癌的癌变机制及临床研究

有报道[1-2]认为贲门腺癌(gastric cardiac adenocarcinoma,GCA)与肠上皮化生(intestinal metap lasia,IM)具有相关性,然而Sharma等[3]认为GCA与IM的关系仍然不明确。河南林州市GCA高发区人群贲门黏膜 IM检出率明显高于低发区人群[4],提示IM可能是贲门癌变早期的重要组织学特征,可能是GCA演变过程中不可缺少的环节。作者通过分析河南贲门癌高发区GCA组织中的黏蛋白类型以及各类型GCA癌旁IM的检出率,探讨GCA的组织化学染色分类与IM的关系。

1 材料与方法

1.1 标本 70例GCA手术标本来自2001年河南省GCA高发区林州市人民医院、林州市中心医院和林州市姚村食管癌医院GCA患者的手术切除组织,患者术前均未接受放疗和化疗,其中,男 59例,女11例,年龄 46～79岁,中位年龄 63岁。标本经体积分数 95%乙醇固定,常规脱水,每例手术标本均在癌组织及癌旁 1～5 cm处连续取材 10～15块,石蜡包埋后,连续切片 5～8张,每张切片厚 5μm。1张组织切片行HE染色,用于核实组织病理学诊断;其他用于组织化学染色。

1.2 主要试剂 爱显蓝8GX,Fluka公司产品;高锰酸钾,上海华彭实业有限公司产品;中性红,上海试剂三厂产品;碱性红,湖南湘中化学试剂供应站;N, N二甲基间苯二胺二盐酸盐,美国Sigma公司产品。

1.3 染色方法

取GCA和癌旁IM组织切片各2张,分别行爱显蓝-雪夫试剂染色法(alcianblue-periodic acid Schiff,AB-PAS)、高铁二胺-爱显蓝法(high iron diamine-alcianblue,HID-AB)染色。

AB-PAS[4]:取切片常规脱蜡,梯度乙醇至水;取AB液100μL湿盒内滴染20～30m in;自来水洗3～5min后,蒸馏水洗;取5 g/L高碘酸100μL滴染氧化10min;蒸馏水洗3～5min;雪夫试剂染10 min;自来水洗5～10min;梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。

HID-AB[4]:取切片常规脱蜡,梯度乙醇至水;室温下于高铁二胺溶液中作用24 h;蒸馏水洗;AB液100μL湿盒内滴染20～30min;蒸馏水洗;5 g/L中性红水溶液染1～2min;蒸馏水洗;梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封片。

1.4 IM的诊断标准 HE染色诊断标准见文献[4-5]。HID-AB法判断标准[6-7]:小肠型IM组织化学染色为蓝色(IM细胞的胞质内含唾液酸黏蛋白);大肠型IM染色为黑色(细胞的胞质内含硫化黏蛋白)。

1.5 GCA的分类标准 ①AB-PAS[6]:肠型GCA组织化学染色为蓝色,癌细胞的胞质内和(或)胞外含酸性黏蛋白;胃型GCA染色为红色,癌细胞的胞质内和(或)胞外含中性黏蛋白;混合型GCA染色为红、蓝相间,癌细胞的胞质内和(或)胞外含酸性及中性两种黏蛋白;干细胞型GCA不显色,癌细胞的胞质内和(或)胞外无黏蛋白分泌。②HIDAB[6]:含硫化黏蛋白的 GCA染色为棕黑色,癌细胞的胞质内和(或)胞外含硫化黏蛋白;不含硫化黏蛋白的GCA染色为蓝色[癌细胞的胞质内和(或)胞外含唾液酸黏蛋白]或不显色[癌细胞的胞质内和(或)胞外无酸性黏蛋白]。

1.6 统计学处理 采用SPSS 10.0处理,GCA组织化学染色分类和GCA癌旁IM检出率的分析用卡方检验,IM和GCA组织中硫化黏蛋白表达水平的比较用Kappa一致性分析,检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 GCA的组织化学染色分类 AB-PAS组织化学染色结果显示,肠型(图1A)、胃型(图1B)、混合型(图1C)和干细胞型(图1D)GCA的检出率分别为37.1%(26/70)、5.7%(4/70)、50.0%(35/70)和7.1%(5/70)。HID-AB组织化学染色结果显示,含硫化(图1E)和不含硫化黏蛋白GCA(图1F)的检出率分别为24.3%(17/70)和75.7%(53/70)。

图1 GCA的AB-PAS和H ID-AB组织化学染色(×200)A:肠型GCA(AB-PAS);B:胃型GCA(AB-PAS);C:混合型GCA(AB-PAS);D:干细胞型GCA(AB-PAS);E:含硫化黏蛋白的GCA(HID-AB);F:不含硫化黏蛋白的GCA(HID-AB)。

2.2 不同类型GCA癌旁IM的检出率 AB-PAS结果显示,肠型GCA癌旁IM的检出率57.7%(15/ 26)明显高于非肠型GCA的检出率27.3%(12/44) (χ2=6.383,P=0.012)。HID-AB结果显示,含硫化黏蛋白的GCA癌旁IM检出率64.7%(11/17)明显高于不含硫化黏蛋白GCA的检出率30.2%(16/ 53)(χ2=6.472,P=0.011)。

2.3 癌旁IM和其相应的GCA组织中硫化黏蛋白表达情况的比较 应用HID-AB法对GCA癌旁的IM组织和其相应的GCA组织进行特殊染色,发现硫化黏蛋白在癌旁IM(图2)和其相应的GCA组织中无一致性表达(表1)。

图2 癌旁IM的HID-AB组织化学染色(×200)A:小肠型IM;B:大肠型IM。

表1 硫化黏蛋白在GCA及其癌旁IM组织中的表达

3 讨论

在胃癌的研究中,人们根据黏液组织化学染色不同,将胃癌分为肠型(含酸性黏液)、胃型(含中性黏液)、混合型(含酸性及中性两种黏液)及干细胞型(无黏液分泌),并且认为IM与肠型胃癌关系密切,但并不是所有 IM都与胃癌有关,而是其中的柱状细胞分泌硫酸黏液的不完全大肠型IM与肠型胃癌的关系较密切[7-11],且肠型胃癌可能来源于肠化黏膜[7,9]。

该研究结果表明,GCA可以依据其分泌的黏蛋白类型进行分类;而且,肠型GCA癌旁IM检出率明显高于非肠型GCA,含硫化黏蛋白的GCA癌旁IM检出率明显高于不含硫化黏蛋白的GCA。提示肠型GCA,尤其是含硫化黏蛋白的GCA可能起源于IM。

对于含硫化黏蛋白的IM,即大肠型IM,一般认为具有以下特点[10]:①分化不成熟,其组织结构及细胞形态均存在不同程度的去分化,其本身即可作为贲门黏膜异型增生的一种表现。②基因表达异常,在黏液组化性质方面表现为柱状黏液细胞有大量硫化黏蛋白的出现;在抗原性质方面则表现为多种肿瘤相关抗原,包括癌基因产物ras、P21等生物学标志物的检出率增加;在细胞遗传特性上表现为DNA含量及非整倍体细胞检出率异常增加。以上证据均提示含硫化黏蛋白的IM比其他类型IM细胞群更具有与癌细胞相类似的生物学性状。陈陵等[11]曾对该型 IM作了大量研究,初步证实含硫化黏蛋白的IM确实有较高潜在癌变的危险。

作者的研究还证实,GCA癌旁大肠型IM检出率比较高,但是硫化黏蛋白在癌旁 IM及其相应的GCA中的表达并不具有一致性。其原因可能有以下 3个方面:①基因表达的不稳定性可能是主要原因,它可能随着环境的改变而改变,尽管硫化黏蛋白在GCA癌旁IM和GCA中均具有高表达的倾向,但很不稳定。②含硫化黏蛋白的IM虽然具有癌变的倾向,但癌变是一个多基因参与、多阶段、进行性、演进性过程,并不具有一对一的关系。③研究的样本量还不充足,有待于加大样本量,进一步研究。

总之,该研究结果提示 IM可能是河南贲门癌高发区肠型及含硫化粘蛋白GCA的癌前病变;GCA与癌旁大肠型 IM的关系还不能明确,有待于进一步探讨。

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