放疗联合免疫治疗头颈癌的疗效观察

雷学 段鹏 毕艳华 赵红林 秦越亮 郭丽双

晚期头颈癌疗效较差,随着分子生物学的不断发展,肿瘤免疫治疗有了明显的进步,笔者采用细胞因子诱导杀伤(CIK)细胞联合放疗治疗晚期头颈癌取得较好疗效,报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 38例均为 2006年 1月至 2008年 8月在我院治疗的头颈癌患者,其中男 24例,女 16例;年龄 33～68岁,平均年龄 55岁。所有病例均经病理证实,鼻咽癌 13例,喉癌 12例,口咽癌 8例,下咽癌 5例;Ⅲ期 24例,Ⅳ期 14例。随机分为放疗联合免疫治疗组(联合组)和单纯放疗组(单放组),每组19例。2组近 1个月未抗肿瘤治疗,3个月未使用过免疫增强剂。

1.2 主要试剂 PE标记的鼠抗人 CD4、CD8抗体,FITC标记的鼠抗人 CD25、CD3抗体,同型对照分别为 PE标记的鼠抗人IgG 1免疫球蛋白,FITC标记的鼠抗人IgG 1免疫球蛋白均为美国公司产品。

1.3 方法

1.3.1 CIK细胞制备及回输[1]：抽取外周血 20ml,利用密度梯度离心分离并收集单个核细胞,用RPMI-1640完全培养基洗涤 3次,调整细胞到 1×106/ml,加入 IFN-γ1 000 U/m l,24 h后加入 rh IL-2 1 000U/ml,anti-CD3McAb 50 ng/ml,孵箱中常规条件培养。隔天换液,补加 rhIL-2 1 000 U/ml。培养 21 d收集细胞合格后,回输细胞总数为 1.6×1010,悬浮于含500 g/L人血白蛋白0.9%氯化钠溶液 250ml内,分 4次回输给患者。

1.3.2 流式细胞仪检测：静脉血 2ml,EDTA抗凝。取不同荧光标记的单克隆抗体各 20μl,分别加入 100μl抗凝外周血,室温下孵育 15m in,加入红细胞裂解液,PBS洗涤两次,用流式细胞仪检测,Cellquest软件分析数据,记录阳性细胞百分率。

1.3.3 治疗方案：单放组和联合组放疗方案相同,联合组在放疗开始前 1周内给予 CIK细胞回输。

1.3.4 观测指标及疗效判定：瘤体变化、生存期、外周血淋巴细胞亚群(CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T)及CD4+CD25+T调节细胞亚群水平等。肿瘤客观疗效分为完全缓解(CR),部分缓解(PR),轻度缓解(MR),稳定(SD),进展(PD),总缓解=CR+PR+MR。

1.4 统计学分析 应用 SPSS 13.0统计软件,计量资料以±s表示,采用t检验,计数资料采用 χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 客观疗效 联合组缓解率高于单放组(χ2=5.216,P＜0.05)。见表 1。

表 1 2组治疗后疗效比较 n=19,例

2.2 机体免疫状态 单放组和联合组治疗后患者细胞免疫总体水平差异无统计学意义(P＞0.05),但在细胞水平上差异有统计学意义(P＜0.05);联合组治疗后诱导辅助 T细胞水平(CD3+CD4+T)及细胞毒性杀伤效应细胞水平(CD3+CD8+T)均较单放组增高(P＜0.05);而单放组抑制性调节细胞水平(CD4+CD25+T)较联合组增高明显(P＜0.05或 ＜0.01),见表 2。

表 2 2组治疗后免疫状态比较 n=19,±s

表 2 2组治疗后免疫状态比较 n=19,±s

组别 CD3+T CD3+CD4+T CD3+CD8+T CD4/CD8 CD4+CD25+T联合组 67.6±0.4 36.9±0.4 30.7±0.3 1.27±0.02 17.2±0.7单放组 66.6±0.4 35.6±0.4 29.2±0.3 1.22±0.02 19.6±0.9 t值 1.676 2.221 3.126 1.508 2.089 P值 0.102 0.033 0.004 0.140 0.044

2.3 不良反应 联合组不良反应主要是发热和类流感症状,症状均较轻,耐受性好,无因不良反应而退出治疗者。

3 讨论

肿瘤患者体内抗原提呈细胞功能缺陷、肿瘤免疫杀伤细胞作用一过性、肿瘤免疫疗效低等影响了肿瘤免疫治疗。生物治疗是通过诱导机体主动免疫或过继性免疫法来调整被破坏的机体与肿瘤之间的平衡,使患者免疫功能得到恢复,增强对癌症的防御力。

放疗对头颈癌疗效确切,但长期生存和生活质量改善不能令人满意,其中一个原因是患者经放疗后体内免疫系统遭到破坏,自身免疫力下降。CIK细胞是人外周血单个核细胞经体外激活、培养后获得的一群同时表达 CD3和 CD56分子的异质细胞,兼具有 T淋巴细胞强大的抗瘤活性和自然杀伤细胞的非MHC限制性杀瘤优点[2]。调节性 T细胞是存在于正常机体内的一类具有独特的免疫调节作用的细胞,在介导机体肿瘤免疫耐受过程中起着重要作用[3]。

笔者研究结果发现,在放疗前给予 CIK过继免疫治疗后,患者体内特异性免疫细胞水平明显增高,同时负性调节因子明显下降,说明经过免疫强化后,体内免疫水平处在较高且平稳的激活水平,有利于效应细胞发挥对放疗后残存的肿瘤细胞的杀伤作用,提高疗效[4]。

1 李翠萍,陈宝安,陈津,等.脐血来源的 CIK细胞大容量制备方法的建立.临床肿瘤学杂志,2005,17：291-292.

2 吴擘颋,徐建民.CIK细胞：过去、现在与将来.中国临床医学,2006,23：782-784.

3 Mottet C,Golshayan D.CD 4+CD 25+Foxp3+regulatory T cells：from basic research to potential therapeutic use.Swiss Med Wkly,2007,37：625-634.

4 Linn YC,Lau LC,Hui KM.Generation ofcytokine-induced cells from leukaem ic samples with in vitro cytotoxicity againstautologous and allogeneic leukaemic blasts.Br JHaematol,2002,116：78-86.