盐酸小檗碱含量测定方法概述

吕长淮

（安徽省宿州市药品检验所，安徽宿州 234000）

盐酸小檗碱为抗菌药，主要用于志贺菌属、霍乱弧菌等敏感病原菌所致的胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染。盐酸小檗碱为《中国药典》收载品种，含量测定《中国药典》2005年版二部对其原料药采用容量法，制剂采用高效液相色谱法，有效地控制了该药的质量。盐酸小檗碱常制成各种复方制剂和多种剂型广泛应用于临床。对盐酸小檗碱及其复方制剂中盐酸小檗碱含量测定方法研究的文献较多，现就近年来研究的含量分析方法作一概述。

1 紫外-可见分光光度法（UV）

UV法由于具有灵敏度和精密度较高，操作简便、快速等特点，广泛用于各种药物制剂的分析中。贺子华[1]分别采用容量法、UV法和高效液相色谱法（HPLC）对盐酸小檗碱片进行含量测定，经三种方法对样品进行分析比较，认为容量法测定含量结果均符合规定；HPLC法分析盐酸小檗碱片中含有其他生物碱的量较多，盐酸小檗碱的量较少；但采用UV法测定盐酸小檗碱片的含量方法较为简便，专属性强。

2 二阶导数光谱法（SDS）

SDS是解决干扰物质与被测物光谱重叠，消除胶体等散射影响和背景吸收，提高光谱分辨率的一种数据处理技术，常用于药物分析中。崔颖等[2]探讨SDS测定芪黄颗粒中小檗碱的含量，采用 SDS，利用小檗碱在 351.0 nm和 363.6 nm（谷-峰）处振幅 D 值与浓度 C 值的关系（C=131.27D＋0.090 5，r=0.999 9）计算其含量。结果对照品溶液和供试品溶液在351.0 nm和363.6 nm处均出现谷－峰振幅，而阴性对照液在此处振幅约为零，不影响小檗碱的测定，扫描速度240 nm/min，狭缝宽度2 nm，△λ＝3 nm，平均加样回收率为 100.3%，RSD为0.73%，导数测定过程中改变△λ，振幅D值则发生改变，该法采用对照品对照法，对照品及样品的振幅D值同时改变，但其比值不变，故对实验结果无影响。徐英瑜等[3]建立SDS测定葛根芩连微丸中盐酸小檗碱的含量，采用SDS，以无水乙醇为溶剂，测定波长分别为365 nm和274 nm，扫描速度40 nm/min。结果在365 nm处，盐酸小檗碱有一最大振幅，其他样品及基质在此处的二阶导数光谱与零线几乎重合，不影响盐酸小檗碱含量的测定，盐酸小檗碱在4～12 μg/ml浓度范围内线性关系良好（r＝0.999 6），平均回收率为100.5%，RSD 为 1.65%。

3 原子吸收分光光度法（AAS）

AAS通常借比较对照品溶液和供试品溶液的吸光度，求得供试品中待测元素的含量。迟文俊等[4]采用间接AAS测定片剂中盐酸小檗碱的含量，运用离子对分析技术、萃取技术和光谱技术相结合的方法，收集有机相在原子吸收分光光度计上，用Co空心阴极灯在240.7 nm处测得的各有机相的吸收度，选择最佳测定条件。样品经萃取，测定吸收度，用回归方程 A＝0.035 9C＋0.006 0，求出 Co 的含量，按小檗碱离子∶硫氢酸钴离子为2∶1的关系，换算得出小檗碱的含量。本方重复性好，准确度高，平均回收率为 99.8%，RSD 为 1.21%。研究结果表明，在该法中利用Co标准曲线，能够有效控制片剂中小檗碱的含量，灵敏度高，操作简单，使AAS的应用领域由原来的单纯测定无机金属元素，拓宽为可间接测定生物碱类有机药物的含量。

4 薄层扫描法（TLC）

TLC是使用薄层扫描仪对薄层色谱的斑点进行扫描的一种分光光度法，具有检测光谱范围宽，扫描速度快，数据处理和操作简便，结果重现性好等特点。杨辉[5]采用TLC法建立复方黄连颗粒中盐酸小檗碱含量测定方法，采用高效硅胶G薄层板，以正丁醇－冰乙酸－水（5∶1∶1）为展开剂，检测波长为345 nm。 结果盐酸小檗碱在 0.091 2～0.273 6 μg范围内呈良好的线性关系，相关系数 r＝0.998 6，平均回收率为 100.80%，RSD＝3.53%（n＝5），可作为复方黄连颗粒中盐酸小檗碱的含量控制方法。莫可丰等[6]建立TLC法测定肤阴洁中盐酸小檗碱含量的方法，采用双波长反射法线性薄层扫描法对处方中主要成分盐酸小檗碱进行含量测定，采用硅胶GCMC-Na薄层板，以正丁醇－冰醋酸－水（7∶1∶2）为展开剂，检测波长为 λS＝430 nm，λR＝600 nm，结果平均回收率为 100.8%，RSD 为 2.3%。康四和等[7]研究建立荧光薄层扫描法测定卫胃颗粒中盐酸小檗碱的含量，样品经提取、薄层展开后，采用荧光扫描法对卫胃颗粒中盐酸小檗碱进行含量测定，以苯-乙酸乙酯-甲醇-异丙醇-水（6∶3∶1.5∶1.5∶0.3）为展开剂，激发波长 λ＝366 nm。 结果盐酸小檗碱在 0.031 04～0.155 20 μg 范围内呈良好的线性关系，回收率为 100.8%，RSD＝1.9%。

5 毛细管电泳法（HPCE）

HPCE法是近年来发展较快的一种新型、高效、快速的分离分析技术，是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。目前，HPCE法已被广泛应用于药物分析中，具有分辨率和灵敏度高、快速、分析耗费低、样品预处理简单等特点。凌宁生等[8]利用毛细管区带电泳对金芪降糖片进行分离分析，采用HPCE法快速地对金芪降糖片中3种生物碱进行分析并测定其中盐酸小檗碱的含量。采用未涂层石英毛细管（50 cm×100 μm），以 40 mmol/L 磷酸氢二钠－甲醇（65∶35）为缓冲液，254 nm 为测定波长，进样压力 0.5 Psi，5 s，分离电压 14 kV，柱温25℃。结果在12 min内测定盐酸小檗碱，盐酸小檗碱平均含量为 1.52%（g/g），在 0.01～0.20 mg/ml范围内线性关系良好（r＝0.999 9），平均回收率为 100.9%，RSD＝1.92%。 张琦等[9]研究采用HPCE法的毛细管区带电泳分离模式分离测定清经胶囊中小檗碱含量，采用熔融石英毛细管柱（50 cm×75 μm），运行缓冲液为 0.2 mol/L 乙酸钠溶液－甲醇（8∶2），265 nm 为测定波长，进样压力20 kPa·s，运行电压15 kV，毛细管柱温25℃。 结果盐酸小檗碱进样浓度在 9.95～159.20 mg/L 范围内线性关系良好（r＝0.999 9），平均加样回收率为 100.4%，RSD＝1.9%(n=5)。

6 高效液相色谱法（HPLC）

HPLC法具有分离效率高，分析速度快，重现性好，专属性强等优点，广泛应用于药物分析中，特别适合复方制剂中的多种成分的分离。HPLC法测定盐酸小檗碱含量研究的文献较多，许波等[10]建立了HPLC法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱的含量，采用ODS柱，以0.1%十二烷基硫酸钠的甲醇-0.2 mol/L 酒石酸（80∶20）为流动相，流速为 1.2 ml/min，醋酸氢化可的松为内标物，用紫外检测器于240 nm波长处检测，结果盐酸小檗碱的线性范围为 0.01～0.09 mg/ml，平均回收率为99.2%，RSD为0.93%，且重现性和准确性良好，分析速度快，完成一次分析只需15 min，大大节省了分析时间。张秀桥等[11]建立三黄泻心汤中盐酸小檗碱含量的HPLC测定方法，卢日刚等[12]研究建立HPLC法测定妇康洗液中盐酸小檗碱含量的方法，对复方制剂中含有的小檗碱进行含量测定研究，结果较为满意。黄连中结构相似的小檗碱型生物碱主要有小檗碱、黄连碱、巴马亭和药根碱等，近年来亦多采用HPLC法测定其含量。刘传玲等[13]建立HPLC法测定黄柏中盐酸小檗碱含量的方法，王振军等[14]研究建立 HPLC法测定克痔栓中盐酸小檗碱含量的方法，利用HPLC法较高的分离特点，分离出制剂中的盐酸小檗碱，较好地控制了制剂的质量。

盐酸小檗碱作为抗菌药，常制成复方制剂和各种剂型广泛应用于临床，对其含量测定方法以HPLC法应用研究较为普遍，因HPLC法具有较高的分离效率和较快的分析速度，最适宜复方制剂，特别适用于成分复杂的多组分制剂，而UV法测定盐酸小檗碱的含量近年来已较少使用。随着盐酸小檗碱新的复方制剂和新剂型的问世，将会产生更多、更新、更完善的含量测定方法，使盐酸小檗碱制剂质量得到有效的控制。

[1]贺子华.盐酸小檗碱片质量分析方法比较[J].安徽医药,2003,7(6)∶461.

[2]崔颖,张静泽,张喜云,等.导数光谱法测定芪黄颗粒中小檗碱的含量[J].武警医学院学报,2003,12(1)∶25.

[3]徐英瑜,毛书征.二阶导数光谱法同时测定葛根芩连微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷含量[J].中国医院药学杂志,2001,21(12)∶731.

[4]迟文俊,白景录,顾春玲,等.间接原子吸收分光光度法测定片剂中盐酸小檗碱的含量[J].卫生职业教育,2001,19(7)∶147.

[5]杨辉.TLCS法测定复方黄连颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].安徽医药,2006,10(1)∶25.

[6]莫可丰,尹梅芳.薄层扫描法测定肤阴洁中盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志,2001,21(11)∶667.

[7]康四和,王春红,陈昌彪.荧光薄层扫描法测定卫胃颗粒中盐酸小檗碱的含量[J].中国药师,2002,5(9)∶547.

[8]凌宁生,李玉红,李林,等.毛细管电泳法测定金芪降糖片中小檗碱的含量[J].中国药科大学学报,2003,34(4)∶51-53.

[9]张琦,赵因,张新申.高效毛细管电泳法测定清经胶囊中小檗碱含量[J].药物分析杂志,2003,23(2)∶133.

[10]许波,高良美.高效液相色谱法测定增效黄连素胶囊中盐酸小檗碱和甲氧苄啶的含量[J].药物分析杂志,2001,21(1)∶21.

[11]张秀桥,周东斌,刘炎文,等.三黄泻心汤传统汤剂与中药配方颗粒汤剂中盐酸小檗碱含量测定比较[J].中国医院药学杂志,2002,22(7)∶408.

[12]卢日刚,唐敏玲,韦向红,等.RP-HPLC法测定妇康洗液中盐酸小檗碱的含量[J].药物分析杂志,2002,22(3)∶195.

[13]刘传玲,董丽萍,丛永壮.HPLC法测定黄柏中小檗碱的含量[J].中国药事,2005,19(6)∶383.

[14]王振军,祝红达,杨远荣,等.高效液相色谱法测定克痔栓中盐酸小檗碱的含量[J].中国医院药学杂志,2005,25(7)∶678.