温州海产贝类单核细胞增生李斯特菌的污染检查*

诸葛青云,胡 昕,潘长旺,梁韶晖,黄慧聪,谭 峰

2.温州医学院生命科学学院、检验医学院,温州325035

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种能引起人畜共患的食源性致病菌〔1-2〕。它在自然界中分布极广,人们食用含有Lm污染的食物后,会导致脑膜炎、骨髓炎、心肌炎、孕妇流产以及产褥感染等疾病〔3〕。由Lm引起感染的疾病死亡率极高,可达30%～70%〔4〕。在欧美、日本由该菌造成的临床疾病和食物污染问题,已超过在细菌性食物中毒中占第1位的沙门菌。我国到目前为止,虽未出现有关Lm引起食物中毒暴发流行的报道,但从国内多篇调查报道了解到,Lm对我国人群的潜在危害仍很严重,不过这些报道中绝大多数的阳性菌均从冷冻肉类以及乳制品中检出,在水产品中有零星报道,主要集中在冷冻鱼类,但在养殖场中直接抽取的鲜活贝类水产品中还未见其报道,本次调查即为掌握我国主要贝类产区这一受Lm污染动态,了解消费者食用贝类产品尤其是生食或半生食的贝类产品受Lm的危害程度,同时为寻求Lm在贝类水产品加工过程中的污染来源提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源 本次调查于2009年7月从温州沿海地区贝类养殖区中采集100份鲜活贝类样品,其中,牡蛎56份、菲律宾蛤 11份、缢蛏10份、泥蚶 13份、梭子蟹10份。

1.2 培养基 EB增菌液、TSA-YE培养基、MMA培养基 、TSI琼脂、LB 增菌液(LB1、LB2)、SIM 动力培养基、血琼脂平板以及微量生化管均购自上海市疾病预防控制中心。

1.3 检验方法 按GB4789130-2003进行操作,样品经培养在MMA平板上出现菌落似水滴样,用白炽灯45°斜光照射,呈现淡蓝色为可疑。挑其涂片做革兰染色镜检,同时接种于TSI斜面培养基及SIM半固体动力培养基观察。如果TSI上生长为+/+H2S-、SIM 培养基中出现伞状现象时,刮SIM上菌苔做触酶试验;如触酶阳性,就按 GB-4789130-20031617进行各项生化试验;根据Lm菌生化特点,先行甘露醇、鼠李糖、木糖、七叶苷及溶血等5项生化试验。结果如符合-+-++者,再按国标扩大生化项目。如符合可基本判断为Lm菌,最后纯培养菌种做小鼠毒力试验。

2 结 果

2.1 检出率 在100份鲜活贝类水产品中检出3株Lm,检出率为3.00%,分别为牡蛎1.78%(1/56)和菲律宾蛤18.2%(2/11)。

212生化试验结果对检出的3株Lm的生化鉴定,符合国标GB4789130-2003要求结果(表1)。

2.3 小鼠毒力试验 3株Lm阳性菌株经TSB-YE纯培养24h,制成约1010cfu/mL细菌的菌悬液,注射1mL在健康小鼠腹腔观察,结果小鼠在3d内死亡,这说明该菌株有很强的致病性。

3 讨 论

由于Lm是一种典型的能引起人畜共患的食源性致病菌,具有分布广,适应能力强,发病死亡率高的特点,因此在2000年被WHO食品安全工作计划列为重点检测的食源性致病菌之一。本次随机抽检直接从养殖场中抽取的鲜活贝类产品,100份中有3份检出Lm,污染率为3.00%,说明贝类产品在养殖过程中就不同程度地受到Lm的污染。陈伟伟〔5〕等人在调查泉州市食品中Lm的污染情况时,发现贝类受Lm的污染率为4.3%,比此次调查的污染率高,说明贝类产品在加工、运输过程中还可能存在Lm不同程度的交叉污染。该菌的广泛存在和交叉污染将可能直接引发Lm病的流行暴发,对人们构成了潜在的危险,因此应加强对该菌的检测。贝类产品营养丰富,是人们喜爱的海产品之一,加上贝类产品自身的一些特点,人们往往将牡蛎等一些贝类产品生食或半生食。此次调查得知由于一些贝类产品在养殖环境中就受到Lm不同程度的污染,因此生食或半生食贝类产品将有可能直接导致Lm病流行暴发。

〔1〕Nakama A,Matsuda M.M olecular trying ofListera monocytogenesisolated in Japan by pulsed field gelelectrophoresis〔J〕.J Vet Med Sci,1998,60(6)：749-752.

〔2〕董丽丽,王春生,安笑秋,等.单核细胞增生李斯特菌简介〔J〕.中国乡村医学,2000,7(12)：24-25.

〔3〕王为黎,马景红,牟荣,等.食源性单核细胞增生李斯特菌的带染研究〔J〕.中国医学理论与实践,2002,4：501-502.

〔4〕 Kerr KG,Laoey Listeriosis RW.New problems with an old pathogen〔J〕.J Hosp lnfect,1988,12：247.

〔5〕陈伟伟,杨育红,杨毓环,等.泉州市食品中单核细胞增生李斯特菌的定性定量及耐药性分析〔J〕.中国食品卫生杂志,2003,15(1)：43-45.