中药方剂对鸭疫里氏杆菌疫苗的免疫佐剂作用

肖琛闻 鲍国连 韦 强 刘 燕 季权安

鸭疫里氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎，是由鸭疫里氏杆菌(RA)引起的鸭、鹅、火鸡等多种禽类的一种急性或慢性传染病。1～8周龄鸭敏感，恶劣环境条件可以促发感染。发病率为5%～90%，病死率高达80%，慢性耐过鸭主要表现神经性症状，导致残鸭和僵鸭。RA疫苗分灭活苗、弱毒活苗和亚单位菌苗等。高福等在研制RA福尔马林灭活苗的基础上，制得了矿物油佐剂灭活苗，最低保护率为75%，但注射部位有微弱的不吸收硬结。苏小运等研制的铝胶灭活苗一免后7～10d保护率为50%，20d后保护率为75%，保护率出现较慢。弱毒苗的缺点是容易造成细菌在被免动物体内返毒，危害更大；亚单位菌苗虽然能够提供较好的保护力，但其存在潜在的不确定性，因而暂时仍不能推广。现在还没有理想的鸭疫里氏杆菌疫苗。

很多研究报道中药复方也可作为佐剂，有增强疫苗免疫的效果，例如当归补血汤、四君子汤、玉屏风散、小柴胡汤等。本研究试图将玉屏风散、四君子汤以及两者之合方玉风君子汤用于鸭疫里氏杆菌灭活湿苗中，观察其免疫佐剂效果，为新型鸭疫里氏杆菌疫苗的开发提供新的思路。

(1)玉屏风散的水煎剂(YPF)

取黄芪90g、白术60g、防风30g，加水540ml(按每克生药加水3ml)，冷水浸泡30 min。煮沸后90℃慢煎40

min，趁热过滤，滤液自然滴尽，二煎加水360 ml(按每克生药加水2 ml)，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁热过滤，滤液自然滴尽，合并滤液，95℃水浴浓缩至150ml，浓度为1.2g／ml。

(2)四君子汤的水煎剂(SJZ)

取党参40g、白术18g、茯苓18g、甘草12g，混合加水264ml，煮沸后90℃慢煎40min，趁热过滤，滤液自然滴尽，二煎加水176 ml，煮沸后，90℃慢煎40 min，趁热过滤，滤液自然滴尽，合并滤液，95℃水浴浓缩至100ml，浓度为0.88g／ml。

(3)玉风君子汤(YFJZ)

黄芪90g、白术60g、茯苓30g、防风30g、党参30g、甘草10g，混合加水750ml，煮沸后90℃慢煎40 min，趁热过滤，滤液自然滴尽，二煎加水500ml，煮沸后，90℃慢煎40min，趁热过滤，滤液自然滴尽，合并滤液，95℃水浴浓缩至250ml，浓度为1 g／ml。

试验结果表明在免疫后3周，合方组能够显著提高鸭对于鸭疫里氏杆菌的抗体水平。玉屏风散能够提高鸭对于RA抗体的产生水平，但无统计学差异，四君子汤似乎对细菌苗的免疫并无佐剂作用。

有文献报道玉屏风散或四君子汤能够提高动物特异性或特异性免疫反应，本研究所得结果与文献报道并不符。分析原因可能有以下几点：①本研究中所使用的为细菌性疫苗，玉屏风散或四君子汤的佐剂效果不佳或许与此有关，两方对于病毒性疫苗的免疫效果更佳；②服用剂量不一样可能是造成佐剂效果不明显的原因之一。

本研究中只有合方对鸭RA抗体产生起显著性作用，研究发现，合方对于鸭疫里氏杆菌疫苗的免疫主要在体液免疫方面发挥佐剂作用，在细胞免疫作用并不十分明显，然而在流式细胞研究中我们发现了一个有趣的现象：即所有试验组（除四君子汤组外）CD4+、CD8+细胞百分比同对照组相比有所下降但试验组CD4+／CD8+比值却高于对照组，无统计学差异。CD4+／CD8+的比值增高，说明受免动物的细胞免疫有增强趋势。但为什么绝对百分比有所下降，分析原因可能与本研究中受免动物在5日龄时就给药有关，雏鸭在生长初期免疫系统并没有完全发育，在这时给雏鸭服用具有免疫调节功能的中药或许反而对雏鸭的免疫系统发育造成一种负影响。免疫系统的生长在其后阶段对于中药具有某种依赖性，因此如何选择一个给药最佳时间成为今后研究的又一课题。

体重试验表明，所有试验组方剂对于鸭的生长无副作用。因此，可以对本研究中的合方玉风君子汤在鸭疫里氏杆菌疫苗上的佐剂运用方面作进一步研究。