藕节“炒炭存性”标准的研究

连晓晓， 胡昌江， 余凌英， 张 然， 帅小翠， 雒换锋

(成都中医药大学药学院，四川成都611137)

藕节为睡莲科植物莲 Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根茎节部［1］。始载于《神农本草经》，列为上品。生品味甘涩，性平，具有止血的功效，炒炭后收涩止血作用增强。炒炭历来要求“存性”，其内容包含两个方面:其一所谓“存性”是指药性的概念，即保存该药在炒炭后应有的性能;其二表现在制炭药的质量标准方面，即工艺过程中药物的炭化程度，达到炭化而不灰化的质量要求。火候是影响“炒炭存性”的关键因素，目前藕节炭还没有统一、规范的炮制工艺，其火候掌握多凭主观经验判断，因人因地差异较大，导致临床疗效的不稳定，因此对藕节“炒炭存性”的标准研究具有十分重要的意义。

目前“炒炭存性”的标准研究主要集中在以下几个方面:① pH值测定法［2］;② 吸附力的测定［3］;③ 薄层鉴别［4］;④ 显微鉴别［5］;⑤ 电导法测定电导率值［6］;⑥ 滴定法测定酸性成分的含量［7］。但这些方法都局限于某一方面，过于单一，不能全面评价某种炭药是否“炒炭存性”。因此，我们分别对不同炒炭程度的藕节炭及生品进行了薄层鉴别和吸附力的测定，并用对小鼠的凝血时间来验证，采用多指标综合评价藕节“炒炭存性”的质量标准。

1 仪器、试药与试验动物及供试液的制备

1.1 仪器

BP211D AG电子天平(德国Sartorius);正德牌远红外可控温电炉(功率45～2 000W);红外测温仪(smart仪器有限公司)、炒锅，秒表，载玻片。

1.2 试剂与试药

甲醇、乙酸乙酯、柠檬酸、柠檬黄均为分析纯，水为蒸馏水，生理盐水，云南白药胶囊(批号20070901，云南白药集团)。

藕节药材购自四川荷花池药材市场，经本校中药鉴定教研室卢先明教授鉴定为为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥根茎节部。藕节炭由实验室自制。

1.3 实验动物

健康昆明种小鼠由成都中医药大学动物研究中心提供，动物质量合格证:SCXK(川)2008－11号。

1.4 供试液的制备

取不同工艺炮制的藕节炭及生藕节各20 g，加10倍量的水，浸泡20 min，煎煮30 min，再加10倍量水，煎煮25 min，合并滤液，浓缩到40 mL，制成0.5 g/mL药液。

2 实验方法与结果

2.1 藕节的炮制

取生藕节，洗净，除去杂质，即为生品;选直径在1～2 cm净制后的生藕节，武火(锅底温度350℃，药物温度140℃，用红外测温仪测定锅温及药温)炒15 min，即为轻炭;武火炒29 min，即为标准炭;武火炒45 min，即为重炭。

表1 样品的收率及成品性状

2.2 薄层鉴别

样品的制备方法:取生品、轻炭、标准炭和重炭粉末各5 g，加50%甲醇100 mL水浴加热40 min，滤过，滤液回收溶剂至干，再分别用150 mL的乙酸乙酯水浴加热提取20 min，过滤，回收乙酸乙酯，残渣定容至5 mL，作为供试品溶液。照薄层色谱法(中国药典一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液各10 μL，分别点于同一羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿－乙酸乙酯－甲酸(8∶8∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，于紫外灯365 nm下检视。见图1:

从薄层鉴别结果看，炒炭后，A点是生品和炒炭品共有的点，炒制时间和炒制温度对其稳定性影响不大。炒重炭没有B点荧光，可能是炒制时间太长被破坏，在A、B两点之间，炒重炭隐约可见一个荧光，但又与B点不在同一Rf值上，可能是破环产生的成分。因此保持炒炭存性，必须要有B点。

图1 不同温度炮制的藕节炭薄层鉴别图

2.3 吸附力的测定

2.3.1 柠檬黄标准溶液的配制:精密称取柠檬黄0.028 89 g，用柠檬酸标准溶液稀释至250 mL。

2.3.2 线性范围测定:精密吸取柠檬黄标准溶液1.00、3.00、5.00、7.00、9.00 mL，分别置 50 mL 量瓶中，用柠檬酸溶液稀释至刻度，摇匀。按分光光度法在428 nm处测定吸收度，以柠檬黄的量为横坐标，以吸收度为纵坐标绘制标准曲线。回归方程:C=1.055A－0.022 6，柠檬黄的含量在 0.115 6～1.040 4 mg内线性关系良好。

2.3.3 供试品吸附力的测定:分别取生品、轻炭、标准炭、重炭样品0.1 g各两份，置于50 mL量瓶中，一份加入柠檬酸溶液，振摇15 min，过滤，滤液作为空白溶液;一份加入5 mL柠檬黄标准溶液，用柠檬酸溶液稀释到刻度，振摇15 min，过滤，滤液作为供试品溶液，以柠檬酸溶液为空白对照，于428 nm下测定吸光度。

样品的吸附力计算方法为:

未被吸附的柠檬黄的吸光度=供试品溶液的吸光度－空白溶液的吸光度，

吸附力=(加入柠檬黄的量－未被吸附的量)/样品量

由表2可知:炒炭后，藕节炭的吸附力先降后升，达到最大值，并高于生品，然后开始下降，说明藕节炒炭至一定程度时其吸附力增强，“不及”或“太过”可使吸附力相对降低，此方法考查某种药物炒炭后是否“存性”具有一定合理性，所以，我们认为藕节炒炭后“存性”，其吸附力不得低于2.50。

表2 供试品的吸附力

2.4 凝血时间的测定

取体重18～20 g健康小鼠60只，♀♂各半，按体重随机分为6组，每组10只，即生理盐水组、阳性组，生品组、轻炭组、标准炭组、重炭组，实验前12 h禁食不禁水。每天早上灌胃，连续3 d，于末次给药后1 h(室温19℃)进行玻片法［8］测定凝血时间，即动物末次给药1 h后，眼球取血，在干净的玻片两端分别滴两滴血液，每隔30 s用大头针由里向外轻挑，直到有血丝出现即为凝血时间，并用另外一滴血验证，结果见表3。

表3 凝血时间结果

与生理盐水组相比，生品与重炭均有显著性差异(P＜0.05)，轻炭与标准炭均有极显著差异(P＜0.01)。组间比较，生品与轻炭组、标准炭组、重炭组均无显著性差异，但从凝血时间的均值来看，藕节炒炭后，对小鼠的凝血时间是有缩短的趋势。

由上表可知:生藕节和藕节炭对小鼠的凝血时间均比空白组要短，且炒炭后优于生品;标准炭的凝血时间最短，重炭组的凝血时间最长，这也证实了古人炒炭时强调“火候”标准应防止“太过或不及”的道理。

3 结论与讨论

3.1 古人在炒炭时强调炒炭存性，并防止“太过或不及，即不及则功效难求，太过则气味反失”，藕节炭与生品的薄层鉴别比较，炒制时间和炒制温度对B点成分影响较大，炒重炭中B点荧光消失，因此要保证藕节炒炭存性，可以以B点为判断依据。从吸附力的测定结果可知炒炭后的吸附力先降后升，并且标准炭的吸附力最大，超过生品;从凝血时间的测定结果可知:藕节炒炭后，对小鼠的凝血时间均有明显缩短，其中凝血作用最好的是标准炭组;四个样品的凝血时间也是呈现抛物线趋势，这同吸附力和薄层鉴别的趋势一致，可认为将药物炒至一定程度的炭后，有的成分被破坏，也有新成分的生成，生成的新成分是否是增强止血的物质，我们正在进一步深入研究求证，同时可初步阐明古人“不及则功效难求，太过则气味反失”的科学内涵。

3.2 目前藕节炭还没有统一、规范的炮制工艺和标准，这就导致各地炒炭存性程度不同，甚至还有炒炭太过，导致其原有的有机物大部灰化，影响临床疗效。因此本课题从炒炭存性的角度出发，综合了薄层鉴别、吸附力的测定及凝血时间的药效学指标，建立了藕节“炒炭存性”的评价标准，结果证明该标准切合实际，简单可行，能够较好的控制炒炭程度，从而在原有的经验评价的基础上，进一步完善标准，为更好地控制藕节炭的质量打下一定的基础。

［1］中国药典［S］.一部.2005:141.

［2］毛维伦，许腊英，郑光明，等.炭药的炮制工艺改进及质量标准初探［J］.湖北中医学院学报，2000，2(4):471.

［3］许腊英，毛维伦，杨 谨，等.乌梅炭吸附力的测定比较［J］.中国医院药学杂志，2004，24(5):280.

［4］姚少威，姚念环.乌梅及其伪品薄层与紫外光鉴别［J］.时珍国药研究，1997，8(3):247.

［5］龙全江，王晓莉，常承东.大蓟、大黄、石榴皮炭药炮制前后显微比较分析［J］.云南中医学院学报，1999，22(1):26.

［6］史克莉，孔一凡.用电导法研究“炒炭存性”的质量标准［J］.光明中医，2007，22(11):68.

［7］张 健，焦东桂，孙远东.5种中药的酸性与药理作用的关系［J］.基层中药杂志，1999，13(2):23.

［8］陈 奇.中药药理实验方法［M］.北京:人民卫生出版社，1994.