珍珠菜提取物微孔渗透泵控释片的制备工艺研究

游本刚， 潘海敏， 许琼明， 唐丽华， 杨世林

(苏州大学医学部药学院，江苏苏州215123)

口服渗透泵制剂是以渗透压作为释药动力的控释片，具有零级释药、释药速度恒定以及受释药环境影响较小等特点［1-3］，被认为是迄今为止口服控释制剂中最为理想的一种［4］。目前，已上市的渗透泵片有盐酸奥昔布宁(商品名Ditrophan XL)、硝苯地平(商品名Procardia XL)、盐酸维拉帕米(商品名Covera-HS又名Coer-24)等等，但中药提取物的渗透泵产品报道很少。本课题组对珍珠菜［5］进行了多年研究，制备了具有良好抗肿瘤作用的珍珠菜有效部位提取物［6-9］。本实验以珍珠菜有效部位提取物为模型药物制备了微孔渗透泵控释片，通过相似因子法对制剂的体外释放度实验进行了评价，并通过正交设计优化了处方，以期为中药有效部位提取物制备微孔渗透泵控释制剂提供一定的参考。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪(配备SPD-M20A型二极管阵列检测器，LC-20AT型泵，CTO-10AS VP型温控柱温箱，LC solution型色谱工作站，日本岛津仪器公司);KQ-100DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);电子分析天平(starorious);RC-6溶出度测定仪(天津市新天光分析仪器技术有限公司);TDP型单冲压片机;YD-片剂硬度测试仪(天津市光学仪器厂);BY-300A型小型包衣机(上海黄海药检仪器厂)。

1.2 试剂 芦丁标准品(中国药品生物制品检定所，批号:080-9002);柚皮素-7-O-葡萄糖苷对照品(实验室自制);珍珠菜提取物(ZTF，实验室自制);醋酸纤维素(CA，分析纯，国药集团化学试剂有限公司);聚乙二醇400(PEG400，分析纯，国药集团化学试剂有限公司);丙酮(分析纯，国药集团化学试剂有限公司);邻苯二甲酸二丁酯(DBP，分析纯，国药集团化学试剂有限公司);乙腈(色谱纯，TEDIA公司);其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 微孔渗透泵控释片的制备 片芯制备:将处方量的ZTF粉末与过80目筛的各种辅料混合均匀，水作黏合剂制软材，过20目筛，在40℃下干燥后用20目筛整粒，加入一定量的NaHCO3和滑石粉混合均匀，填充于直径8 mm浅冲模内压得片重为(200±10)mg片芯。

包衣液制备:将适量醋酸纤维素溶于丙酮中，配制一定浓度的醋酸纤维素丙酮溶液，加入一定量的致孔剂和增塑剂，即得。

渗透泵片制备:将片芯置于包衣锅内，在滚动条件下喷入包衣液，固定包衣液流速为2.5 mL/min，喷雾压力为10.34 kPa，包衣温度为40℃，包衣锅转速为35 r/min，至包衣膜增重达到要求即可。

2.2 体外释放度试验

2.2.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm);流动相:以乙腈为流动相A，0.1%磷酸为流动相B，采用梯度洗脱:0～18 min，83% ～80%B;18 ～30 min，80% ～86%B;检测波长:芦丁和柚皮素-7-O-葡萄糖苷的检测波长分别为254 nm和281 nm;流速:1.0 mL/min;柱温:35℃;进样量20 μL。分别制备对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液注入色谱仪，记录色谱图，结果见图1，由图可见辅料对于药物的测定无干扰。

2.2.2 体外释放度测定 取珍珠菜提取物微孔渗透泵控释片，按照中国药典2005年版(二部)附录XC第三法测定，以250 mL 0.5%SDS水溶液为溶出介质，转速100 r/min，温度(37±0.5)℃，分别于第2、4、6、8、12 h 取样3 mL(取出后迅速补加等量的新鲜介质)，经0.22 μm微孔滤膜滤过，弃初滤液，取续滤液经HPLC分析求得芦丁和柚皮素-7-O-葡萄糖苷的浓度并计算其累积释放百分率。

2.2.3 体外释放度评价 采用f2相似因子法对制剂体外释药曲线的相似性进行评价，公式如下:f2=50×lg{［1+(1/n)∑(Rt-Tt)2］-0.5×100}。其中，Rt和Tt分别代表参比制剂和受试制剂在时间t的释放度，n为时间点的个数。若50≤f2≤100则认为两制剂的释放度相似，反之，则认为不相似。

2.3 不同因素对珍珠菜提取物微孔渗透泵片释药的影响

2.3.1 NaCl用量对药物释放的影响 固定片芯处方其他成分的用量不变，使NaCl用量分别为片重的10%、25%、40%，填充剂的用量随之作适当的调整，考察不同用量的NaCl对药物释放的影响，结果见图2。采用相似因子法进行相似性判定，结果表明NaCl的用量对药物的释放有一定的影响。

图2 NaCl用量对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.2 NaHCO3用量对药物释放的影响 固定片芯处方各成分的用量，分别加入片芯处方量0%、2%、4%、6%、8%的 NaHCO3压片、包衣，制备渗透泵控释片，考察NaHCO3用量对药物释放的影响，结果见图3。由释放曲线可见，随着NaHCO3用量的增大，药物12 h的累积释放量呈明显上升趋势。相似因子法判定结果表明，NaHCO3用量对药物的释放有明显的影响。

图3 NaHCO3用量对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.3 片芯制备工艺方法对药物释放的影响 分别采用湿法制粒压片和粉末直接压片法，按照上述处方制备渗透泵控释片，考察制片工艺方法对药物释放的影响，结果见图4。相似因子法判定结果表明，片芯制备工艺方法对药物的释放有明显的影响。由释药曲线图可见，湿法制粒12 h药物释放较完全，且由于湿法制粒具有外观美观，流动性好，耐磨性较强，压缩成形性较好等优点，因此片芯制备工艺选用湿法制粒压片。

图4 制片工艺对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.4 片芯硬度对药物释放的影响 按照上述片芯处方，采用湿法制粒压片，以不同压力分别制备硬度为2.5～3.0 kg，4.0～4.5 kg，6～6.5 kg的片芯，包衣后考察不同片芯压力对药物释放的影响，结果见图5。采用相似因子法进行相似性判定，结果表明片芯硬度对药物释放有明显的影响。结合药物释放曲线，固定片芯硬度为2.5～3.0 kg时药物在12 h内可以获得较好的药物释放行为。

图5 片芯硬度对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.5 包衣处方中DBP用量对药物释放的影响固定包衣液中PEG400的浓度为2%，向2%CA的丙酮溶液中加入一定量的DBP，制得DBP浓度分别为0.2%、0.4%、0.6%和0.8%的系列包衣液，包衣，考察DBP用量对药物释放的影响，结果见图6。采用相似因子法进行相似性判定，结果表明DBP用量对药物释放有明显的影响。结合药物释放曲线，固定DBP浓度为0.4%时药物释放较完全且有良好的重现性。

图6 DBP用量对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.3.6 包衣处方中PEG400用量对药物释放的影响 固定包衣液中DBP的浓度为0.4%，向2%CA的丙酮溶液中加入一定量的PEG400，制得PEG400浓度分别为0.4%、1%、1.5%、2%、3%的系列包衣液，包衣，考察PEG400用量对药物释放的影响，结果见图7。相似因子法判定结果表明，包衣液中PEG400浓度对药物的释放有显著的影响。由释放曲线图可以看出，随着PEG400浓度的增加，药物的释放加快。而当PEG400浓度达3%时药物释放存在一定的突释现象。原因是PEG400是亲水性的增塑剂(致孔剂)，随着致孔剂含量的增多，在水溶液中沥出后，包衣膜表面形成的微孔增多，所以药物的释放加快。

2.3.7 衣膜增重对药物释放的影响 固定片芯处方及包衣处方，以衣膜增重(以片芯增重计算)来反映包衣膜的厚度，制备衣膜增重分别为3%、5%、7%和9%的控释片，考察衣膜增重对释药行为的影响，结果见图8。由图可见，随着衣膜增重的增加，药物释放减慢。相似因子法判定结果表明，衣膜增重对药物的释放有比较显著的影响。衣膜厚度的增加，降低了水分向膜内的渗透速率，从而使药物向膜外释放的速率减慢。

图7 PEG400用量对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

图8 衣膜增重对药物释放的影响(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

2.4 正交设计优化处方 单因素实验研究发现NaHCO3用量(A)、NaCl用量(B)、PEG400 用量(C)和包衣膜增重(D)等4个因素对药物释放的影响较为显著，参考具体结果将此4个因素分成3个水平，根据正交实验设计表L9(34)安排实验，见表1。

参照2005年版《中国药典》附录XIX D缓释、控释和迟释制剂指导原则，采用综合加权评分法评价试验结果，重点对以下四个指标进行考察:①2 h控释片的累积释放量(L2h)，用以考察药物是否有突释，以20%为指标，权重系数为1;②6 h控释片的累积释放量(L6h)，用以考察释药特性，以60%为指标，权重系数为1;③12 h控释片的累积释放量(L12h)，用以考察药物是否释放完全，以95%为指标，权重系数为1;④ 相关系数r，用以考察药物是否遵从零级释药规律，以1为指标，权重系数为2。按下式分别计算芦丁得分(Lrutin)和柚皮素-7-O-葡萄糖苷的得分(LNaringenin-7-O-Glucoside):

表1 正交设计因素水平

L越小，表示释药速率越好，越接近零级释药规律，结果见表 2、3。

表2 正交实验及结果

表3 方差分析结果

通过直观分析，由极差值R可知，对药物释放产生影响的因素主次顺序为D＞C＞B＞A;方差分析结果表明，因素D即包衣膜增重对药物释放有显著性影响。实验确定最终优选处方为A3B1C3D1，即NaHCO3用量为8%;NaCl用量为30%;PEG400浓度为2%;包衣膜增重为4%。根据最佳处方制备渗透泵控释片并进行体外释放度测定，结果见图9。表明该制剂在0～12 h内体外释放呈良好的零级释放特征(rrutin=0.981;rNaringenin-7-O-Glucoside=0.988)。

图9 3批样品重现性考察(A.芦丁 B.柚皮素-7-O-葡萄糖苷)

3 讨论

微孔渗透泵片是渗透泵片的一种，它是通过向包衣膜内加入致孔剂来改善膜的通透性，这种包衣膜表面无释药孔，药物溶液通过致孔剂形成的海绵状微孔释放出来。因此简化了渗透泵片的制备工艺，并避免了单一释药孔所造成的局部药物浓度过高所引起的负面作用。现今已有以阿魏酸钠［10］、三七总皂苷［11］等为模型药物制备的微孔渗透泵片的相关报道。

由于质控指标性成分芦丁和柚皮素-7-O-葡萄糖苷在蒸馏水中的平衡溶解度较低，难以满足溶出实验的漏槽条件，所以本研究在处方前溶解度研究的基础上选择了0.5%SDS的水溶液作为渗透泵控释片的释放介质。

渗透泵控释片片芯内的药物为微溶于水的成分，预实验发现，不管是调整片芯的处方还是调节包衣处方，药物12 h的累计释放百分率始终达不到要求，而通过加入NaHCO3后药物的释放得以提高，基本符合要求。可能是由于珍珠菜提取物有效部位呈弱酸性，加入NaHCO3后，当水分渗透入片芯时，诱发酸性药物与片芯内的碳酸氢钠发生反应，产生的二氧化碳气体有助于药物的充分释放。这方面的原因还有待于进一步研究探讨。

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