两省交界地区β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血的发生率及基因诊断

郭柳薇,黄 ,李颖莉

(广西医科大学第七附属医院,广西梧州 543001)

两省交界地区β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血的发生率及基因诊断

(广西医科大学第七附属医院,广西梧州 543001)

目的研究两省(广东、广西)交界地区β地中海贫血杂合子复合缺失型α地中海贫血的基因型及发生率。方法采用RDB/PCR技术检测17种中国人较常见β地中海贫血基因突变位点。采用单管多重PCR技术检测3种缺失型α地中海贫血(左缺失-α4.2缺失,右缺失-α3.7缺失,东南亚型缺失__SEA)。结果在217例β地中海贫血杂合子标本中共检出30例复合缺失型α地中海贫血,检出率为 13.82%。 其中β 地中海贫血杂合子合并__SEA/α α20例(9.21%),合并-α3.7/α α7例(3.22%),合并-α4.2/α α2例(0.92%),合并__SEA/-α4.21例(0.46%)。检出的 30例β地中海贫血基因突变类型共有 8种,分别是CD41-42(-TCT T)、TATAboxnt-28(A→G)、CD17(A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅱnt654(C →T)、β E(G →A)、TATAboxnt-29(A→G)、CD43(G→T)。结论两省交界地区人群β地中海贫血杂合子复合缺失型α地中海贫血的发生率为13.82%,β地中海贫血基因突变类型呈现多样性。在遗传咨询和产前诊断中应引起重视。

α地中海贫血;β地中海贫血;基因诊断

地中海贫血(Thalassemia)是由于珠蛋白肽链合成受到部分或完全抑制,造成肽链合成不平衡所引起的一组遗传性溶血性贫血,分为α地中海贫血和β地中海贫血。由于珠蛋白缺失的多样性,所致缺乏的珠蛋白链的类型、数量及临床表现不一[1]。α地中海贫血和β地中海贫血是中国南方(尤其是广东和广西)最常见、发病率最高、危害最大的人类遗传病之一。梧州市在地理上是广东与广西交界的地方,根据本院两省交界地区随机人群筛查资料表明,α地中海贫血基因检出率为9.44%,β地中海贫血基因检出率为8.15%[2]。两种不同类型地中海贫血杂合子之间婚配,即有生育α与β地中海贫血双重杂合子的机会。为了解两省交界地区β地中海贫血杂合子复合缺失型α地中海贫血的发生率及基因型分布,本实验对217例β地中海贫血基因携带者进行了α珠蛋白基因分析研究,现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 217例标本为广西梧州市及其周边的岑溪、苍梧、藤县和广东的封开、郁南、都城等地来本院产检的孕妇及其丈夫以及部分婚检者,受检者中男80例,女137例。年龄20～40岁。

1.2 地中海贫血基因诊断 由深圳亚能生物技术有限公司提供试剂,按说明进行操作。

1.3 标本采集和制备 用EDTA-K2抗凝血2 mL,用全血DNA快速提取试剂从抗凝全血中抽提人基因组DNA,按说明进行操作。

1.4 β地中海贫血基因检测 采用RDB/PCR技术检测17种中国人较常见β地中海贫血基因突变位点。取3μ L DNA(2～200 ng/L)加入反应管中,PCR条件:50℃15 min,95℃10 min,然后94℃60 s→55℃30 s→72℃30 s经35个循环,最后72℃延伸5 min。将扩增产物与结合有中国人较常见的17种β地中海贫血基因突变寡核苷酸探针的膜条进行反向点杂交,检测中国人群常见的8个位点:CD41-42(-TCT T),IVS-2-654(C→T),CD17(A→T),-28(A→G),CD26(G→A),CD71-72(+A),CD43 G→T,-29 A→G)和9个少见位点突变(起始密码子 ATG→AGG,CD14-15(+G),CD27-28(+C),-32(C→A),-30(T→C),IVS-1-1(G→T),IVS-1-5(G→C),CD31(-C),CAP+40-+43(-AAAC)。

1.5 α地中海贫血基因诊断 采用单管多重PCR技术检测3种缺失型α地中海贫血(左缺失-α4.2缺失,右缺失-α3.7缺失,东南亚型缺失__SEA)。取 DNA 3 μ L(2～200 ng/L)加入反应管中。PCR反应条件:97℃15 min,然后98℃45 s→64℃90 s→72℃180 s经35个循环,最后72℃延伸5 min。取8μ L的PCR产物在1.2%的琼脂糖凝胶(加EB)电泳,紫外灯下观察基因图谱为 1 800 bp、2 000 bp、1 600 bp、1 300 bp 的条带,分别为α珠蛋白正常基因,-α3.7缺失型、-α4.2缺失型、__SEA缺失型的扩增产物。

2 结 果

RDB检测β珠蛋白基因结果:检测出217例β地中海贫血基因携带者。在217例β地中海贫血中共检出30例复合缺失型α地中海贫血。检出率为13.82%。其中β地中海贫血杂合子合并__SEA/α α20 例(占9.21%),合并-α3.7/α α7 例(3.22%),合并-α4.2/α α2 例(0.92%),合并__SEA/-α4.21 例(0.46%)。 检出的30例β地中海贫血基因突变类型共有8种,分别是CD41-42(-TCTT)、TATAboxnt-28(A →G)、CD17(A→T)、CD71-72(+A)、IVS-Ⅱnt654(C →T)、βE(G→A)、TATAboxnt-29(A→G)、CD43(G→T)。具体结果见表1、2。

表1 217例β地中海贫血杂合子基因型分布

表2 30例轻型β地中海贫血复合α地中海贫血双重杂合子基因分布

3 讨 论

在地中海贫血高发区,β地中海贫血复合α地中海贫血的检出率已引起人们的关注。人类有4个α-珠蛋白基因位于16对染色体上,每条染色体上有2个α-基因(α 1和α 2)。如果一条16号染色体缺失1个α基因者称为α+地中海贫血(亦称α地中海贫血2),缺失2个α基因者称为α0地中海贫血(亦称α地中海贫血1)。在东南亚地区α-基因的改变以缺失型较为常见,最常见的为东南亚缺失(__SEA/α α)、左缺失(-α4.2/α α)及右缺失(-α3.7/α α)。

本组资料显示,两省交界地区α、β复合型地中海贫血的检出率为13.82%,其中复合α地中海贫血1的检出率为9.21%,复合右缺失α地中海贫血2为3.22%,复合左缺失α地中海贫血2为0.92%。与韩俊英等[3-4]报道的大致相符。值得注意的是有1例CD17(A→T)复合 HbH(__SEA/-α4.2),出现3种基因型同存现象。这类地中海贫血不仅有β基因的缺陷而且又有α基因的缺失,这使得α和β珠蛋白链的失衡状态有所改善,相应的临床症状减轻,表现为中间型地中海贫血[5]。常常表现β地中海贫血的特征,如果不作基因诊断,往往会掩盖α地中海贫血的存在。

引起β地中海贫血的分子机制主要是β珠蛋白基因点突变,是中国南方最常见的遗传性溶血性疾病之一。据文献报道,全世界已发现300多种点突变类型,中国人占21种,且以CD41-42(-TCT T)、IVS-Ⅱnt654(C→T)、CD17(T→A)、-28(A→G)、CD71-72(+A)为最常见。从表1、2看出本组确诊的217例β地中海贫血杂合子中以上5种突变类型占94.93%,与黄欣秋[6]报道的相似,但基因位点突变率排序有所不同。

在2种相同类型地中海贫血杂合子婚配,生育重型地中海贫血患儿的概率为1/4,1个β地中海贫血杂合子与1个α地中海贫血杂合子婚配无生育重型地中海贫血患儿的风险。但生育α、β复合型地中海贫血双重杂合子的概率为1/4。在α、β复合型地中海贫血发生率这样高的情况下,这种α β地中海贫血双重杂合子无论与α或β地中海贫血杂合子婚配,均有1/4的概率生育重症地中海贫血患儿。即胎儿水肿综合征或β地中海贫血重症患儿,重型β地中海贫血患者靠长期输血为生,大多也因严重贫血或继发感染在儿童期死亡,给社会和家庭带来沉重的经济负担[7]。随着分子生物技术的不断发展和基因检测方法的日趋成熟,积极开展地中海贫血高发区人群的筛查,准确诊断β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血,对及时指导婚配,避免重症地中海贫血患儿的出生具有重要意义。

[1]李军,殷和.地中海贫血的诊断技术及进展[J].重庆医学,2009,38(7):864.

[3]韩俊英,曾瑞萍,胡彬.广东地区β地中海贫血复合缺失型α地中海贫血双重杂合子检出率[J].中华血液学杂志,2001,22(10):514.

[4]区小冰,黄钰君,张力,等.小儿α、β复合型地中海贫血基因诊断及临床表现[J].临床血液学杂志:输血与检验版,2007,4(4):147.

[5]李德发,祖莹,孙平,等.合并α珠蛋白基因缺失的β地中海贫血患儿基因型分析[J].中国优生与遗传杂志,2005,13(3):23.

[6]黄欣秋.21例β0地中海贫血的基因类型与临床表现分析[J].广西医学,2009,31(4):497.

[7]莫建坤,区小冰,黎永新.β-地中海贫血患者与其父母地中海贫血基因检测结果分析[J].广东医学,2006,27(7):1001.

Incidence and genetic diagnosis ofβ-thalassemia compoundα-thalassemia in the border area of two provinces

GUO Liu-wei,HUANGYing,LI Ying-li
(The Seventh Af filiated Hospital of Guangxi Medical University,Wuzhou 543001,China)

ObjectiveTo investigate the genotype and incidence of β-thalassemia compound α-thalassemia in the border area of Guangdong and Guangxi.MethodsThe 17 β-thalassemia mutation were detected by reverse dot blot(RDB).Three kinds of deletional α-thalassemia were detected by gap-PCR.ResultsOf 217 β-thalassemia,30 were detected to be combined with α-thalassemia:20 combined with__SEA/α α(9.21%),7 combined with-α3.7/α α(3.22%),2 combined with-α4.2/α α(0.92%),1 combined with__SEA/-α4.2(0.46%).In the 30 heterozygotes,8 types mutation were as follow:CD41-42(-TCTT),TATAboxnt-28(A → G),CD17(A→T),CD71-72(+A),IVS-Ⅱnt654(C→T),β E(G→A),TATAboxnt-29(A→G),CD43(G→T).Conclusion13.82%ofβ-thalassemia compound α-thalassemia were found in the border area of Guangdong and Guangxi.The type of gene mutation in βthalassemia were multifarious.It should be pay attention to the genetic counseling and prenatal diagnosis.

α-thalassemia;β-thalassemia;gene diagnosis

R556.9;Q344.13

A

1671-8348(2010)14-1827-02

2009-10-06

2009-12-18)

·论 著·