白术中多菌灵农药残留量分析*

王 瑶, 富徐燕， 王 霞， 白 岩，杨赛赛， 潘兰英， 田 薇

(1.浙江农林大学 林业与生物技术学院,浙江 临安 311300；2.山东省分析测试中心，山东 济南 250000)

我国是生产和使用化学农药的大国,长期使用农药对生态环境及人体健康的危害和影响已经引起人们的高度关注.多菌灵(carbendazol，N-(2-苯并咪唑基)氨基甲酸甲酯)，又叫苯并咪唑 44 号、棉萎灵等，是一种广谱内吸性杀菌剂，能防治水稻、棉花、蔬菜、果树等多种作物的多种病害，尤其对子囊菌和半知菌引起的病害有较好的防治效果[1]，但它的残效期比较长，对哺乳动物有一定的毒性[2].因此,农产品中多菌灵残留量的测定越来越受到重视.近年来,有关多菌灵在多种作物上的残留分析方法有许多报道，如荧光分析法[3]、红外光谱法[4]、气相色谱法[5]、薄层扫描法[6]及紫外光谱法[7]等,其中:薄层扫描法灵敏度较低、气相色谱法需要对样品进行衍生化处理.因此，目前多菌灵的残留分析一般采用液相色谱法[8-11]，如Amadeo等用液相色谱-质谱(LC-MS)法[12]测定水果蔬菜中多菌灵的残留;Rodney[13]等用液相色谱法测定蓝莓中多菌灵的残留.有关多菌灵在白术果实上的残留研究尚未见报道.本文建立了用高效液相色谱法测定白术中多菌灵农药残留量的方法.

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters 2487型高效液相色谱仪;Waters 515 HPLC Pump;MILLIPORE超纯水器;DZG-6050型真空干燥箱;KQ2200DE型数控超声波清洗器.

石油醚、二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺均为分析醇;甲醇为色谱醇.多菌灵对照品(纯度≥99%)由农业部环境保护科研检测所研制.

多菌灵标准溶液的配制：准确量取0.90 mL 100 μg/mL的多菌灵标准品溶液，置于10 mL容量瓶中，以N,N-二甲基甲酰胺溶解并定容至刻度，摇匀后即为标准溶液.

1.2 实验方法

1.2.1 样品的处理

作物白术(Atractylodesmacrocephala)采自浙江农林大学百草园白术基地.农药为50%的多菌灵可湿性粉剂.原药剂用水稀释500倍，于6月5日进行喷洒施药.喷药后按一定时间间隔随机采样，采样后立即干燥，贮藏于阴凉处备用.

精确称取制备好的白术样品2.000 g于三角瓶中，加入20 mL甲醇和5 mL 0.1 mol/L盐酸溶液，超声提取1 h，抽滤，再用15 mL甲醇洗残渣，合并滤液于平底烧瓶中，在40 ℃水浴减压浓缩至15～20 mL.将浓缩后的提取液转移至分液漏斗中，加入10 mL 0.1 mol/L盐酸溶液和50 mL 0.1 g/L NaCl溶液后，再加入25 mL石油醚剧烈振荡1 min，静置分层后弃去石油醚层.下层水相用2 mol/L NaOH溶液调节pH值至6.5，再用二氯甲烷萃取3次，每次15 mL，合并二氯甲烷萃取液于平底烧瓶中,经无水Na2SO4干燥，减压浓缩至近干，再用氮气吹干，以N,N-二甲基甲酰胺定容至2 mL,即得样品溶液.

1.2.2 色谱条件

色谱柱：4.6 mm×150 mm，TRACE EXCEL ODS不锈钢柱，粒径5 μm.流动相：V(甲醇)∶V(水)=35∶65,流速1.0 mL/min.检测波长：281 nm.

2 结果与讨论

2.1 样品提取净化

多菌灵不溶于水，微溶于常用的有机溶剂.因此,常规方法用有机溶剂很难将多菌灵从白术样品中提取出来.本实验利用多菌灵在酸性条件下成盐而易溶于水的特性，使用甲醇和0.1 mol/L盐酸溶液，在超声提取器上超声1 h，提取白术中残留的多菌灵，净化后直接用液相色谱仪检测.

2.2 流动相选择

分别吸取对照品和样品溶液各20 μL，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件检测，以样品溶液中多菌灵的分离度作为指标，对所得谱图进行分析，进而确定合适的流动相.

流动相AV(甲醇)∶V(水)=45∶55，所得多菌灵色谱图见图1.结果显示目标峰基部未完全分离，即峰分离度不够.

流动相BV(甲醇)∶V(水)=35∶65,所得色谱图见图2.图2显示多菌灵的峰形及分离度良好.

因此,本实验选用V(甲醇)∶V(水)=35∶65的流动相系统.

2.3 精密度和重复性测定

精密度实验 分别取对照品溶液(9 μg/mL)20 μL，重复进样5次，测定每次进样后多菌灵的峰面积值,其相对标准偏差(RSD)为2.203%，表明仪器的精密度良好.

图1 流动相A条件下所得多菌灵色谱图

图2 流动相B条件下所得多菌灵色谱图

重复性实验 取同一个样品5份,按供试品制备方法制备后，重复进样5次，测定每次进样后多菌灵的峰面积值.结果显示：其RSD为3.18%，表明重现性良好.

2.4 线性关系和检出限测定

在上述色谱条件下，测定了HPLC/UV对多菌灵响应的线性关系.检测线性范围为0.45～108 ng，其线性回归方程式为

Y=8 886.7X-8 875.2,R=0.999 7.

表明对照品溶液在0～5.4 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系.

2.5 稳定性检测

取新鲜配制的样品溶液，分别在0，2，4，8，16，24 h进样20 μL,测定峰面积，其RSD为3.97%，表明稳定性良好.

2.6 样品分析及回收率检测

在上述色谱条件下,准确吸取已制备好的样品溶液20 μL，注入高相液相色谱仪中，用外标法定量，根据公式计算残留量,结果见表1.

表1 多菌灵在白术中的含量随时间呈递减关系

回收率实验：精密称取已知含量的样品2 g，加入一定量的多菌灵标准品，按上述方法对样品进行提取、净化和色谱测定后，计算添加回收率,结果见表2.多菌灵在样品中的添加回收率在94.57%～103.33%，RSD为3.75%.

3 结 论

1)本文采用反相高效液相色谱法分析白术中的多菌灵残留，利用高效液相色谱仪的洗脱功能，使残留的多菌灵在7.5 min时流出，而其他基质共提物则在其前流出，对多菌灵不产生干扰，从而使得定性定量结果更趋准确和真实.检测线性范围为0.45～108 ng，加样回收率在94.57%～103.33%，最低检出量3.6×10-10g，最低检测质量浓度为0.022 5 μg/mL.方法定量准确、快捷，操作简便，灵敏度高，满足农药残留分析的要求.

2)国家生产安全标准规定无公害药材中多菌灵的残留量应小于0.5 mg/kg，根据本实验结果，多菌灵在白术上最后一次施药到采收应不少于30 d，最好不少于40 d.

表2 多菌灵残留分析方法的添加回收率

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