膀胱移行细胞癌中环氧化酶-2的表达研究

陆浩源 白先忠

摘要: 目的:检测环氧化酶-2(COX-2)在膀胱癌组织中的表达,探讨COX-2表达与膀胱癌临 床病理的关系。方法:采用免疫组化方法检测56例膀胱癌组织中COX-2的表达。结果:膀胱癌 组织中COX-2的阳性表达率为57.1%。COX-2的表达与肿瘤的病理分级和临床分期相关。结 论:COX-2的异常表达可能在膀胱移行细胞癌的发生发展中起一定的作用。

关键词:膀胱移行细胞癌;环氧化酶-2;免疫组化

中图分类号: R737.14 文献标识码: A 文章编号: 1008-2409(2009)05-0805-03

Expression of cyclooxygenase-2 in human transitional cell carcinoma of t he bladder/LU Hao-yuan, BAI Xian-zhong∥The Affiliated Tumor Hospital of Guang xi Medical University, Nanning 530027, China

Abstract:Objective:To study the expression of cyclooxygenase-2(COX-2) in human transiti onal cel l carcinoma of the bladder(BTCC)and their relationship with clinical pathologic al characteristics. Methods: S-P immunohistochemistry staining was performed t o e valuate the positivity of COX-2 in fifty-six cases of transitional cell carcin om a of the bladder and 10 cases of normal bladder mucosa. Results: The positive e xp ression of COX-2 were 57.1%(32/56), the expression of COX-2 was related tocl inic stage and the tumor grade(P<0.05). Conclusion: The abnormal expressio n of C OX-2 might play a certain role in course of the occurrence, development of tra nsitional cell carcinoma of the bladder.

Key words: transitional cell carcinoma of the bladder; COX-2; imm unohistochemistry

膀胱移行细胞癌的发生､发展是一个复杂的病理过程,常与多种癌基因和抑癌基因的表达及 调控相关。环氧化酶(COX)是合成前列腺素的限速酶,其在体内有两种亚型:COX-1 和 C O X-2。近年研究发现许多癌前病变和恶性肿瘤中均有COX-2基因的扩增及其蛋白的高表达, 但 其与膀胱移行细胞癌病理分化程度､临床分期的相关性,研究结果并不一致。本研究检测CO X-2在膀胱癌中的表达,探讨COX-2表达与膀胱癌临床病理关系,揭示COX-2在膀胱癌发生 ､发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 标本收集

膀胱癌组织取自广西医科大学第一附属医院泌尿外科2003~2005年间部分膀胱癌患者。入选 患者均诊断明确,资料完整,共56例,其中男47例,女9例;年龄24~85岁,平 均(62.43±12.08)岁,所有标本均经病理证实为膀胱移行细胞癌。56例标本病理分级按 WHO标准分为:G1 23例,G2 20例,G3 13例。临床分期按UICC-TNM标准分为:Tis- T1期33例,T2~T4期23例。另取10例正常膀胱黏膜标本做对照。

1.2 方法

使用链霉素抗生物素蛋白质-过氧化酶(SP)法行免疫组化检验,试剂及试剂盒均购自福建迈 新生物技术开发公司,一抗为兔抗人COX-2单克隆抗体工作液 RMA-0549(克隆号SP21); 二抗为即用型第二代免疫组化Elivision^TMplus广谱试剂盒(KIT-9901);用EDTA修复法修复 抗原;DAB法显色。采用已经研究证实为COX-2蛋白阳性表达的肺癌标本作为阳性对照,以P BS替代一抗为空白对照。

1.3 结果判断

参照文献报道[1],显微镜下观察细胞染色情况,COX-2阳性细胞的标志为细胞浆 内或胞膜 上呈棕黄色,分4个级别。分级标准为∶-,细胞无着色;+,细胞胞浆内微弱且弥漫染色 (可以包括<10%的细胞胞浆内强染色);,10%~90%的细胞胞浆内中度或强染色;—,>90%的细胞胞浆内强染色;-,判定为阴性表达,+~肺阳性表达。

1.4 统计学分析

实验结果采用SPSS 10.0进行统计处理,α值取0.05作为显著性标准。

2 结果

2.1 COX-2在膀胱癌细胞的表达

COX-2阳性表达产物呈黄色颗粒状,表达较强时呈棕黄色,定位于癌细胞浆中。COX- 2在膀胱癌细胞中阳性表达率为57.14%(32/56),其中弱阳性11例,中等阳性15例,强阳性 6例,但在正常膀胱细胞中为阴性表达,见表1。

COX-2的阳性表达与膀胱移行细胞癌的生物学行为密切相关,与膀胱移行细胞癌病理分级､ 临床分期密切相关,差异有统计学意义(分别为P<0.01,P<0.05),见表2。3者 的阳性率均随肿瘤分化强度的降低,恶性程度的增加其阳性率逐渐上升(分别为P<0.01,P <0.05),见表3。

3 讨论

COX-2基因在正常情况下绝大多数不表达,只有在细胞受到细胞内外各种因素(如细胞因子 ､ 生长因子､癌基因､促癌剂､一氧化氮等)刺激后才表达。近年的研究表明肿瘤组织中COX- 2过度表达是一种普遍现象[2,3]。COX-2主要通过抑制细胞凋亡､抑制机体免疫 功能､促进 血管形成､增加肿瘤细胞的侵袭能力和促进癌前病变向肿瘤转化而参与癌的形成;通过影响 细胞粘附､免疫监视､凋亡及血管生成从而促进肿瘤的生长和蔓延[4,5]。因此认 为COX-2的表达与两项主要反映肿瘤恶性表现的指标即病理分级和临床分期有关。

本研究中COX-2在膀胱移行细胞癌中的表达率为57.1%,而在正常膀胱黏膜中不表达,预示C OX-2可能可以作为膀胱移行细胞癌化学预防和治疗的靶点。非甾体类抗炎药如阿司匹林等 是 临床上应用已久的前列腺合成酶抑制剂,它们非选择地抑制COX-1和COX-2。实验研究发现 用 非选择性COX抑制剂NSAI-D或选择性抑制剂均可降低啮齿动物化学致癌模型中膀胱移行细胞 癌的发生率[6,7]。

实验结果表明COX-2的表达与膀胱移行细胞癌的病理分级和临床分期关系密切,且随着膀胱 移行细胞癌分级分期的增高,COX-2的表达逐渐增高。笔者推测COX-2可能在膀胱移行细胞 癌 发生发展的各个阶段都起作用。COX-2的表达伴随膀胱移行细胞癌从低分级到高分级､浅表 性到浸润性的恶性过程。这与Yoshimura[8]等的研究结果相符,与Wulfing等[6]的研究相矛 盾。造成上述结果相矛盾的原因,除可能与样本选择､研究所选用的抗体､实验条件等因素 有关之外,膀胱移行细胞癌的发生机制复杂,COX-2与其他癌基因或因子可能有相互作用也 是造成研究结果不一致的原因。因此对于COX-2在膀胱癌发生､发展中的作用及其与其他因 子的相互作用值得进一步探讨。