IL-6和MMP-9在大鼠急性坏死性胰腺炎发病过程中的作用

赵蕊 陈少夫

IL-6和MMP-9在大鼠急性坏死性胰腺炎发病过程中的作用

赵蕊 陈少夫

近年来，有关细胞因子及基质金属蛋白酶类在重症急性胰腺炎(SAP)发病中的作用已受到重视。目前认为，单核巨

噬细胞系统异常激活并产生过多的细胞因子是SAP时局部和全身并发症的主要机制。本文观察白介素-6(IL-6)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在急性坏死性胰腺炎(ANP)发病机制中的作用及两者的相关性，为SAP发病机制的研究提供更为可靠的理论依据。

一、材料与方法

1．模型制备及标本采集：雄性Wistar大鼠60只，体重170～190 g，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分为对照组和制模后1、2、3、4、5 d组，每组10只。术前12 h禁食，不禁水。采用逆行胆胰管注入4.5%牛磺胆酸钠1 ml/kg体重方法制备ANP模型。对照组注射等量生理盐水。制模后1、2、3、4、5 d分别断头处死大鼠，切取胰腺，10%中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋、切片，HE染色，行常规病理检查。

2．IL-6和MMP-9免疫组化染色：胰腺包埋组织连续切片后进行免疫组化染色。IL-6免疫组化试剂盒购于武汉博士德公司，MMP-9免疫组化试剂盒购于北京中山公司。具体步骤按试剂盒说明书操作。40倍镜下，每张切片选取四周及中央5个区域内阳性反应最多的视野，测阳性反应面积比(阳性面积/胰腺组织面积×100%)，取均值。

二、结果

1．胰腺组织病理改变：对照组胰腺结构正常，无出血和坏死。ANP组胰腺组织间质肿胀，弥漫性出血及片状坏死，腺泡细胞和脂肪坏死，且可见大量炎症细胞浸润。

2．IL-6和MMP-9蛋白表达变化：细胞质棕黄染色或伴有细胞核棕黄色颗粒为阳性。对照组IL-6无表达，制模后IL-6主要表达于胰腺腺泡胞质内及细胞外基质，制模后第3天达最高峰。对照组MMP-9为低表达，制模后MMP-9主要表达于胰腺腺泡胞质内及细胞外基质，制模后第4天达最高峰(Plt;0.05，表1，图1)。

3．IL-6与MMP-9表达的相关性：IL-6与MMP-9的相关系数r=0.317,P=0.025，两者呈正相关。

表1 各组IL-6和MMP-9蛋白表达

注：与对照组比较，aPlt;0.05；与其他各组比较，bPlt;0.05

图1制模后第3天IL-6(A)与MMP-9(B)表达(免疫组化 ×400)

讨论研究证明，炎症等疾病的发生及其病变过程与IL-6的异常表达有着密切相关[1]。IL-6可作用于多种靶细胞，能激化炎性细胞对炎性介质的效应[2]。IL-6在AP发病及发展过程中发挥重要作用。SAP患者中IL-6水平明显增高[3]。本结果显示，制模后IL-6表达升高，第3天达最高峰，以后有所下降，这与Mckay等[2]、Chen等[4]报道的结果相一致，说明IL-6在SAP发展中起重要作用。以IL-6为主的大量炎性细胞因子可致SAP向多器官功能衰竭(MSOF)发展[5]，甚至可作为AP患者并发呼吸衰竭的指标[6]，预测SAP的严重程度[7]。

MMP-9是金属蛋白酶家族中分子质量最大的酶，以酶原形式存在，又称为明胶酶B。MMP-9由中性粒细胞、单核细胞、血管内皮细胞等多种细胞分泌。活化的MMP-9具有基质金属蛋白酶的一些共同特点[8]：(1)能裂解一种或多种细胞外基质；(2)可被金属蛋白酶组织抑制剂(TiMPs)及耦合剂所抑制。正常情况下，MMP-9的活性被控制在较低水平，主要参与机体生理活动的需要。但在炎症、组织重塑等各种病理生理过程中高度表达，陈平等[9]认为，MMP-9在SAP中与病情的严重程度有明显相关性。Lohr等[10]报道，SAP病程中伴有细胞间基质的分解，并与病情的严重性相关，间接证明MMP-9在SAP疾病的发生发展中起重要作用。本结果显示，MMP-9在制模后平稳升高，第4天达最高峰，与上述结果基本一致。

本结果还显示，IL-6与MMP-9存在正相关性。这与IL-6延迟中性粒细胞(PMN)凋亡，保持大量PMN的存活，而PMN在前炎症因子的刺激下，大量释放MMP-9有关。因此在SAP发病过程中检测IL-6与MMP-9，有利于判断疾病的严重程度。

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2009-02-13)

(本文编辑：吕芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2009.06.021

110006 沈阳，沈阳市第六人民医院(赵蕊)；中国医科大学附属盛京医院消化内科(陈少夫)

陈少夫，Email:csf196211@yahoo.com.cn