食用菌的制种技术

杨彦秋　蔡正勇　柳继三

近年来,食用菌生产发展迅速,成为农民增收的良好途径,在食用菌生产中,制种环节尤为重要,制种技术中比较重要的两个方面是:

一､无菌操作技术

无菌操作是食用菌制种工作成败的关键｡它包括两方面内容:一是制种过程中使用的全部材料是无菌的;二是必须采用无菌操作方法(也包括培养条件)两者结合起来,才能保证制种的全部过程是无菌的,才能培养出纯菌种｡

1､高温灭菌

(1)火焰灭菌

接种环､接种钩､接种铲､镊子等金属器皿可直接在酒精灯火焰上烧灼灭菌,试管口､瓶口也要通过火焰达到灭菌目的｡方法简单迅速,灭菌彻底｡

(2)常压蒸汽灭菌

将灭菌物品(培养料)放在蒸笼内蒸煮｡从开锅(100℃)开始算起,连续加热开锅4~12h达到彻底灭菌｡个体户或菌种厂自制的灭菌灶,在生产原种､栽培种或栽培菌袋时,均采用此法灭菌｡此法简单､适用､成本低｡

(3)高压蒸汽灭菌

高压蒸汽灭菌是生物灭菌技术中应用最广,灭菌时间短,效果最佳的灭菌技术,原理是根据蒸汽温度随压力增加而提高,压力越大温度越高的原理｡水在封闭的灭菌器中(高压灭菌锅中),通过加热使灭菌器中的水产生水蒸汽,在排除灭菌器内冷空气后,关闭排气阀,蒸汽不能逸出,增加了灭菌器中的压力,水的沸点或蒸汽的温度随之上升,因而获得了比100℃更高的温度,达到有效灭菌的目的｡一般培养基在高压灭菌器中待压力升到1.05kg/cm2(121℃)时灭40min,也可在1.5kg/cm2｡(126℃)灭30min,达到彻底灭菌,如灭固体培养料在1.5kg/cm2灭菌1~2h即可｡高压灭菌器有手提式､立式､卧式等多种型号｡热源有电源､煤､煤气､蒸汽等等｡

2､紫外线杀菌

波长在2600~2800A｡的紫外线有很强的杀菌能力｡电子通过水银蒸汽可产生波长2357A｡的紫外线,以此制成的紫外线灯管,杀菌力强而稳定｡距被照物体20~30cm照射3~5min,即可杀死细菌的营养体,十几分钟可杀死细菌的芽孢｡紫外线灯管在生产实践中应用较广,用于空气消毒,但穿透力不大,只能用于表面消毒｡接种室､接种箱､手术室､药厂等均可安装｡接种箱安15w,接种室可视大小安30w或100w,照射30min即可达到灭菌目的｡紫外线对眼黏膜､视神经､皮肤等均有杀伤力,故不能在开着的紫外线灯下工作,必要时需穿防护衣帽,并戴上有色眼镜工作｡

3､化学药物杀菌

(1)甲醛(福尔马林):40%甲醛溶液用于接种箱､接种室､培养室熏蒸消毒,用量6~8ml/m3,加热时挥发产生气体对空气杀菌｡有两种方法:①直接加热熏蒸:关闭门窗,按空间大小称其用量,倒入铁或铝盒中,放在酒精灯上或电炉上加热,挥发出甲醛气体密闭24h;②氧化熏蒸:高锰酸钾与甲醛混合熏蒸,因为高锰酸钾是一种氧化剂,与甲醛混合时发生氧化还原反应,使甲醛挥发为气体,甲醛与高锰酸钾比例为2∶1,将甲醛倒入瓷碗中,再按2∶1比例加入高锰酸钾,混合后立即产生气体｡甲醛熏蒸应在使用前24h进行｡

甲醛蒸气对眼黏膜､呼吸道有强烈的刺激作用,且有毒,熏蒸后短时间不能入室工作,待甲醛蒸气散消后才能入室工作｡

(2)硫磺:常用在接种室､培养室熏蒸｡用量15g/m3,关闭门窗,点燃熏蒸,密闭12h｡

(3)高锰酸钾:0.1%的高锰酸钾,用于工具､器皿和手的消毒｡

(4)来苏儿(煤酚皂液):3%的来苏儿,用于器皿或室内喷雾消毒｡

(5)石碳酸:3~5%的石碳酸,用于器皿消毒或室内喷雾消毒｡

(6)新洁尔灭:0.1~0.25%的新洁尔灭,用于器皿消毒或室内喷雾消毒｡

(7)75%酒精:接种时用于擦手或瓶口等｡

(8)石灰:石灰分生石灰和熟石灰两种｡熟石灰配成l%~3%石灰水,用于地面､墙壁消毒;生石灰用于地面､墙壁消毒｡畦底可撒石灰粉消毒,菌床､菌砖等局部发现杂菌可撒石灰粉消毒｡

(9)多菌灵或托布津:生料栽培时用0.1%~0.2%多菌灵或托布津拌入料中防止杂菌污染｡

(10)苯菌特:是一种高效低毒广谱的内吸杀菌剂,用法同多菌灵｡

以上消毒药品可根据情况选用,为避免杂菌产生抗药性,可轮换使用,以提高杀菌效果｡

二､无菌操作

为避免杂菌污染,菌种韵移接､分离､接种工作要求在一个相对无菌环境下,通过无菌操作进行｡小规模的可在无菌箱内进行,工作量稍大的,可在超净工作台上或无菌室内进行｡

1､无菌室(接种室)的设计与要求

无菌室应分里外两间｡里间为接种室,面积5~6m2;外间为缓冲间,面积为2~3m2,两间高度均为2~2.5m,过大不易保持无菌状态｡房间的地板､墙壁､天棚要平整光滑,便于擦洗消毒;门设拉门,门窗能关严密闭｡接种室､缓冲间均应安装紫外线灯｡接种室应备有酒精灯､火柴､接种钩､接种铲､剪刀､镊子､75%酒精棉球等等;缓冲间应备有工作服,托鞋､帽子､口罩､消毒药品､喷雾器等等｡

2､接种箱的设计与要求

接种箱是木柜镶玻璃结构,大小不一,一般为100cm×70cm×50cm｡要求严密,操作口要安装套袖,箱上方装15w紫外光灯,两侧设有能开关并且严密的门,以便取放接种物品｡

接种室､接种箱要保持清洁,使用前进行消毒｡

消毒方法:

(1)熏蒸:用甲醛,硫磺或甲醛与高锰酸钾混合进行熏蒸,按空间大小称其用量,关闭门窗密闭24h,熏蒸完毕,打开门,待甲醛气体扩散后,再入室工作｡

(2)喷撒:用3%来苏儿或5%石碳酸向地面喷撒,向空气喷雾以及擦洗桌面进行消毒｡

(3)超净工作台:超净工作台是利用多层滤板过滤空气,使操作台上的空气得以净化,是接种的良好设备｡操作台安有15w紫外线灯,接种前照射30min,关灯后工作｡