ＨＰＬＣ法测定食消饮颗粒中橙皮苷的含量

袁绍莉　张金炼

摘要：目的：建立以高效液相色谱法测定食消饮颗粒中橙皮苷含量的方法。方法：色谱柱：Hedra ODS-2(Size:250mm×4.6mm，Media:10nm 5um),流动相：乙腈-水-36%的冰乙酸溶液（19：81：0.8），流速1.0ml/min，检测波长为283nm 。结果:橙皮苷在2.0～25.0μg/ml之间，浓度与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9998），平均回收率达98.87%。结论：所建方法可行，专属性、重复性好，可用于食消饮的质量控制。

关键词：食消饮颗粒；含量测定；橙皮苷；高效液相色谱法

食消饮颗粒处方来源于徐州地区民间验方。由山楂、麦芽、六神曲、陈皮、瓜蒌、莱菔子 、香橼 、槟榔 、紫苏叶、薄荷油等组成，属治疗伤食类非处方药，具有消食导滞，除积消胀，调理肠胃。用于脘腹胀满，积食不化，嗳腐纳差。质量稳定、疗效确切，在病患中较有影响，深受欢迎。本品原标准[3]较单一、片面，为全面客观地控制产品质量，我们开展了食消饮颗粒的质量控制研究。

原标准简单，没有含量测定项，为了建立系统全面的控制指标，对本品中陈皮和香橼共同的有效成分-橙皮苷的含量进行测定，经过方法学研究，建立橙皮苷HPLC含量测定方法。方法简便，可靠，准确，可以用于食消饮的质量控制。

1仪器与试药

高效液相色谱仪：Waters510,检测器：Waters2487。

2F-I 型三用紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）；电子天平型号：FA2004N（上海精密科学仪器有限公司）；超声仪 型号：HB3120U（汉邦科技）；101-1A 型电热恒温鼓风干燥箱 HJ0107型托盘天平（河南商城一中仪器厂）；橙皮苷对照品，购买自中国药品生物制品检定所，批号：110721-200613；甲醇、乙腈为色谱纯，36%冰乙酸及其它试剂为分析纯，水为重蒸馏水；食消饮颗粒：由江苏颐海药业有限公司自制，批号为：080401、080402、080403、080404、080405、080406。

2方法与结果

2.1含量指标的确定[６、７]

本品由山楂、陈皮、香橼、麦芽等十味药组成，其主要功效有消食导滞、除积消胀、调理肠胃。陈皮和香橼在方中起到理气健脾、燥湿化痰，舒肝宽中的功效， 是主要的药效成分之一。橙皮苷类成分是陈皮和香橼的共有指标性成分。所以选择橙皮苷作为指标成分，同步测定陈皮、香橼两味药材的含量。

2.2计算含量测定方法

橙皮苷含量测定采用高效液相色谱法，紫外检测器检测。试验分析表明：橙皮苷对照品峰面积与浓度呈良好线性关系，相关系数高于0.999，符合色谱法含量测定的限度要求。因此采用外标法计算橙皮苷的含量。

2.3色谱条件及系统适用性试验

参考相关文献资料[8]和中国药典2005版（一）部陈皮药材项下橙皮苷含量测定方法：

2.3.1使用C18-ODS反向柱，填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶。

2.3.2检测波长

取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含 0.1mg的对照品溶液，在波长200-400nm范围内扫描，橙皮苷在283nm波长处有最大吸收。所以选择检测波长为283nm。

2.3.3流动相的选择

（1）甲醇-水（40：60），样品未完全分离，且拖尾现象严重。

（2）甲醇-冰乙酸-水（37：0.5：63），样品未完全分离且拖尾现象严重。

（3）乙腈-水（16：84），对照拖尾现象严重，但样品已经基本分离。

（4）乙腈-水-36%的冰乙酸溶液（19：81：0.8），峰分离符合规定，无拖尾，保留时间适中，理论板数达2500以上，符合定量要求。

以上结果表明，流动相（4）可作为本试验流动相。

2.3.4流速的确定

流速在0.8-1.2ml/min，橙皮苷与杂质成分分离较好，峰形符合规定，柱效达到2500以上，符合定量要求。

2.4对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.010mg的溶液，即得。

2.5供试品溶液的制备

取本品约4g，精密称定，置碘量瓶中，加甲醇50ml，精密称定重量，冷浸1小时，超声处理25分钟，放冷，用甲醇补足减轻的重量，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.6空白试验

分别精密吸取阴性对照溶液、样品溶液、橙皮苷对照品溶液各20μl，注入高效液相色谱仪，进样测定。在同样的色谱参数条件下对比观察，则在供试品色谱中，在与对照品色谱相应的保留时间处，有相同的色谱峰，而在阴性对照色谱中无相应的色谱峰。可以判定本品在此波长处进行含量测定，不受其它杂质成分干扰。色谱图见图1（A、B、C）：

2.7标准曲线与线性范围[2]

精密称定橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含25μg的溶液，分别精密吸取0.4ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml置于5ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，超声溶解，分别注入色谱仪，按上述色谱条件分别测定，测得峰面积。结果见表1

对照品浓度与峰面积做线性回归，得线性方程为：

Y=36580X-1042.5 r=0.9998

表明橙皮苷浓度在2.0～25.0μg/ml之间，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.8 稳定性试验

取本品（080401）适量，按供试品溶液制备方法制得供试品溶液，精密吸取供试品溶液20μl注入液相色谱仪。间隔一定时间测定一次，记录色谱图。结果表明,供试品溶液在24小时内是稳定的.

2.9精密度试验

精密称定橙皮苷对照品适量，加甲醇制成每1ml约含10μg的溶液，精密吸取20μl。依法进样测定，重复测定6次，测得峰面积。结果表明，在连续6次进样，测得峰面积RSD值符合不大于2%的规定，表明系统精密度良好，利用此系统测定，结果稳定，可靠。

2.10重复性试验

精密称取同批号样品（080401）共6份，分别按供试品溶液制备方法制备成供试液。按上述色谱条件进样测定，根据测得的峰面积计算每一份样品的含量，并计算平均含量、相对标准偏差。结果表明：测得的6份供试品含量，其平均含量为0.115 mg/g，RSD值达到0.53%，重现较好，方法可靠。

2.11加样回收率试验

取含量已知的同批样品（080401）6份，精密称定，分别精密加入橙皮苷对照品溶液（浓度为0.2796mg/ml）2ml，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进样测定，计算回收率。以下式计算橙皮苷含量：

本次试验的平均回收率达98.87%，RSD值达到1.19%，符合定量标准的要求，可用于橙皮苷定量。

2.12含量测定[4、5]

依上述建立的含量测定方法，测定了六个批次食消饮颗粒含量，结果见表3

根据六批样品含量测定，最低含量2.03mg/袋，最高为2.41mg/袋，由于原药材的质量、制备工艺、生产条件和设备等因素相对固定，各批样品含量相差不大，比较稳定。所以确定本品含陈皮、香橼以橙皮苷计为不低于2.00mg/袋。

4讨论

4.1方法学考察结果表明：HPLC-UV法测定橙皮苷含量重现性好,RSD值为0.53%；加样回收试验回收率达99.87%，RSD值为1.19%。方法准确，稳定可靠。可作为橙皮苷的定量方法。

4.2通过六个批次食消饮颗粒橙皮苷的含量测定，得到足够数据表明各批样品橙皮苷含量均处于2.00mg/袋以上，且各批样品含量均比较接近这一数据，据此确定本品含陈皮和香橼以橙皮苷计不少于2.00mg/袋。

4.3中药制剂中采用超声振荡提取方法。由于中药制剂组分复杂，分析时应在分析柱前加预柱。流动相含有酸性成分，故分析完毕后一般用醇水先洗，再用甲醇将色谱柱冲洗干净。

4.4所测定的成分橙皮苷为二氢黄铜类化合物，具有一定的酸性，故在用C18柱进行分离时，流动相中加入适量的冰醋酸以改善峰的形状，抑制拖尾，并控制流动相的流速。通过不断的实验确定了以上的实验，该色谱条件下能够使橙皮苷的色谱峰达基线分离。

参考文献：

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版一部[S].北京化学工业出版社,2005.

[2]于立芬.数理统计方法[M].上海：上海科技出版社，1984:170.

[3]卫生部药品标准中药成方制剂.

[4]李希，谢守德，袁海英等.陈皮浓缩颗粒的鉴别和橙皮苷含量测定[J].四川中医，2001(06).

[5]王怡君,辛向群,宋长义. 槟榔七味丸质量标准研究[J]辽宁中医杂志 ,2004(08).

[6]张莉.高效液相色谱法测定三蛇胆陈皮末中橙皮苷的含量[J]广东药学院学报,2002(04).

[7]唐志杰，刘丛盛，林小燕，韩希婉，郭育辉，洪玲.高效液相色谱法测定陈皮中橙皮甙的含量[J]中成药,1994(03).

[8]李秀玲,李龙,肖红斌,梁鑫淼.反相高效液相色谱法测定枳实、枳壳中橙皮甙和柚皮甙的含量[J]色谱,2002(06).

[9]刘若英主编.药物分析,2005.