乙肝两对半酶联免疫法与金标法的应用及注意事项

牛平英

[摘要]目的：探讨酶联免疫法和金标免疫法在检测乙肝五项中的应用。方法：用金标快速板法与EUSA法的结果比较。结果：200例大三阳结果两法比较完全一致；150例小三阳中，金标法HBsAg有10例未检出，50例携带者有6例未检出，符合率96％。结论：酶联免疫法时间长，步骤多，特异性强、灵敏度高，重复性好，适合批量检测。金标法快速简便，单份测定，可立等结果等优点，无需任何仪器设备，试剂稳定因此适合于急诊检测。

[关键词]乙肝两对半；金标快速检测板：酶联免疫法

[中图分类号]R450

[文献标识码]B

[文章编号]1674-1721(2009)03(a)-049-01

随着人们生活水平日益提高，健康意识不断增强，两对半检测已成为人们的日常体检、献血员体检、手术及急诊输血前后的常规检查项目，以达到对乙肝早诊断、早预防、早治疗。现在把金标法与酶联免疫法做一比较：

1材料与方法

1.1样本来源

标本来自2007～2008年8月我院门诊、住院患者及健康体检者。收集ELISA法检测结果全部阴性者200例；HBsAg、HBeAg、HBeAb(大三阳)阳性者200例；HBsAg、HBeAb、HB—cab(小三阳)阳性者150例；HBsAg、抗-HBc阳性者50例携带者。大三阳与小三阳与携带者患者中，男220例，女180-例，年龄6—69岁，静脉采血，肝素抗凝或干燥管分离血浆／血清，放于-20℃冰箱内备用。

1.2试剂

金标快速检测板采用艾康生物技术(杭州)有限公司产品.批号为：00706024。

ELISA试剂购于上海科华生物技术有限公司，批号：200705117，按说明书保存试剂盒，操作时从冷藏箱取出，放置于37℃恒温30min，使试剂温度恢复至37℃后方可使用，试剂从冰箱取出恢复到反应温度需要时间。在平衡试剂的同时。待测标本需置室温平衡30min后再进行测试，如果取出后测定，试剂温度、时间达不到要求，抗原抗体反应不完全而可能出现假阴性。

1.3仪器

DG5033A型酶联免疫检测仪。

1.4方法

金标快速检测板采用快速免疫层析法，其中HBsAg、HBeAg采用双抗体夹心法，HBsAb采用双抗原夹心法，HBeAb、HBeab采用竞争抑制法，按说明书要求操作并判断结果。

ELISA法采用DG5033A型酶联免疫检测，以S／CO值判定结果：①标本要分离好否则纤维蛋白吸附于孔壁，难以洗脱，加入底物显色出现假阳性；标本不要溶血，溶血是由于各种原因引起红细胞破坏，细胞内血红蛋白进入血液，血红蛋白具有类似于过氧化物酶的活性，其作用与辣根过氧化物酶相似。如果反应孔非特异性吸附血红蛋白而残留，可催化底物显色，造成假阳性；相邻标本出现阳性污染出现假阳性。②加样：加样器要垂直不可倾斜，否则人为加大量，加样时间不可过长，以免造成加样后放入恒温箱等待时间过长；使用试剂前应摇匀，并弃去1-2滴后垂直加入；不同批号的试剂不可混用；防止加酶时酶试剂溅出孔外，导致非特异结合物吸附于反应孔周围，难以清洗。③温育：要加封片或加盏，封片不能重复使用，温育时间准确，人为延长时间，导致非特异性结合吸附于反应空孔周围。④洗板，洗板机洗板选择洗涤5次程序洗板后拍干，注意，洗板针不要堵塞，抽吸要完全，洗液量足。⑤结果：用酶标仪读数，取波长450nm，先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。结果判断须在反应终止后10min内完成。

2结果

2.1两种检测法全阴性者比较

ELISA法检测结果全阴者200例与金标法检测结果一致。

2.2 400例大三阳、小三阳与携带者患者两种方法检测结果

200例大三阳结果相同，150例小三阳中，金标快速检测板有10例未能检出HBsAb，50例携带者6例未检出.符合率96％，金标快速板FIBsAb的灵敏度和特异性稍差，酶联免疫法测定具有特一性强。灵敏度高，重复性好，但金标法时间短，快速简单，适合急诊手术病人的检测。

3讨论

本文实验结果表明：金标快速检测板有敏感性和特异性较高，但从实验结果可以看出，金标快速检测板的灵敏度稍低于ELISA法，血清中FibsAg含量大于5ng/ml时.才能检出。特别对小三阳和乙肝携带者有漏诊的可能。而且金标快速检测板成本高于ELISA法。但时间短，快速简便。可以单份测定可立等结果等特点，无需任何仪器设备，试剂稳定，适合急诊检测。多用于急诊手术，献血员体检筛选。而酶联免疫ELISA法具有特异性强，灵敏度高，检测灵敏度0.5ng／ml，重复性好，可以批量检测，但操作步骤繁琐，对标本、试剂要求比较严格，有许多影响因素，因此，实验室应根据需要并结合工作情况选用。