高效液相色谱法在药品“打假”中的应用

2009-04-23凌志甫陈博庞裕玉梁富耀雷雪飞

中国医药导报 2009年7期

凌志甫　陈　博　庞裕玉　梁富耀　雷雪飞

[摘要] 目的：探讨高效液相色谱法（HPLC）在药品“打假”检验工作中的应用。方法：归纳HPLC在几类经常出现的违禁添加药物中的检测实例，并将HPLC与其他检测方法进行比较。结果：HPLC具有同时分离、分析的功能以及快速、高效、准确、灵敏等优点，现已成为药品分离、鉴定和含量测定的首选方法之一。结论：HPLC在药品“打假”的检验工作中发挥着越来越重要的作用。

[关键词] 高效液相色谱法；检验；假药；应用

[中图分类号]R194 [文献标识码] B[文章编号] 1673-7210（2009）03（a）-131-02

假药是困扰全球药物发展的重要问题，已受到各国政府的重视，据估计，全球药品贸易中，大约有6%的药品为假冒产品。对假药的治理与打击，很大程度上依赖于分析检测方法的效能。高效液相色谱法（HPLC）是一种具有同时分离、分析功能和快速、高效、灵敏等优点的检测技术，现已成为分离、鉴定和含量测定的首选方法，其在对假药的日常检验工作中，正发挥着越来越重要的作用，为打击药品造假和保障人民用药安全、有效，提供了有力的技术支持。

1 HPLC在“打假”中的应用

1.1 对违禁添加壮阳类药物的检测

枸橼酸西地那非（俗称伟哥）对治疗阳痿有特殊疗效，因其有使用方便、见效快、效果明显等优点，已成为目前最畅销的治疗男性勃起功能障碍的药物。该药为处方药，医院售价较昂贵，而枸橼酸西地那非原料却很便宜，非法掺加可获得高额利润。张启明等[1]运用HPLC-DAD、HPLC-MS技术检测了中药中非法掺加枸橼酸西地那非的情况，发现22个厂家10余种剂型的65批产品中有13批非法掺加了枸橼酸西地那非。

他达拉非的疗效优于西地那非，而其毒副作用会对心肌梗死、心律失常等心脏疾病患者造成很大的危害，故随意服用后果严重。而添加他达拉非具有一定的隐蔽性，因此需要建立一种快速、灵敏、专属性强的检测方法对其进行鉴定。颜杰等[2]通过研究证实，HPLC-MS技术简便、快速、专属性好，可用于不同药品中他达拉非的检测，从而为药监部门对其进行的认定、查处工作提供了参考依据。

伐地那非是继西地那非、他达拉非之后第3个用于治疗男性性功能障碍（非器质性）的药品，其药效较西地那非和他达拉非有所改良，但若过量服用则会引起头痛、消化不良、颜色分辨能力下降等不良反应[3]；对于心血管患者，还有可能导致突然死亡。陈稚等[4]建立的HPLC-MS技术流动相简单、分析时间短且试剂预处理简单、灵敏度高，借助MS的定性能力，大大提高了该方法的可靠性和抗干扰能力，能准确快速地测定保健食品中的伐地那非。

1.2 对违禁添加减肥类药物的检测

盐酸西布曲明是目前国际、国内广泛采用的一种新型减肥西药，但过量服用会导致消化系统、心血管系统、神经系统等的严重不良反应[5]，因此必须在医生的指导下使用。个别不法厂家在减肥中成药、保健品中私自掺加盐酸西布曲明，这种行为对人们的健康危害极大。张小松等[6]采用HPLC-MS技术建立了盐酸西布曲明的检测方法，通过对市面上15种减肥保健品进行检测，发现其中有13种含有违禁的盐酸西布曲明；该方法专属性强、灵敏度高、操作简便，可用于中药保健品中盐酸西布曲明的监督检查。

芬氟拉明、安非拉酮可以通过抑制食欲达到减肥的目的，但同时也存在致幻或损伤心脏等许多副作用，对人体健康危害很大。美国及欧洲等许多国家已将其淘汰出药品、食品市场，我国卫生部也已明令禁止其在食品中的使用。然而，近年来仍有一些因食用含这些药物的减肥食品而致死的事件发生，因此亟需一种准确、灵敏的分析方法来对其进行监测。孙丽艳等[7]建立了同时检测西布曲明、安非拉酮和芬氟拉明这3种成分的HPLC技术，证明该方法定性、定量准确，实际应用性强，并应用此方法对12种市售减肥食品进行检测，发现其中6种含有盐酸西布曲明，提示目前减肥食品具有严重的安全隐患。

1.3 对违禁添加降糖类药物的检测

苯乙双胍、二甲双胍、格列本脲、格列齐特、格列甲嗪、格列美脲、甲苯磺丁脲是常用的降糖药物，由于这些药物原料的成本相对较低，且见效快，一些不法分子经常在降糖类保健品和中药制剂中擅自加入这些成分，患者在不知情的情况下长期服用这些药品，可能会导致患者体内胰岛素代谢紊乱，严重的甚至会导致肾功能衰竭等多种疾病的发生。而若采用HPLC对其逐一鉴定，则费时耗材，曾茂法等[8]经过多次试验，摸索出了用两种不同色谱条件的HPLC-DAD技术，同时分离鉴定格列本脲、苯乙双胍、二甲双胍、甲苯磺丁脲的方法，且该法快速、简便、可靠。蔡增轩等[9]通过对格列齐特、格列甲嗪、格列美脲、格列本脲、苯乙双胍的同时检测，也证实了HPLC-DAD处理样品简便、结果准确可靠、重复性好、灵敏度高的特点。

1.4 对违禁添加其他药物的检测

1.4.1 麻黄碱的检测麻黄碱是一种治疗支气管哮喘的药物，近年来市场上不断出现在哮喘保健品和重要保健品中非法掺入盐酸麻黄碱的情况，这些行为严重危害了人民群众的身体健康。江生[10]采用HPLC-MS对市场上一些哮喘保健品进行了检测，实验结果证明，该法能快速、准确地分析出保健品中是否掺有盐酸麻黄碱，可作为此类商品“打假”的检测方法。

1.4.2 双氯芬酸钠的检测冯了性风湿跌打酒以其疗效好、价廉物美的优点，一直深受广大患者的喜爱。近年来，有一些不法厂家擅自在药酒中添加双氯芬酸钠，以增强其抗炎止痛的效果，而此举既会造成胃肠道出血、肝功能损伤、皮疹过敏等不良反应的发生，又违反了《药品管理法》的有关规定。宋辉等[11]通过实验，建立了HPLC定量测定双氯芬酸钠的方法，且该法准确、简便、可操作性强，为该类假药的查处提供了技术支持。

1.4.3 吲哚美辛的检测天麻胶囊是用于治疗风湿性疾病的中药成分制剂，属于非处方药，而目前市场上，一些天麻胶囊却添加了非甾体类抗感染药——吲哚美辛。吲哚美辛有较强的解热、消炎、抗风湿作用，但其毒副作用也较严重，不良反应发生率为35%～50%。周艳等[12]采用HPLC-DAD技术，建立了吲哚美辛的检测方法，并对7个厂家的11批产品进行了检查，共查出2批产品含有吲哚美辛。此法可供相关部门开展工作时使用。

2 HPLC与其他检测方法在应用中的比较

2.1 与紫外分光光度法的比较

如醋酸泼尼松片[13]，用紫外分光光度法（UV）检验含量合格，而用HPLC法测定含量仅为30%～40%，为不合格。醋酸地塞米松片[13]也有类似情况，用UV法测定其含量合格，而用HPLC法测定含量却很低，最低的甚至只有26%～31%。有文献[14]报道，按《中国药典》的UV法测定含量为96.9%的维生素B1片，用HPLC法测定时，其含量仅为20.7%。

2.2 与重铬酸钾滴定法的比较

盐酸小檗碱用0.016 67 mol/L重铬酸钾滴定液滴定测得结果为99.8%，而用HPLC检测时其含量仅为60.7%。经分析发现，0.016 67 mol/L的重铬酸钾滴定液可以与碱性物质发生反应，而盐酸小檗碱为生物碱类提取物，其提取过程中很有可能引入其他的生物碱类物质；而HPLC法可以把盐酸小檗碱和其他生物碱类物质分离开来，因而含量测定结果更准确、精密。因此，《中国药典》2005年版中盐酸小檗碱片和盐酸小檗碱胶囊的含量测定方法已改为高效液相色谱法[15]。

2.3 与碘滴定法的比较

《中国药典》2000年版中，安乃近片的含量测定方法是用0.1 mol/L碘滴定液滴定法进行的，湖南省药检所在检验过程中发现有的企业生产的该药品，用滴定法测得含量为96%，甚至更高，但用HPLC测定其含量却为不合格。为此，湖南省药检所向国家药品监督管理局汇报，国家药品监督管理局为此特颁发了药品检验补充方法和检验项目批准件2005019[16]。

3 HPLC法的应用前景

HPLC法不是万能的，其还有需要不断完善的地方，但HPLC法具有同时分离、分析的功能和快速、高效、灵敏的优点，及不受样品的沸点、热稳定性和分子量等的限制，无论是合成药物还是微生物发酵产生的药物或天然物，无论是原料药还是制剂或生物样品中的药物，都能适用。因此HPLC法已成为分离、鉴定和含量测定的首选方法，在鉴别假药的检验工作中更是独当一面，为打击药品造假和保障人民用药安全、有效提供了有力的技术支持。HPLC法正发挥着其越来越重要的作用。随着科技的发展，如HPLC-MS/MS等仪器会越来越先进、精密，相信在不久的未来，其在药品监测中的应用会更加广泛。

[参考文献]

[1]张启明,尹华,黄海伟,等.检查中药中非法掺入枸橼酸西地那非的方法研究[J].药物分析杂志,2002,22(4):315-317.

[2]颜杰,程振田,马彬,等.中药保健品中他达拉非的检测[J].天津药学,2006,18(4):9.

[3]McCulley TJ,Luu JK, Marmor MF, et al.Effects of sildenafil citrate (Viagra) on choroidal congestion[J].Ophthalmologica,2002,216:455-458.

[4]陈稚,肖松,陈波,等.高效液相色谱/质谱联用测定保健食品中的伐地那非[J].中国食品卫生杂志,2005,17(6):508-511.

[5]裴振峨,蔡晧东.西布曲明的不良反应及其防治[J].药物不良反应杂志2006,8(4):276.

[6]张小松,夏铮铮,周琳,等.检测中药保健品中非法掺入的盐酸西布曲明[J].华西药学杂志,2005,20(4):293-295.

[7]孙丽艳,李东光,张华,等.减肥食品中3种化学合成药物的同时检测[J].中国公共卫生,2006,22(4):462.

[8]曾茂法,张学斌.高效液相色谱法同时鉴定保健品中非法添加的四种降糖药成分[J].中国现代应用药学杂志,2006,23(6):506.

[9]蔡增轩,李刚,任一平.高效液相色谱法检测保健食品中的违禁药物[J].中国食品卫生杂志,2007,19(1):36-40.

[10]江生.非法掺入哮喘保健品中的盐酸麻黄碱鉴别[J].中国药业,2006,15 (15):41.

[11]宋辉,陈为飞.冯了性风湿跌打药酒假药中双氯芬酸钠定性、定量分析[J].中国现代应用药学杂志,2002,19(5):405-406.