一起猪流感的诊治

姚 静 范 锋 周庆新 毛爱民

摘要针对无锡市惠山区某规模化养猪场猪群发病的临床症状、发病情况、病理变化,初步诊断为猪流感,并对其进行了防治。在此基础上,就其传播途径、诊断方法以及防治措施等展开讨论。

关键词猪流感;症状;病理变化;诊断;防治

中图分类号S851.3文献标识码B文章编号 1007-5739(2009)09-0256-01

猪流感(swine Influenza,SI)是由猪流感病毒(SIV)引起的一种猪的急性、高度接触性呼吸道传染病。SIV引起的临床症状与人流感相似,病猪表现为高热(40.5～41.7℃)、精神沉郁、食欲不振、呼吸困难、咳嗽等,典型的发病还可见打喷嚏、流鼻涕等症状,并迅速蔓延整个猪群。单纯的猪流感病毒感染表现为发病率高(100%),死亡率低(约5%),其严重程度与流行毒株、猪只日龄和健康状况、环境条件及细菌性继发感染相关。如不及时确诊、治疗,经常会伴有猪副嗜血杆菌、巴氏杆菌等细菌性继发感染,使病情加重。猪流感病毒主要存在于病猪和带毒猪的呼吸道分泌物中,经排出后污染环境并交叉循环感染,苍蝇、老鼠以及唾液、空气流通等都能造成本病的传播。本病常发生于晚秋、早春及寒冷的冬季,但在近年来,由于集约化的猪场增多,在火热的夏季,气候骤变、密度过大、通风不良、阴雨连天等都会造成猪流行性感冒的暴发流行。如不及时治疗,能使病情变复杂,继发巴氏杆菌、嗜血杆菌、肺炎性链球菌等,使死亡率增高,如果不及时控制,由此引发的经济损失会更为惨重。

1发病情况

无锡市惠山区某规模化养殖场,存栏基础母猪1 383头,育肥猪2 447头,育成猪和哺乳仔猪3 630头。10月份天气突变,气温骤降,连续阴雨,昼夜温差加大。首先是育成猪发病,主要表现为体温上升、食欲明显下降或废绝,呼吸道感染症状明显,随后哺乳仔猪、育肥猪相继发病,死亡率以哺乳仔猪最高,其次是育成猪,而育肥猪和母猪没有死亡,仅少数怀孕母猪发生流产、早产、弱仔和死胎。

2临床症状

最初发病的是育肥猪,潜伏期很短,2d内集中全群发病,测试体温40.5～41.5℃,个别猪高达42℃以上,表现为食欲废绝,精神萎靡,成群地卧地一角,不愿走动,流清鼻液或稠鼻液,有时鼻液带有血色,眼分泌物增多,眼结膜潮红,咳嗽,呼吸加快,个别病例转为慢性病例,常因持续咳嗽、消化不良和进行性消瘦而死亡。部分妊娠母猪表现为流产、早产、产死胎和产出弱仔数增多。大部分患病猪只的症状4～5d后消失,7～10d内自然康复,但哺乳仔猪出现约1%的死亡率。

3剖检病理变化

未发病猪未见明显病理变化,病死猪病理变化为:呼吸道可见鼻、咽、喉、气管、支气管黏膜充血、肿胀;表面覆盖大量黄白色粘稠的液体。肺部心叶、尖叶、隔叶下缘变、变韧,气肿与塌陷。心内外膜出血,且稍有肿大。肝脏肿大,边缘钝圆,有充血现象;肝脏表面散状分布针尖大小的白色结节。肾脏轻微肿大,颜色褐黄,质地较软,切面隆起,边缘外翻;部分病例有点状出血。脾脏淤血、肿大,局部有梗死灶。大肠有斑块状出血。胃大弯处充血严重。淋巴结肿大。

4诊断

4.1初步诊断

根据发病情况、临床症状、病理变化以及天气骤变时突然发病,迅速波及全群;病猪高热、鼻液增多、咳嗽和呼吸困难等发病特点,初步诊断为猪流感。

4.2RT-PCR诊断

4.2.1样品采集。病死或扑杀猪,取肺、扁桃体和脑等组织备用;待检活猪,用注射器取全血5mL,血凝后取血清备用;要求送检病料新鲜,严禁反复冻融病料。

4.2.2引物设计。鉴别H1和H3亚型的2套引物序列为:HF1:5′-GGGACATGTTACCCAGGAGAT-3′,HR1:5′-G CATTGTATGTCCAAATATCCA-3′,HF3:5′-TATGCCT G GTTTTCGCTCAA-3′,HR3:5′-TTCGGGATTACAGTT T GTTG-3′。第1套引物扩增片段长度为1 006bp,为H1亚型特异性;第2套引物扩增片段长度为663bp,为H3亚型特异性。

4.2.3病毒RNA的提取及逆转录。0.5g组织病料或100μL血清和1mL Trizol加于1.5mL离心管,轻微振荡数次,室温放置5min;加200μL氯仿,振荡混匀,4℃下12 000rpm离心10min,取上清加入500μL异丙醇,室温放置10min后12 000 rpm,离心15min,弃上清,用DEPC水配置的700μL乙醇洗涤沉淀2次,弃去乙醇,沉淀置于37℃温箱烘干。干燥后加3μL DEPC水。提取的病毒RNA作为RT-PCR模板用于反转录试验或置-20℃保存备用。逆转录反应按常规方法进行。

4.2.4PCR扩增。反应体系为25μL,取反转录产物2μL,分别加10×PCR buffer 2.5μL,稀释为0.02mmoL/L的上下游引物各1μL、2.5mmoL/L的dNTP 2μL,Taq DNA聚合酶为2.5U,用灭菌超纯水补足至25μL,混匀后按以下程序进行反应,95℃预变性3min,然后94℃变性1min,54℃退火45s,72℃延伸45s,共进行35个循环。

4.2.5鉴别诊断。对猪圆环病毒2型、猪呼吸与繁殖综合征(下转第259页)

(上接第256页)

病毒、猪瘟纯化病毒及空白对照进行同样步骤的RNA提取和RT-PCR扩增,同时以H1、H3、H5和H9亚型猪流感病毒为阳性对照。

4.2.6结果判定。通过RT-PCR方法的扩增结果可见,该病毒为H1亚型流感病毒,利用H3的特异性引物不能扩增获得HA,而通过H1特异的引物进行扩增,则可见1.7kb的阳性条带,从而判定该猪场为H3亚型猪流感病毒感染。

5综合防治

初步诊断为疑似猪流感,马上封锁隔离,严禁妊娠舍、保育舍等饲养员串栋,全场用灭毒王每天进行1次带猪消毒。发病无食欲猪上午用复方SD甲氧嘧啶(SMM)0.2mL/kg体重加柴胡肌注,下午用病毒灵2支肌注,连用3d,同时在饮水中添加小苏打和电解多维质至全群猪康复。大群用特效抗流感药物饮剂1袋对水100 kg,供自由饮用,连用5～7d。

6讨论

SIV在猪群中传播主要通过呼吸道途径。在急性发病期,病猪鼻腔分泌物含有大量病毒,猪只通过直接或间接接触而感染传播,其中人和禽类也能携带病毒进行传播。猪流感危害猪体健康,影响了育肥猪的上市时间,并增加了饲养成本,对养猪业造成的损失不容忽视。此外,猪流感病毒也是猪呼吸道疾病复合征(porcine respiratory disease complex,PRDC)的一种重要原发性病原。猪呼吸性疾病复合征是近年来危害世界(包括我国)猪群的严重疾病,其病原复杂,呈双重或多重病原感染,包括病毒性病原(猪流感病毒、PRRSV、猪圆环病毒Ⅱ型、伪狂犬病毒和猪呼吸道冠状病毒),细菌性病原(巴氏杆菌、猪链球菌、猪副嗜血杆菌)和猪衣原体等。一种观点认为猪流感病毒不仅损伤呼吸系统,还可能引起机体免疫抑制,增加了其他病原的感染几率;反过来,一些细菌性病原(如葡萄链球菌)分泌的蛋白酶能够促进猪流感病毒HA蛋白的裂解,而HA蛋白的裂解对流感病毒的感染至关重要。因此,猪流感和其他病原混合感染并相互作用,就会使病程延长,死亡率增加,对猪体健康的危害也就更加严重。

SI的诊断可分为临床诊断和实验室诊断。实验室诊断包括病毒分离、抗原和病毒核酸检测、特异性抗体检测等。国外报道认为PCR诊断方法的阳性率与病毒分离的阳性率等同或者稍高。本试验中整个试验过程所需时间较短,在6h之内即可完成从提取RNA、反转录、PCR扩增到琼脂糖凝胶电泳等全部试验过程,而传统的病毒分离所需时间较长,一般需要4～12d,猪流感RT-PCR诊断方法的建立为快速诊断各亚型猪流感奠定了基础。

猪流感的防治同样遵循预防为主,防重于治的原则。执行严格的生物安全措施,避免猪与鸡、鸭、火鸡混养,这就最大限度地限制了禽流感病毒跨物种传播给猪;做好猪舍的通风、干燥、保暖和清洁工作;避免从外面引进猪只,若需引进要进行隔离观察;避免猪群移动和混群;实行全进全出制度,限制流感的传播;减少猪群的应激反应;对猪群进行疫苗免疫接种;患病猪进行抗病毒治疗和抗生素治疗,以减少或避免继发感染。

7参考文献

[1] 赵中兴,范锋,周庆新,等.无锡地区猪流感病毒的分离与鉴定[J].畜牧与兽医,2008,40(2):89-91.

[2] TAUBENBERGER J K,LAYNE S P.Diagnosis of influenza virus:Co-ming to grips with the molecular era[J].Mol Diagn,2001,6(4):291-305.