超高效液相色谱法测定消炎止咳胶囊中槲皮素和山柰素的含量

【摘要】目的：建立消炎止咳胶囊中槲皮素和山柰素的UPLC含量测定方法，提高该制剂质量控制标准。方法：采用UPLC含量测定方法。色谱条件：以BEH C18（2.1 mm×150 mm，1.7μm）为分离柱；以乙腈-0.4磷酸溶液（25∶75）为流动相；检测波长：370 nm；柱温：30℃；流速：0.3 mL/min，进样体积：2μL。结果：槲皮素在1.7365～17.3620μm/mL内呈良好的线性关系（R2= 0.9999，n=5）；加样回收率为99.5%，RSD为1.0%。山柰素在2.4516～24.5154μm/mL内呈良好的线性关系（R2=0.9999，n=5）；加样回收率为98.2%，RSD为1.2%。结论：建立了消炎止咳胶囊中槲皮素和山柰素的UPLC测定方法，可有效控制该制剂的质量。

【关键词】消炎止咳胶囊；胡颓子叶；槲皮素；山柰素（酚）；超高效液相色谱

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.002

【基金项目】贵州省2022年度省级药品探索性研究课题。

Determination of Quercetin and Kaempferol in Xiaoyan Zhike Capsules by UPLC

LIU Zhihai， PENG Qili*， WANG Dandan， JIN Zhao

（Guizhou Province Qianxinan Institution for Inspection and Testing Center， Xingyi 562400， China）

Abstract： Objective： To develop a UPLC method for simultaneous determination of quercetin and kaempferol in Xiaoyan Zhike Capsules and enhancing the quality control standard of the preparation. Methods： The UPLC content determination method is employed. Chromatographic conditions： BEH C18 （2.1 mm×150 mm， 1.7μm） column is used for separation； acetonitrile -0.4 phosphoric acid solution（25∶25） served as the mobile phase； the detection wavelength is 370 nm； the column temperature is 30℃； the flow rate is 0.3 mL/min， and the injection volume is 2μL. Results： The linear ranges of quercetin is 1.7365～17.3620μg/mL （R2=0.9999， n=5） ； the recoveries are 99.5% with an RSD of 1.0%. The linear ranges of kaempferol is 2.4516～24.5154μg/mL （R2=0.9999， n=5） ； the spiked recoveries are 98.2% and the RSD is 1.2%. Conclusion：AUPLC method for determining quercetin and kaempferol in Xiaoyan Zhike capsules is established， effectively contributing to the quality control of this preparation.

Keywords： Xiaoyan Zhike capsules； folium elaeagni； quercetin； kaempferol； UPLC

消炎止咳胶囊为贵州省黔西南州特色苗族医药制剂，其处方由胡颓子叶、麻黄、桔梗、黄荆子、太子参、南沙参、百部、穿心莲、罂粟壳组成。功能主治：消炎，镇咳，化痰，定喘。对该药品进行探索性研究发现，该制剂质量标准较为单一，仅对处方中的穿心莲[1]进行了含量测定控制。该制剂的君药为贵州民族药胡颓子叶[2]。胡颓子叶具有止咳平喘，消肿止血的功能，对整个制剂的疗效起着至关重要的作用。查询文献资料可知，胡颓子叶指标性成分为黄酮类[3-5]，其中以槲皮素、山柰素为代表。为有效地控制该制剂的质量，笔者通过超高效液相色谱（UPLC）测定消炎止咳胶囊中槲皮素和山柰素的含量。

1材料

1.1实验仪器

Waters ACQuity型高效液相色谱仪，Empower色谱数据工作站（沃特世公司）；AUW220D电子天平（日本岛津公司，十万分之一）；AUY220电子天平（日本岛津公司，万分之一）；电热恒温水浴锅（天津市泰斯特仪器有限公司）。

1.2实验药品

槲皮素对照品（中国食品药品检定研究院10081-201610）、山柰素（酚）（中国食品药品检定研究院110861-201812）、消炎止咳胶囊（批号：20211206、20210501、20211107、20220102、20220103、20220106、20220107、20220202、20220203、20220205）均由贵州省德良方药业有限公司生产并提供；乙腈为色谱纯（德国默克），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（柱长为150 mm，内径为2.1 mm，粒径为1.7μm）；乙腈-0.4磷酸溶液（25∶75）为流动相；检测波长为370 nm，体积流量为0.3 mL/min；柱温为30℃，进样体积为2μL。

2.2对照品溶液的制备

取槲皮素对照品、山柰素对照品适量，精密称定，加乙醇溶解稀释制成混合溶液。在该混合溶液中，槲皮素的质量浓度为5μg/mL，山柰素的质量浓度为10μg/mL。

2.3供试品溶液的制备

取供试品的内容物1 g，精密称定，精密加入5%盐酸乙醇溶液25 mL，称定重量，加热回流1.5 h，取出，放冷，再称定重量，用5%盐酸乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4专属性实验

分别取对照品溶液和供试品溶液各2μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件测定。如图1所示，供试品溶液色谱图中均有槲皮素和山柰素的吸收峰。

2.5线性关系考察

取槲皮素对照品（中检院10081-201610）适量，精密称定，置于容量瓶中，加乙醇溶液制成质量浓度为1.7365、3.4725、8.6812、13.0217、17.3620μg/mL的对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。线性回归方程为y=18754x-7595.7，R2=0.9999。取山柰素对照品（中检院100081-201812）适量，精密称定，置于容量瓶中，加乙醇溶液制成质量浓度为2.4516、4.9031、9.8062、18.3865、24.5154μg/ mL的对照品溶液，分别精密吸取对照品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。线性回归方程为y=9737.2x–4170.5，R2= 0.9999。结果表明，槲皮素在1.7365～17.3620μg/mL，山柰素（酚）在2.4516～24.5154μg/mL内线性关系良好。

2.6精密度实验

精密吸取质量浓度为8.6812μg/mL的槲皮素对照品溶液2μL，注入液相色谱仪，连续测定6次，峰面积的RSD为0.3%；精密吸取质量浓度为9.8062μg/mL的山柰素对照品溶液2μL，注入液相色谱仪，连续测定6次，峰面积的RSD为0.4%。两项RSD值均小于2.0%，表明精密度较好。

2.7重复性实验

取消炎止咳胶囊（20211201-1）内容物6份，按2.3项同法操作，制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。计算其制剂中槲皮素和山柰素（酚）的总量，测定结果见表1。结果为：重复6次测定制剂中槲皮素和山柰素（酚）的总量平均值204.2μg/g，RSD值为1.4%，RSD值小于2.0%，表明该方法重现性好。

2.8加样回收率实验

分别取消炎止咳胶囊（20211201-1）内容物6份，混匀，研细，取约0.5 g（约相当于含槲皮素40.76μg、山柰素61.32μg），置于具塞容量瓶中，精密加入8.68μg/mL的槲皮素对照品溶液5 mL和12.2577μg/mL的槲皮素对照品溶液5 mL，其余步骤按2.3项同法操作，制备供试品溶液，分别吸取6份供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。计算其制剂中槲皮素和山柰素的加样回收率，测定数据见表2、表3。结果为：槲皮素的加样回收率平均值为101%，RSD值为1.8%；山柰素的加样回收率平均值为101%，RSD值为1.8%。结果表明，槲皮素和山柰素的回收率较好。

2.9含量测定

取10批样品按2.3项同法操作制备供试品溶液，分别吸取供试品溶液2μL，注入液相色谱仪，测定，即得。槲皮素线性回归方程为y=18754x–7595.7，山柰素线性回归方程为y=9737.2x–4170.5，计算其制剂中槲皮素、山柰素的含量，测定结果见表4。

3讨论

本实验经过反复比较供试品提取方法和色谱条件，优选了槲皮素和山柰素（酚）的含量测定方法，并做了相应的方法学考察。结果表明，该方法专属性强、重现性好、操作简便。

3.1含量测定方法考察

3.1.1检测波长选择

通过紫外-可见分光光度法，在200～400 nm波长范围内对槲皮素和山柰素（酚）对照品溶液进行全波长扫描，最大吸收波长为370 nm，故选择370 nm为检测波长。在此波长处供试品溶液各组分色谱峰达到完全分离。

3.1.2流动相选择

参考了相关文献[6]在含量测定时所选择的流动相，即乙腈-0.4磷酸（30∶70）。结果表明，在该条件下槲皮素和山柰素对照品的色谱峰较好，但供试品中槲皮素和山柰素色谱峰与其他相邻杂峰分离度较差。将乙腈比例降低，流动相调整为乙腈-0.4磷酸（25∶75）后，供试品中槲皮素和山柰素与其他相邻杂峰达到分离要求，且主成分峰峰形较好，单针运行时间较短，能有效地提高含量测定时间效率。

4结束语

消炎止咳胶囊处方药味较多，但该制剂的君药为贵州民族药胡颓子叶，胡颓子叶指标性成分为黄酮类成分，以槲皮素、山柰素为代表。为有效地控制该制剂的量，笔者建立消炎止咳胶囊中槲皮素和山柰素的UPLC测定方法。该测定方法操作简便、高效快捷、重现性好、专属性强，结果科学准确。

【参考文献】

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：2020年版四部[M].北京：中国医药科技出版社，2020.

[2]贵州省药品监督管理局.贵州省中药材民族药材质量标准：2019年版第二册[S/OL].（2022-10-31）[2024-1-23]http：//yjj. guizhou. gov. cn / gsgg / ypzctg / 202210 / t20221031_ 76961850.html.

[3]黄丽杰，刘伟，崔永霞.胡颓子叶化学成分的研究[J].中成药，2015，37（4）：796-800.

[4]郭明娟，江洪波，田祥琴，等.胡颓子叶的化学成分[J].华西药学杂志，2008（4）：381-383.

[5]付义成，王晓静，贾献慧，等.胡颓子叶化学成分研究[J].中草药，2008（5）：671-672.

[6]刘志海，范红梅，金昭，等.兴仁金线莲中槲皮素、异鼠李素的薄层鉴别及不同部位的含量测定[J].中国民族民间医药，2016，25（24）：25-27.

【作者简介】

刘志海，男，1982年出生，副主任药师，学士，研究方向为中药、民族药、中成药质量控制。

通信作者：彭啟丽，女，1993年出生，中药师，硕士，研究方向为中药、民族药、中成药质量控制，2295421815@qq.com。

（编辑：李钰双）