超高效液相色谱-串联质谱法测定黔产管花党参中党参炔苷含量

【摘要】目的：建立超高效液相色谱-串联质谱测定黔产管花党参中党参炔苷含量的方法。方法：样品经50%甲醇超声提取，在流动相为乙腈-水（50∶50），流速为0.2 mL/min，柱温为35℃的条件下，经Waters ACQUITY UPLC？BEH C18色谱柱分离；采用电喷雾离子源（ESI+）电离样品，多反应监测（MRM）模式下采用标准曲线法进行定量分析。结果：在0.10889～1.0889 ng线性关系良好，平均加样回收率为98.3%（n=6）。结论：该法结果准确可靠，具有高灵敏度和高选择性，适用于黔产管花党参中党参炔苷化合物的分析和鉴定及含量测定研究。

【关键词】超高效液相色谱-串联质谱法；管花党参；党参炔苷；含量测定

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2024.05.001

【基金项目】毕节市科技创新平台及人才团队科技计划项目（毕科合〔2023〕16号）：贵州党参（管花党参）质量控制方法研究。

Determination of Lobetyolin Content in Codonopsis Tubulosa from Guizhou by UPLC-MS/MS

LEI Lianwei， HE Yu*， LU Liya， ZHANG Luyao

（Inspection and Testing Center of Bijie Market Supervision andAdministration Bureau， Bijie 551700， China）

Abstract： Objective： To establish a method for determining the content of lobetyolin in Codonopsis tuberosa from Guizhou using ultrahigh performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry （UPLC-MS / MS）. Methods： The samples were extracted by ultrasonic extraction with 50% methanol. Under the conditions of acetonitrile-water （50∶50） as the mobile phase， a flow rate of 0.2 mL/ min， and a column temperature of 35℃， the samples were separated on a Waters ACQUITY UPLC？BEH C18 column. The samples were ionized using an electrospray ionization source （ESI+） and quantitative analysis was performed using a standard curve method under multiple reaction monitoring （MRM） mode. Results： The linear relationship was good in the range of 0.10889 to 1.0889 ng， and the average recovery rate of spiked samples was 98.3% （n=6）. Conclusion： This method is accurate and reliable， with high sensitivity and selectivity， and is suitable for the analysis， identification， and content determination of lobetyolin compounds in Codonopsis tuberosa from Guizhou.

Keywords： UPLC-MS/MS； codonopsis tubulosa； codonopsis lobetyolin； content determination

0引言

管花党参[1]又名贵州党参，被收录于2023年版《贵州省中药、民族药材质量标准》和《贵州省中药及民族药材质量标准原植（动）物彩色图鉴》中，是贵州省常用的中药民族药。其味甘、性平，具有补中益气、健脾益肺之功效，常用于治疗脾肺虚弱、气短心悸、食少便溏、虚喘咳嗽、内热消渴等症。管花党参主要含有糖类、甾体类、酚酸类、黄酮类、氨基酸等化学成分。笔者通过建立超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）法，确定黔产管花党参中的主要化学成分党参炔苷，并对其含量进行测定[2]，进而对药材质量进行有效控制。

1仪器与试药

ACQUITYTM UPLC超高效液相色谱和Xevo TQ-Smicro质谱仪；电子天平；超声清洗器。

党参炔苷对照品（成都格利普生物科技有限公司，批号23101910，含量：90.07%）；管花党参药材样品（毕节市大方县、威宁县、赫章县采挖野生）；甲醇、乙腈、水均为质谱级。

2方法与结果

2.1色谱、质谱条件

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC？BEH C18（150 mm×2.1 mm，1.7μm）[3]，流动相：乙腈-水（50∶50），流速：0.2 mL/min，柱温：30℃，进样量：1μL。以三重四极杆串联质谱仪进行检测，电喷雾离子源（ESI），扫描方式为正离子模式，检测模式为多反应监测（MRM）模式；毛细管电压：2.5 KV；锥孔电压：30V；脱溶剂气流速：1000 L/h；脱溶剂气温度：500℃；进样锥气体流速：50 L/h；离子源温度：150℃。化合物检测离子对和碰撞电压（CE）如下：母离子397.019；子离子198.961，35 V（CE）；子离子127.99，38 V（CE）。

2.2溶液的制备

2.2.1对照品溶液的制备

取党参炔苷对照品约12.09 mg，置于10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度为1 mg/mL的贮备液；精密吸取0.1 mL置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度；再次精密吸取1、2、4、6、8、10 mL分别置于10 mL容量瓶中稀释至刻度，得不同质量浓度的系列标准溶液，经0.22μm滤膜滤过，即得对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

取管花党参药材粉末，过三号筛备用。精密称取约1 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，称定重量，超声处理（功率500 W，频率40 kHz）30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。精密吸取0.1 mL置于100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度；再次精密吸取1 mL置于10 mL容量瓶中，经0.22μm滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.2.3阴性样品溶液的制备

取质谱级甲醇作为阴性样品溶液。

2.3专属性试验

取上述对照品、供试品和阴性样品溶液，按照2.1项下的色谱、质谱条件进样测定，记录质谱图。结果显示，在管花党参供试品溶液色谱图中，党参炔苷TIC离子峰形较好，党参炔苷TIC离子峰周围无杂峰，且空白溶剂无干扰。具体见图1、图2、图3。

2.4方法学验证

2.4.1线性关系考察

分别取2.2.1项下的系列对照品溶液，按2.1项下的色谱条件进样1μL进行测定，记录质谱图，以定量离子对峰面积为纵坐标，以系列对照品溶液进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。结果显示，党参炔苷进样量在0.10889～ 1.0889 ng内，峰面积呈良好线性关系。回归方程为Y= 18479.9X-326.378，相关系数r=0.9995。

2.4.2精密度试验

取质量浓度为0.43556 ng/μL的党参炔苷对照品溶液1μL进样测定，重复测定6次，记录定量离子对峰面积。结果显示，党参炔苷峰面积RSD为0.2%，表明仪器精密度良好。

2.4.3稳定性试验

取同一供试品溶液（ZP1），分别于0、6、12、24、36、48 h进样测定，记录各时间点党参炔苷峰面积，48 h内测得党参炔苷峰面积的RSD为0.2%，表明供试品溶液在48 h内稳定。

2.4.4重复性试验

取同一供试品6份（ZP1），按2.2.2项同法制备供试品溶液，测定党参炔苷含量。结果显示，6份供试品党参炔苷含量RSD为0.6%，表明该方法重复性良好。

2.4.5回收率试验

取已知含量的管花党参粉末（ZP1，2.909 mg/g）约0.5 g，精密称定6份，置于具塞锥形瓶中，分别加入一定量的党参炔苷对照品，按2.2.2项同法制备供试品溶液，测定党参炔苷含量并计算回收率，平均回收率为98.3%，RSD为1.2%，具体结果见表1。

2.4.6检测限和定量限

分别以S/N=3与S/N=10时的相应浓度确定检出限和定量限。

将已知浓度的党参缺苷对照品溶液采用逐步稀释的方法，多次采集相关数据信噪比。结果显示：当基线信噪比为4.28时，检出限为0.005μg/kg；当信噪比为12.99时，定量限为0.0168μg/kg。

2.4.7样品含量测定

取10批管花党参样品，编号ZP1～ZP10，按2.2.2项同法制备供试品溶液，测定样品中党参炔苷的含量。ZP1～ZP10的含量分别为：2.9、3.1、2.5、2.1、2.5、2.8、2.0、2.7、2.8、2.4 mg/g，平均值为2.6 mg/g。

3讨论

采用质谱法依次对黔产管花党参中的腺苷、色氨酸、紫丁香苷、党参炔苷进行质谱分析。结果显示，党参炔苷对照品色谱峰的保留时间与供试品一致，且定量离子对峰面积较大，并且在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子对均出现，而且所选择的监测离子对峰面积比与对照品的监测离子对峰面积比一致（当相对比例>50%时，允许偏差为±20%；当20%<相对比例≤50%时，允许偏差为±25%；当10%<相对比例≤20%时，允许偏差为±30%；当相对比例≤10%时，允许偏差为±50%）。因此，后续选择党参炔苷进行含量测定研究。

【参考文献】

[1]刘付松，张开弦，姚秋阳，等.贵州党参资源现状与研究进展[J].中华中医药杂志，2023，38（7）：3245-3251.

[2]孙庆文，何顺志，黄敏.黔产管花党参中党参炔苷的含量测定[J].时珍国医国药，2007（8）：1931-1932.

[3]马媛媛.液相色谱-质谱联用技术在中药分析中的应用[J].科技展望，2016，26（34）：133.

【作者简介】

雷联伟，男，1992年出生，主管药师，学士，研究方向为药物分析、药品检验与质量评价。

通信作者：何羽，男，1978年出生，正高级工程师，学士，研究方向为药品检验分析和质量标准，1142065867@qq.com。

（编辑：李钰双）