全自动免疫分析仪在检测SLE 相关自身抗体中的应用价值

罗春华，郝杏飞，柳邦源，龚峰，戴峻英，周昕

（1.宜昌市中心人民医院，湖北 宜昌 443000；2.珠海丽珠试剂股份有限公司，广东 珠海 519000）

1 背景

系统性红斑狼疮（SLE）是一种系统性自身免疫病，其发病机制复杂、临床表现多样。SLE 的主要临床特征包括：血清中出现以抗核抗体（ANA）为代表的多种自身抗体及多器官和系统受累。与SLE 有关的ANA 自身抗体主要为dsDNA、Sm、U1-snRNP、Ro-52、SSA、SSB、PCNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白等。因此，自身抗体检测为SLE 的诊断、鉴别诊断以及规范治疗提供了重要的依据。

现阶段临床检测SLE 自身抗体大多采用“间接免疫荧光（IIF）筛查+免疫印迹/多重免疫确认”的方式，个别指标的量值有显著临床意义时，还会采用ELISA 或CLIA 等方法进行定量检测，例如，dsDNA 对SLE 疾病活动度的监测。

丽珠磁条码免疫荧光发光法（DLCM）是一种新兴的多重检测技术，具有高度敏感性和特异性，同时具备自动化、快速和高通量的特点，且可提供数值化结果。丽珠全自动免疫分析仪可以同时满足医院开展ANA谱（DLCM）+单指标定量意义（CLIA）检测，不需要额外配置2 台不同方法学仪器（多重仪器+CLIA 仪器），为医院节省实验室空间和成本。多重和CLIA 方法学是目前在ANA 检测领域具有竞争优势的方法学，因为多重方法学是印迹法的技术迭代，CLIA 是ELISA 的技术迭代。

本研究主要围绕全自动免疫分析仪在检测SLE 相关自身抗体中的应用价值进行开展，旨在为制定更好的SLE 诊断和相关抗体检测策略提供数据基础。

2 资料与方法

抗SS-A/Ro52 抗体、抗SS-B/La 抗体、抗Jo-1 抗体、抗U1-snRNP 抗体在健康人中有一定的检出率，分别为4.0%、4.0%、2.0%、4.0%，具体见表1。

2.1 一般资料

本次研究选择年限为2022 年7 月～2023 年7 月以200 例SLE 患者、22 例dsDNA 阳性且有治疗记录的SLE患者及50 例健康人为研究对象。性别统计：男43 例、女229 例，年龄7 ～72 岁。SLE 患者具有2012 年国际狼疮研究临床协作组（SLICC）或2019 年EULAR/ACR 制定的SLE 分类标准中的临床表现、肾脏病理和实验室免疫检测结果。

2.2 研究方法

于患者空腹状态下取静脉血，将血样高速离心15min 后，取上层血清。

（1）DLCM 法检测。抗核抗体15 项检测试剂盒由珠海丽珠试剂股份有限公司，严格按照试剂盒说明书进行操作，所有检测均在配套的全自动免疫分析仪（珠海丽珠试剂股份有限公司，型号：xx）上完成，检测仪器为全自动，上样方式为随机进样，单个样本检测时限为37 min。检测前，确保检测仪器已校准、性能验证合格且室内质控在控。

（2）CLIA 法检测。抗双链DNA 抗体IgG 测定试剂盒（化学发光法）由丽珠海丽珠试剂股份有限公司，严格按照试剂盒说明书进行操作，所有检测均在配套的全自动免疫分析仪（珠海丽珠试剂股份有限公司，型号：xx）上完成，检测仪器为全自动，上样方式为随机进样，单个样本检测时限为37min。检测前，确保检测仪器已校准、性能验证合格且室内质控在控。

2.3 观察指标

（1）统计DLCM 检测抗核抗体谱在200 例SLE 患者和50 例健康人中检出率情况，进行敏感性和特异性分析。

（2）对于22 例抗dsDNA 抗体阳性的SLE 患者，在治疗前后检测抗dsDNA 抗体浓度变化，来监测患者的治疗反应和疾病活动度。

2.4 统计学方法

使用SPSS 26.0 数据统计软件对检测结果进行统计分析，计数资料以例和率表示。涉及到计数资料x2 检验均以[n（%）] 表达，涉及计量资料相关性分析使用Pearson 相关系数表示，P ＜0.05 提示检验结果有统计学意义。

3 结果

3.1 抗核抗体谱检测结果

SLE 组患者抗dsDNA 抗体阳性检出率为41.5%、抗Nucleosome 抗体阳性检出率为25.0%、抗Histone抗体阳性检出率为32.0%、抗Sm 抗体的阳性检出率为17.0%、抗P0 抗体的阳性检出率为30.5%、抗U1-snRNP抗体的阳性检出率为23.5%、抗SS-A/Ro52 抗体的阳性检出率为47.5%、抗SS-A/Ro60 抗体的阳性检出率为57.0%等，其他抗体阳性检出率见表1。

3.2 dsDNA 阳性的SLE 患者经药物治疗前后，dsDNA CLIA 检测结果

22 例dsDNA 阳性的SLE 患者，在经药物治疗前后（如图1），均使用dsDNA CLIA 检测，来观察监测药物治疗效果及疾病活动度。22 例患者中，有11 例患者经药物治疗后，dsDNA 滴度有明显的下降，患者有明显好转，表示药物治疗有效；有8 例患者经药物治疗后，dsDNA滴度变化不明显，表示药物治疗效果不佳，提示临床可改变治疗方式；有3 例患者经药物治疗后，dsDNA 滴度不降反升，表示疾病处于加重期，药物治疗无效，需引起临床高度重视。

图1 dsDNA 阳性SLE 患者治疗前后抗体滴度变化情况

使用Pearson 相关系数分析22 例患者治疗后dsDNA抗体浓度和治疗前dsDNA抗体浓度之间的相关性关系（见表2）。具体分析可知：治疗后dsDNA 抗体浓度和治疗前dsDNA 抗体浓度之间的相关系数值为0.706，并且呈现出0.01 水平的显著性，因而说明治疗后dsDNA 抗体浓度和治疗前dsDNA 抗体浓度之间有着显著的正相关关系，通过检测dsDNA 抗体浓度可以用来评估SLE 患者的病情发展进程及药物疗效评价。

表2 Pearson 相关系数分析

4 讨论

系统性红斑狼疮英文简称SLE，属自身免疫性疾病，由过度免疫引起的细胞功能紊乱，血液出现多种抗体攻击健康的身体组织。SLE 好发于育龄期女性，女性发病年龄多为15 ～40 岁，女：男约为7 ～9:1。SLE 的发病率和患病率在不同种族人群中具有一定差异，亚洲及太平洋地区SLE 的发病率约为每年2.5 ～9.9/10 万，患病率约为3.2 ～97.5/10 万。

SLE 在临床上的病症较为复杂，早期也无特异性的表现，因此，会出现误诊的可能。抗核抗体谱检测方法是通过对患者血液中多种抗体的检测来辅助诊断的一种方法。

抗核抗体谱检测方法，目前，有免疫印迹法、多重免疫法等多参数方法学，以及单指标检测的ELISA 和CLIA。免疫印迹法进行自身抗体的多指标联合检测属于传统的检测方法学，只能提供定性的检测结果，且检测时间长，通量小。随着检测技术的更新迭代，磁条码免疫荧光发光法，又称多重数码液相芯片(DLCM) 技术作为新一代的检测方法学，应用场景和免疫印迹法一致，都是多指标筛查。DLCM 技术平台全自动一体化且支持随机进样，从原始管上样、检测、判读到数据上传一气呵成，从结果看，就是“一个样本进，多个结果出”，3 小时可检测180 个样本。多重ANA 谱15 项中dsDNA 指标可定量检测，其他指标则可以提供数值化结果，总之，可相当于印迹法ANA 谱15 项的定性结果+CLIA/ELISA dsDNA 单指标定量结果组合。当然，对于dsDNA 阳性的SLE 患者，临床会对患者进行药物治疗，在药物治疗过程中会定期对患者进行dsDNA 单指标定量检测，来监测SLE 疾病活动度。CLIA 定量检测dsDNA 是目前主流选择，且明确的单指标检测也更符合DRG 收费政策。

丽珠全自动免疫分析仪可以开展ANA 谱（DLCM）+单指标定量意义（CLIA）检测，具备2 台仪器的功能。多重和CLIA 方法学是目前在ANA 检测领域具有竞争优势的方法学，使用占比越来越高。

本研究纳入200 例SLE 患者和50 例健康人，使用丽珠DLCM 检测抗核抗体15 项，15 项抗体阳性检出率基本与文献报道一致。对于22 例有dsDNA 阳性需要治疗的患者，在治疗前后使用丽珠CLIA 检测dsDNA 抗体浓度，可以很好监测患者的疾病活动度及药物治疗效果。

综上，全自动免疫分析仪在ANA 检测应用上具有检测结果快速精准，临床医生可按需开展DLCM 和CLIA 方法学，经济高效更具性价比，可在临床上广泛推广使用。