急性心肌梗死病人PCI术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件发生的关系

王玉婷 丁文滔 华晓芳

摘要 目的：分析急性心肌梗死（AMI）病人行经皮冠状动脉介入（PCI）术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件（MACE）发生的关系。方法：选取2018年1月—2021年1月我院收治的150例因患AMI进行PCI术的病人，同时选取同期100名健康体检者为对照组。采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测血清miR-135b-3p、miR-375-3p表达水平；采用Pearson法分析血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及其与临床资料的相关性；受试者工作特征（ROC）曲线评价血清miR-135b-3p、miR-375-3p对AMI病人PCI后发生MACE的预测价值。结果：相较于对照组，试验组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著升高（P＜0.05）。与非MACE组相比，MACE组C反应蛋白（CRP）、白细胞介素（IL）-1β、IL-6、IL-8、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著上升（P＜0.05）。AMI病人血清miR-135b-3p与miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关（P＜0.05）；血清miR-375-3p与CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关（P＜0.05）。ROC结果显示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者联合预测AMI病人PCI术后发生MACE的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.78，0.756，0.869，其中联合预测AUC显著高于二者单独预测（P＜0.05）。结论：AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高，且PCI术后发生MACE病人miR-135b-3p、miR-375-3p水平高于非MACE病人，可能成为AMI病人PCI术后发生MACE的预测因子。

关键词 急性心肌梗死；miR-135b-3p；miR-375-3p；经皮冠状动脉介入；预测价值

doi：10.12102/j.issn.1672-1349.2024.05.018

作者单位 恩施土家族苗族自治州中心医院（湖北恩施  445000）

通讯作者 华晓芳，E-mail：37629106@qq.com

引用信息 王玉婷，丁文滔，华晓芳.急性心肌梗死病人PCI术后血清miR-135b-3p、miR-375-3p相对表达水平及其与主要不良心血管事件发生的关系［J］.中西医结合心脑血管病杂志，2024，22（5）：868-872.

急性心肌梗死（AMI）是常见的心血管疾病，发病率和死亡率较高，给社会和家庭造成巨大的经济负担［1］。AMI是因缺氧损害心肌细胞引起的，分为ST段抬高型心肌梗死（STEMI）和非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）两种类型［2］。目前，临床首选经皮冠状动脉介入（PCI）对AMI病人进行治疗，虽可降低病人死亡率，但因AMI病人PCI术后易发生各种心血管疾病事件，严重影响预后［3］。因此，寻找与AMI关系密切的生物标志物用于临床对AMI的识别与研究，改善AMI预后，对提高病人生存率具有重要的意义。microRNA（miRNA）是由18～25个核苷酸组成的非编码RNA（ncRNA），在细胞增殖、分化、凋亡、免疫和血管生成等各种生物学过程中发挥着重要作用［4］。有研

究显示，miRNA在维持正常的心脏发育和心血管疾病的发病机制方面发挥着关键作用［5］。有研究显示，通过调节miRNA-223-3p下调原发性新生大鼠心肌细胞中磷酸化蛋白激酶B（AKT）表达，可减轻心肌损伤［6］。因此，猜测miR-135b-3p、miR-375-3p可能与AMI有关。本探究旨在检测AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p表达水平，探讨二者联合检测对AMI病人PCI术后的预后价值，旨在为临床AMI的防治和改善预后提供新的研究方向。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月—2021年1月我院收治的因患AMI進行PCI术的150例病人作为试验组。纳入标准：确诊为AMI［7］；心肌酶及肌钙蛋白超过正常范围，且动态演变；心电图有动态演变；胸痛持续时间较长。排除标准：合并脑血管疾病；合并外周血管疾病；合并恶性肿瘤、肝、肾功能不全；合并血液系统疾病、自身免疫性疾病；合并严重感染性疾病。选取同期健康体检者100名为对照组。两组一般资料比较，差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。详见表1。本研究经过医院伦理委员会批准，所有研究对象均知情同意。

1.2 方法

1.2.1 荧光定量聚合酶链式反应（PCR）测定血清miR-135b-3p、miR-375-3p表达水平

抽取研究对象体检清晨空腹静脉血5 mL，血清保存于－80 ℃待测。使用RNeasy Mini Kit（QIAGEN，Hilden，德国）纯化血清总RNA，并用PrimeScript RT-PCR试剂盒反向转录。计算A260/A280比率评估RNA质量和纯度。在推荐的热循环设置下，使用RotorGene 6000系统（Corbett Life Science，德国QIAGEN）上使用SensiFASTTMSYBRNo-ROX试剂盒（Bioline）进行qPCR。以U6为内参。基因相关序列见表2。反应结束后采用2－△△Ct法计算miR-135b-3p、miR-375-3p mRNA相对表达量。

1.2.2 观察指标

记录病人年龄、性别、吸烟史、体质指数、收缩压、舒张压、高血压、高脂血症、糖尿病、心功能Killip分级［8］等。采用迈瑞BC-6800血液分析仪进行血常规检测，包括：术前血糖、平均血小板体积（MPV）、血小板计数（PLT）、C反应蛋白（CRP）；采用酶联免疫吸附法（ELISA）试剂盒（莱尔生物技术有限公司）检测血清中白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-8（IL-8）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）；采用全自动生化分析仪（AU5400，日本）检测三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）、肌钙蛋白。

1.3 研究方法

1）比较试验组与对照组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平；2）比较预后良好组与预后不良组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平；3）比较预后良好组与预后不良组临床特征，分析AMI病人PCI术后预后的影响因素。

1.4 随访

对PCI术后试验组病人进行1年随访，所有病人均无失访。随访方式：门诊就诊、电话；随访内容：观察病人PCI术后主要不良心血管事件（MACE，包括心绞痛、心力衰竭、心律失常、再梗死、心源性死亡等）发生情况，将发生MACE的病人设为MACE组，未发生MACE的病人设为非MACE组。

1.5 统计学处理

采用SPSS 25.0软件进行数据分析。符合正态分布的定量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用独立样本t检验；定性资料以例数、百分比（%）表示，采用χ2检验。受试者工作特征（ROC）曲线评价血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平对AMI病人PCI后发生MACE的预测价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 对照组与试验组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平比较

相较于对照组，试验组血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平显著升高（P＜0.001）。详见表3。

2.2 不同预后组临床资料比较

与非MACE组相比，MACE组CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、miR-135b-3p、miR-375-3p水平升高，差异有统计学意义（P＜0.05）。详见表4。

2.3 miR-135b-3p、miR-375-3p水平與临床检测指标的相关性

AMI病人血清miR-135b-3p与miR-375-3p、CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关（r值分别为0.625，0.616，0.594，0.553，0.539，0.641，P＜0.05）；血清miR-375-3p与CRP、IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α水平呈正相关（r值分别为0.585，0.633，0.596，0.574，0.608，P＜0.05）。

2.4 血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平对AMI病人PCI术后MACE发生的预测价值

以AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平为检验变量，以AMI病人PCI术后是否发生MACE（否＝0，是＝1）为因变量，绘制ROC曲线。结果显示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平及二者联合预测AMI病人PCI术后发生MACE的ROC曲线下面积（AUC）分别为0.784，0.756，0.869，其中联合预测AUC高于二者单独预测AUC（Z值分别为4.940，4.446，P＜0.05）。详见图1、表5。

3 讨 论

随着社会经济的快速发展和生活方式的改变，心血管疾病已成为全球人类的主要死因，约占我国总死亡人数的40%［9］。数据显示，2016年我国约397万例病人死于心血管疾病，较1990年增加了146万例［10］。冠心病是指冠状动脉粥样硬化，导致血管管腔变窄甚至阻塞，AMI是冠心病的严重类型，是由冠状动脉急性持续缺血和缺氧引起的心肌坏死，临床表现为心力衰竭、恶性心律失常和心源性休克等，具有起病快、死亡率高的特点［9］。PCI可迅速恢复血流，开通阻塞的冠状动脉血管，缓解缺血缺氧症状，挽救病人生命，是临床治疗AMI的主要方法［11-12］。然而，经PCI治疗的AMI病人支架内再狭窄、血栓形成和术后并发症概率较高，严重影响病人预后。因此，寻求与AMI关系密切，并对其预后有预测价值的生物标志物成为研究热点。

miRNA是内源性短（20～22个核苷酸）、非编码RNA，已证实参与多种细胞过程，包括癌症、心血管疾病和炎症性疾病，其在心肌损伤期间上调或下调，显示出其作为AMI和缺血再灌注损伤（I/R）生物标志物的潜力［13-14］。有研究显示，I/R与AMI的发生、发展有关，导致大量亚铁离子（Fe2＋）流入和活性氧产生，是细胞损伤、发病的主要机制［15］。大鼠实验中发现，miR-135b-3p在心肌I/R大鼠心肌组织和缺氧/复氧（H/R）心肌细胞中上调，通过抑制谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达，促进铁死亡，加重细胞损伤，靶向miR-135b-3p可能是心肌I/R损伤的潜在治疗方法［16］。本研究结果表明，与对照组相比，试验组miR-135b-3p水平显著上升，提示高水平miR-135b-3p促进AMI发展；进一步研究发现，MACE组血清miR-135b-3p表达水平显著高于非MACE组，其预测AMI病人PCI术后发生MACE的AUC为0.784，提示血清miR-135b-3p与AMI病人PCI术后预后关系密切，对AMI病人PCI术后MACE的发生具有一定的预测价值。Garikipati等［17］研究显示，miR-375水平升高与心肌梗死的啮齿动物及心力衰竭病人有关，抗miR-375疗法靶向少数由磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1（PDK-1）/AKT信号传导机制介导的多种细胞类型，减轻炎症反应，减少心肌细胞死亡，改善左心室功能并增强血管生成。Zhuang等［18］研究显示，在I/R大鼠模型和继发性心肌纤维化（CF）细胞模型中，高表达miR-375-3p通过介导GPX4加速心肌细胞铁死亡，从而促进心肌纤维化，miR-375-3p是预防和治疗CF的新型潜在生物标志物。本研究结果显示，试验组miR-375-3p水平显著高于对照组，且MACE组AMI病人血清miR-375-3p水平显著高于非MACE组，提示miR-375-3p参与AMI的发生、发展。miR-375-3p预测AMI病人PCI术后发生MACE的AUC为0.756；进一步ROC分析显示，血清miR-135b-3p、miR-375-3p水平联合预测AMI病人PCI术后发生MACE的AUC及敏感度较高，可能为预测AMI病人PCI术后发生MACE提供参考。

AMI的發展加剧炎症反应，有研究显示，AMI无回流现象病人血液超敏C反应蛋白显著升高［19］。在AMI小鼠中，AMI诱导炎性细胞因子产生，引起IL-6、IL-1β、TNF-α水平升高［20］。Kristono等［21］研究显示，IL-6、IL-8在AMI病人中表达上调，可独立预测不良心血管事件。本研究结果显示，MACE组血清CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平显著高于非MACE组，可参与AMI病人预后；进一步研究发现，miR-135b-3p与miR-375-3p具有相关性，且与CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α水平呈正相关。可能通过miR-135b-3p与miR-375-3p共同作用，增强病人机体炎症反应，进一步使CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表达水平升高，具体机制仍需进一步研究。

综上所述，AMI病人血清miR-135b-3p、miR-375-3p表达升高，促进AMI进程，增加病人机体炎症反应，进一步提高CRP、IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α表达水平。二者可能成为AMI病人PCI术后MACE发生的预测因子。本研究未分析miR-135b-3p、miR-375-3p与AMI病人PCI术后发生心血管不良事件的具体作用机制，今后需进一步深入研究。

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（收稿日期：2023-03-14）

（本文編辑薛妮）