血管内皮细胞生长因子、可溶性胸苷激酶-1对乙型病毒性肝炎治疗效果的预测

任 静,黎圣洪,钟华平

(厦门医学院附属第二医院感染疾病科,福建 厦门 361000)

慢性乙型肝炎(HBV)是临床常见的传染病之一[1]。据统计[2],全球约有2.5亿HBV感染者,这对公共卫生安全构成了巨大威胁,因此,准确监测乙肝相关肝病的进展在临床上尤为重要。有研究报道显示[3],HBV相关肝病患者外周血中的多种细胞因子均有明显的异常,这与疾病的发展有一定关系。血管内皮细胞生长因子(VEGF)、可溶性胸苷激酶-1(TK-1)不仅对HBV的诊断具有积极意义,而且在一定程度上对判断HBV耐药性具有一定价值[4]。本文主要研究VEGF和TK-1的表达水平,以预测和分析HBV患者的治疗效果,为疾病诊断和治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料:选取2021年2月～2022年2月厦门医学院附属第二医院收治的HBV患者130例为治疗组,选取同期到本院进行体检的健康者130例为对照组。治疗组中男71例,女59例;年龄34～65岁,平均(43.63±6.17)岁;平均体重指数(BMI)为(23.25±2.52)kg/m2。纳入标准:①符合《慢性乙型肝炎诊断标准(2015年版)》[5]中关于HBV的相关诊断标准;②近期未使用抗病毒或免疫抑制剂;③临床资料完整。排除标准:①哺乳期或妊娠期妇女;②患严重精神疾病者;③恶性肿瘤患者;④自愿参与本研究并签署知情同意书者。对照组中,男68例,女62例;年龄38～64岁,平均(43.36±6.17)岁;平均BMI(23.63±2.37)kg/m2。纳入标准:①HBV阴性者;②无自身免疫性疾病;③临床资料完整。排除标准:①严重的心、脑、肾功能障碍患者;②精神障碍,无法配合检查者;③血液系统疾病者。两组临床资料,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。本次研究经过本院医学伦理委员会同意。

1.2方法

1.2.1疗效判定:治疗后患者的肝功能指标明显恢复,HBV DNA含量降低值>2 000 copy/mL则为有效;治疗后患者肝功能指标无明显变化,HBV DNA含量降低值<2 000 copy/ml则为无效。本研究中130例显著有效或有效的HBV患者被选为有效治疗组(97例),以无效作为治疗无效组(33例)。

1.2.2血清VEGF、TK-1值检测:于清晨空腹抽取静脉血2 ml,于3 h内以4 000 r/min离心10 min,分离血清,保存于-20 ℃冰箱中。收集样本后,使用酶联免疫吸附试验(ELISA,试剂盒购自英国Abcam抗体公司)测定血清TK-1和VEGF值。所有操作均严格按照说明进行。

1.2.3免疫功能检测:使用流式细胞仪(美国Sigma公司)对两组患者CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、水平进行检测,抗体购于美国BD公司;使用全自动免疫分析仪(美国Sigma公司)检测两组患者的IgA、IgG和IgM(试剂盒购自美国BD公司)。所有操作均按照说明书严格操作。

1.2.4HBV DNA载量水平检测:于清晨空腹抽取静脉血5 ml,以12 000 r/min离心5 min,用实时荧光聚合酶链反应(PCR,试剂盒购自南京博世生物科技有限公司)定量检测HBV DNA载量水平。所有操作均严格按照说明进行。

1.2.5肝功能指标检测:抽取患者晨起空腹外周静脉血5 ml,3 000 r/min离心10 min,收集上清液,-40 ℃保存检测,用罗氏P-800全自动生化分析仪(试剂盒购自有限公司)测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和总胆红素(TBIL)水平。所有操作都严格按照说明进行。

1.3统计学方法:采用SPSS25.0统计学软件进行t检验及χ2检验;采用Spearman相关性分析VEGF、TK-1与各指标关系;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析VEGF、TK-1评价HBV的治疗效果。

2 结果

2.1两组VEGF、TK-1水平比较:治疗组VEGF[(256.36±17.47)pg/ml]、TK-1[(2.16±1.75)pmol/L]水平明显高于对照组[(92.47±13.26)pg/ml,(0.57±0.28)pmol/L],差异有统计学意义(t=85.199、10.229,P<0.05)。

2.2两组免疫功能比较:对照组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM均显著高于治疗组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组免疫功能比较

2.3不同治疗效果患者的VEGF、TK-1、HBV DNA水平比较:经治疗后,两组VEGF、TK-1、HBV DNA均有显著改善,且有效组改善程度较无效组更为显著,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同治疗效果患者的VEGF、TK-1、HBV DNA水平比较

2.4不同治疗效果患者的肝功能比较:经治疗后,有效组ALT、AST、TBIL水平均明显低于无效组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 不同治疗效果的肝功能比较

2.5不同疗效患者免疫功能比较:经治疗后,无效组免疫功能显著低于有效组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 不同疗效患者免疫功能比较

2.6VEGF、TK-1与各指标相关性分析:经Spearman相关性分析显示,VEGF、TK-1与CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgA、IgG、IgM呈负相关,与AST、TBIL、ALT、HBV DNA呈正相关,差异有统计学意义(P均<0.05)。见表5。

表5 VEGF、TK-1与各指标相关性分析

2.7ROC曲线分析:对于HBV患者治疗效果的预测,VEGF检测与TK-1检测联合的ROC曲线下面积明显高于单项VEGF检测与单项TK-1检测结果,差异有统计学意义(P<0.05)。见表6、图1。

图1 ROC曲线分析

表6 VEGF、TK-1联合检测对治疗效果的预测价值分析

3 讨论

HBV感染在世界范围内流行,随着疾病的进一步进展,HBV对机体肝脏细胞造成反复损伤,从而增加疾病恶化风险,因此,及时辨别HBV患者病情转变进程,对改善患者生存和预后具有重要的临床意义[6]。关于血清VEGF和TK-1在乙型肝炎相关肝病中的系统研究较少。VEGF通过促进胶原酶、纤维蛋白原和其他相关蛋白的生物合成,在诱导新血管中具有强大作用,并通过调节内皮细胞的增殖和迁移实现血管通透性的改变[7]。作为肿瘤细胞的血清学增殖标志物,TK-1已被证明与多种恶性肿瘤的发生和临床预后密切相关[8]。

本研究显示,HBV患者VEGF、TK-1水平明显高于健康人群,免疫功能显著低于正常水平。由于慢性肝病导致大量肝细胞受损,肝细胞和内皮细胞释放的VEGF、TK-1和其他细胞因子水平会增加,且HBV缺乏自身的VEGF,依赖于在肿瘤进展过程中宿主细胞基因的募集,以促进血管生成。有学者表明[9],VEGF和TK-1的水平取决于细胞的增殖,正常情况下,成人体内VEGF和TK-1的含量极低。侯宝洲等[10]研究表明,HBV X蛋白(HBx)可能通过上调TK-1和VEGF促进HBV相关肝癌的发生和发展,TK-1、VEGF在TK-1相关性肝癌中广泛表达。上述观点在本研究中亦得到了证实。研究表明[11],血清TK-1被用作癌症诊断和预后的生物标志物,广泛参与细胞生物学过程,如DNA复制和细胞增殖,高基线TK-1与不良预后相关。作为一种强大的血管生成因子,VEGF在血管生长和信号转导中发挥着重要作用[12]。研究表明,VEGF的激活是肝病发生和发展的重要组成部分,VEGF的高表达是肝癌形成的重要前提和基础[13]。VEGF-A结合VEGF受体1(VEGFR1)和VEGFR2,并通过受体的TK结构域诱导伤口愈合[14]。VEGF可以调节细胞的微环境,在肝损伤的修复和纤维化的形成中发挥重要作用。谢雯净等[15]研究后发现,随着HBV患者病情的改善,患者血清中TK1、AFP和CHI3L1的水平降低,这与治疗效果有关,这与本研究结果相似。本研究显示,在预测HBV患者治疗效果方面,VEGF检测和TK-1检测组合的ROC曲线下面积显著高于单独VEGF检测和单独TK-1检测。VEGF和TK-1检测可以有效预测HBV患者的治疗效果,但两种方式联合检测敏感性更高。

综上,VEGF和TK-1的表达水平与HBV患者的肝功能和免疫功能显著相关,VEGF和TK-1对HBV的治疗效果有显著的预测价值。但目前样本量小,后续有必要进一步增加样本量,以进一步证实VEGF、TK-1对于HBV的治疗效果具有显著的预测价值。