血清miR-122-5p、miR-618、miR-202联合检测对原发性肝癌的诊断价值分析

魏世东,孙劲文,梅 雪

原发性肝癌为临床常见肝胆系统恶性肿瘤,作为异质性较强的恶性肿瘤,原发性肝癌的发生及发展受多种分子生物学指标的影响［1 - 2］。微小核糖核酸为20 ～ 24个核苷酸构成的非编码单链核糖核酸分子,具有广泛的生物调节作用,其中微小核糖核苷酸-122-5p(miR-122-5p)可调节免疫信号和炎症指标水平,进而诱导细胞凋亡,而微小核糖核苷酸-618(miR-618)抑制了恶性肿瘤细胞的增殖及促进其凋亡,微小核糖核苷酸-202(miR-202)在基因调控中起着重要作用,可抑制肿瘤细胞转移［3 - 4］。尽早诊治是原发性肝癌的主要干预原则,但肝癌的解剖位置较深,肝穿刺活体组织检查为原发性肝癌的确诊方法,创伤较高、操作复杂［5］。血清学指标检测具有创伤低、可重复性强、检测方便的优势,但联合检测是否可进一步提高原发性肝癌的诊断率仍需探索。基于此,本研究旨在分析血清miR-122-5p、miR-618、miR-202联合检测对原发性肝癌的诊断价值,为原发性肝癌的临床诊治提供新的依据。

1 对象与方法

1.1对象 回顾性选取应急总医院2022年1月 ～ 2023年1月收治的原发性肝癌患者118例纳入原发性肝癌组,另择同期120例良性肝脏疾病患者纳入良性组,120例健康体检者为健康对照组,收集其临床资料。原发性肝癌组男性63例,女性55例;年龄32 ～ 73岁,平均(53.79 ± 8.24)岁;体质量指数(BMI)19 ～ 25 kg/m2,平均(22.89 ± 1.65)kg/m2。良性组男性63例,女性57例;年龄30 ～ 71岁,平均(54.02 ± 7.40)岁;BMI 18 ～ 24 kg/m2,平均(22.95 ± 1.51)kg/m2。健康对照组男性65例,女性55例;年龄31 ～ 75岁,平均(55.81 ± 8.57)岁;BMI 19 ～ 26 kg/m2,平均(23.05 ± 1.49)kg/m2。3组研究对象性别、年龄、BMI等一般资料比较,差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。研究经应急总医院医学伦理委员会批准,患者或家属知情同意。

纳入标准:(1)原发性肝癌组患者均符合《原发性肝癌的分层筛查与监测指南(2020版)》中相关诊断标准［6］;(2)良性组肝脏疾病包括乙型肝炎、非酒精性脂肪性肝病、酒精性肝病等;造血功能及凝血功能正常者;(3)成年;(4)临床资料完整等。排除标准:(1)合并其他恶性肿瘤;(2)肝肾功能障碍;(3)妊娠期或哺乳期;(4)既往接受放化疗、靶向治疗或其他治疗;(5)合并自身免疫性疾病等。

1.2方法 收集所有研究对象临床资料,包括性别、年龄、TNM分期、乙型肝炎病毒(HBV)感染、肿瘤数目等。

入院后当日取研究对象血液标本3 ml,离心处理(离心速度3 000 r/min,离心半径10 cm,离心时间10 min)后取血清,并提取总核糖核酸,再将总核糖核酸进行反转录,生成双链的互补脱氧核糖核酸。采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术(上海生工生物工程有限公司提供引物试剂盒)检测血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平,其中miR-122-5p、miR-618、miR-202、内参β-actin序列正向分别为:AGUUUUGCAUAGUUGOACUCAC,AACACGCAGAGGTATAGGGCAT,GGGGAAACTCTACTTGTCCTT,GCGCGTCGTTAAGCGTTC,反向分别为:AGUUUUGCAUAGUUGCACUCAC,CAGTGCAGGGTCCGAGGT,TCGTATCCAGTGCGTGTCGT,GTGCAGGGTCCGAGGT,采用2-△△CT对miR-122-5p、miR-618、miR-202表达水平进行定量计算。

2 结果

2.13组研究对象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比较 原发性肝癌组血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平低于良性组和健康对照组,良性组低于健康对照组,差异有统计学意义(P< 0.05)。见表1。

表1 3组研究对象血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比较

2.2不同病理特征原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比较 年龄≥60岁、TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、HBV感染、肿瘤数目多发的原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平更低,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 不同病理特征原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平比较

2.3原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之间的相关性分析 Pearson相关性分析法结果显示,原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表达水平均呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202水平之间的相关性

2.4miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的诊断价值 ROC曲线分析结果显示,miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的预测价值,AUC分别为0.839、0.814、0.807、0.932,灵敏度分别为85.59%、84.75%、79.66%、88.98%,特异度分别为75.00%、68.75%、70.00%、85.42%,联合检测均为最高。见表4。

表4 miR-122-5p、miR-618、miR-202单独及联合检测对原发性肝癌的诊断价值

3 讨论

流行病学研究显示,我国原发性肝癌发病率呈上升趋势,已成为严重公共卫生问题,早认识、早诊断、早治疗为原发性肝癌的主要干预原则［7］。miRNA表达失调被认为在多种炎症、肿瘤疾病中的常见事件,可通过与目标mRNA的3′-UTR区结合,因此miRNA具有双向作用,进而参与肿瘤细胞生物学过程,使其成为潜在的诊断靶标［8］。miR-122-5p可通过靶向细胞因子信号转导抑制因子1/转录激活因子3信号通路参与肝细胞损伤,进而诱导肝癌的发生［9］。康璐璐等［10］研究显示,miR-122-5p在创伤性脑外伤后小胶质细胞中表达下调,可减少小胶质细胞凋亡,控制组织炎性损伤。王继振等［11］研究指出,miR-122-5p表达可食管鳞状细胞癌的临床治疗和诊断提供分子基础,对肿瘤细胞增殖和侵袭具有抑制作用,在食管鳞状细胞癌细胞中表达降低。

本研究结果显示,原发性肝癌组血清miR-122-5p、miR-202水平低于良性组和健康对照组,良性组低于健康对照组;且年龄≥60岁、TNM分期Ⅲ ～ Ⅳ期、HBV感染、肿瘤数目多发的原发性肝癌患者血清miR-122-5p、miR-202水平更低,提示miR-122-5p、miR-202表达降低与原发性肝癌发生及发展密切相关。miR-618靶基因为FOXO1,其是一个转录因子,为机体常见抑癌基因;miR-618还可诱导上皮细胞向间充质细胞转化,抑制肿瘤细胞侵袭及迁移［12］。李敏等［13］研究显示,miR-618可通过下调SMAD4蛋白表达抑制结直肠癌生长转移。Cao等［14］研究指出,miR-618在胃癌患者中表达降低,miR-618的过表达对细胞增殖具有抑制作用。本研究结果显示,原发性肝癌组血清miR-618水平低于良性组和健康对照组,良性组低于健康对照组,且年龄≥60岁、TNM分期Ⅲ～Ⅳ期、HBV感染、肿瘤数目多发的原发性肝癌患者血清miR-618水平更低,提示miR-618表达降低与原发性肝癌发生及发展密切相关。谷士海等［15］研究表明,miR-618在胃癌中表达降低,非小细胞肺癌中表达增加,miR-618低表达的非小细胞肺癌患者的术后5年总生存率更低,在不同病理特征的非小细胞肺癌患者中表达存在差异,与本研究结果相互印证。

miR-202可通过靶向抑制促癌基因Gil1的表达功能,从而抑制了癌细胞的增殖及促进其凋亡,其表达与肿瘤的增殖及转移具有相关性。卢振等［16］的报道中已证实,肝癌患者血清中miR-202表达量降低,且与肿瘤标志物含量、癌基因表达量呈负相关,可抑制肝癌进展。李晓涛［17］研究指出,miR-202高表达与原发性肝癌患者生存期长、预后复发率小密切相关,与本研究结果基本一致。

综上,随着肝脏病情进展,患者血清miR-122-5p、miR-618、miR-202表达水平降低,三者联合检测对原发性肝癌的诊断价值较高,可能作为原发性肝癌患者确诊依据,进而为提高原发性肝癌的早诊断、早治疗、改善患者预后奠定坚实基础。但本研究为回顾性研究,血清miR-122-5p、miR-618、miR-202联合检测对原发性肝癌诊断价值仍有待进一步进行前瞻性、多中心研究予以验证。