蒙医温针调节神经递质及皮质醇含量治疗抑郁大鼠机制研究

阿茹娜，包青林，赛音朝克图，阿古拉，斯楞格*

（1.内蒙古医科大学蒙医药学院，呼和浩特 010110；2.内蒙古自治区国际蒙医医院，呼和浩特 010013；3.内蒙古科技大学包头医学院，内蒙古 包头 014040）

抑郁症主要表现为认知、情感与躯体的多方面综合障碍，为临床相对常见的精神疾患，研究提示，目前人类患抑郁症总人数超过3 个亿[1]。其中抑郁症的躯体症状临床上尚无明确的病理征象，多以机体痛苦感与致残情况等感觉为评估标准[2]，其属于精神障碍最常见症状[3]。研究提示约75%抑郁症患者存在有不同类型的失眠、疲劳以及头晕等症状[4]。针对抑郁症发生机制研究提示，下丘脑-垂体-肾上腺轴在其发生发展过程中发挥十分重要的作用[5]，一旦被过度激活，则将导致机体分泌皮质醇水平的显著升高，改变患者的认知能力，造成患者失眠等症状[6]。

临床上抗抑郁药物有许多种，其中主要以5-HT 受体拮抗剂和摄取抑制（SARIs）、三环类抗抑郁药（TCAs）以及NE/DA 再摄取抑制剂（NDRIs）等药物主。研究显示，临床中应用的抗抑郁药物虽然种类繁多，但约有30%～60%的抗抑郁药物治疗效果不尽人意，近40%的患者服用后6 ～12 周未见疗效，50%以上的患者未被治愈[7-8]。而且这类药物在服用后虽有短期疗效，随着服用时间的延长，会出现不同程度的不良反应，严重的甚至会增加患者的自残、自杀风险。蒙医温针疗法具有几千年的悠久历史[9-10]，以针对机体固定穴位实施针刺治疗，加以热刺激等发挥治疗和预防疾病、促进伤体康复等目的[11]。其中所用银针其导热性能十分良好，结合热刺激特定穴位后发挥调节机体寒热，改善气血循环等作用[12-13]。近年来针对抑郁症复杂的发病机制，利用蒙医温针多角度、多层次、多途径等独特的治疗特点，研究证实了蒙医温针疗法对抑郁大鼠胃肠功能、神经营养因子、脑肠肽的影响。但是蒙医温针对抑郁大鼠皮质醇含量的影响目前尚无研究报道。基于此，本研究通过分别建立抑郁大鼠动物模型，探讨蒙医温针对动物皮质醇以及机体紧张焦虑等状况的改善，阐述蒙医温针治疗抑郁的可能机理，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 动物与分组 清洁SD 雄性大鼠，体质量160 ～180 g，共45 只（由内蒙古大学实验动物中心提供），随机分为3 组，按随机方法分成蒙医温针组、西药治疗组（金耀氨基酸有限公司，天津，中国，编号：439-14-6）和生理盐水组，每组15 只。本研究通过内蒙古医科大学生物医学科研伦理审批（审批标号：YKD202301169）。1） 蒙医温针组：共15 小笼，每笼1 只孤养，接受各种不同的应激刺激28 d。每日进行应激刺激后1 小时，给予蒙医温针干预，将大鼠固定后，用特制蒙医银针进行针刺，之后连接蒙医智能针灸治疗仪，电流强度为100 mA，温度为40 ℃，干预15 min。穴位取顶会、赫依、心、肠、巴达干、胃等6 个穴，按顶会/赫依（镇赫依）、心/肠（通白脉）、巴达干/胃（调胃火）进行配伍，按此顺序，每日1次，每次15 min，共计治疗28 d。2） 西药治疗组：共15 小笼，每笼1 只孤养，接受各种不同的应激刺激28 d。每日进行应激刺激后1 小时给予腹腔注射百忧解（注射剂量：2 mg/kg， 每日1 次，生理盐水稀释1 mL）；3） 生理盐水组：共15 小笼，每笼1 只孤养，接受各种不同的应激刺激28 d。每日进行应激刺激后1 小时给予腹腔注射生理盐水（注射剂量：2 mg/kg，每日1 次）。

1.2 蒙医温针方法及选穴 根据蒙医调节三根理论和临床上行之有效的穴位，蒙医温针疗法的选穴原则是以蒙医“辨证施治”学说为指导[14-16]，主要根据不同疾病的病因病机，并结合白脉分布、疼痛点、病变部位等具体情况辨证取穴。蒙医温针疗法常用穴位是指根据文献记载及临床经验，总结出的适应病症范围相对明确而疗效确切的固定穴位，选穴原则：顶会穴、赫依穴、心穴，巴达干穴、胃穴、肠穴、顶会穴（位于顶骨正中）、赫依穴（第一胸椎下凹正中）、心穴（第七胸椎下凹陷正中）、巴达干穴（第三胸椎下凹正中）、胃穴（第十一胸椎下凹正中）、肠穴（第十三胸椎下凹正中）[17]， 使用特制银针（内蒙古医学院蒙医药学院，专利号：ZL201120058078.0）（直径0.5 mm，长度3.0 cm）斜刺后， 接MLY-I 型蒙医温针仪（内蒙古医学院蒙医药学院，专利号：ZL201120058078.0）。电流强度100 mA， 温度40 ℃， 每次刺激15 min， 每隔3 d 治疗1 次， 共5 次。

1.3 实验方法

1.3.1 抑郁大鼠造模 以CUMS 模型为基础，试验大鼠均孤养，并接受28 天不同类型的应激刺激，包括冷水游泳、昼夜颠倒、禁食、夹尾、禁水、水平摇晃和笼位倾斜45°等，随后通过观察大鼠精神状况、饮水量、进食量、粪便情况、测量体质量等一般情况及糖水消耗实验进行评估，评定抑郁症模型大鼠造模是否成功。

1.3.2 中枢神经递质检测方法[18]快速分离试验动物的中枢神经系统，并在冰浴下对分离组织进行称重，离心后置于玻璃器皿内打浆摇匀，随后去上清液，滴入浓度为0.4 mol/L 的高氯酸钠，快速放入-60℃低温冰箱保存后备用。

1.3.3 血清皮质醇测定方法 在早上7 点的时候从尾静脉取血液1 mL，用冷冻式离心机离心10 min，离心机转速设置为3 000 r/min，离心后取其上清液保存于低温冰箱，用于后续的检测，具体检测方法详见参见文献[19]。

1.3.4 大鼠海马组织神经细胞的形态学观察 将未麻醉的大鼠脱椎致死，迅速准确地切取分离出海罗马状组织，切片立即再投入已稀释的4%多聚异甲醛试液箱中，固定约2 h，酒精稀释的梯度分别是75%、85%、95%以及100%。干燥以后，二甲苯膜层是透明的，用石蜡进行包埋。切片厚度可达近5 mm，置于60 ℃的恒温培养箱中干燥约4 h，备用。HE 染色方法：用石蜡进行切片，经脱蜡剂冷却处理至表面干燥以后，用苏木色素溶液浸染15 min，用无水乙醇和自来水冲洗干净，再改用伊红色素溶液浸染约2 min，用酒精处理，酒精稀释的梯度分别是75%、85%、95%以及100%。等到二甲苯磺胺变得透明以后，用中性的树脂进行封片，在显微镜下观察分离出的大鼠脑组织。

2 结果

2.1 蒙医温针组、西药治疗组和生理盐水组中枢神经递质含量改变 结果见图1。

图1 蒙医温针组、西药治疗组和生理盐水组中枢神经递质含量改变

2.2 蒙医温针组和生理盐水组应激前后体质量差值及随时间的变化 见表1。

表1 不同治疗对抑郁大鼠体质量的影响（± s，n = 15） g

表1 不同治疗对抑郁大鼠体质量的影响（± s，n = 15） g

注：与生理盐水组比较，# P ＜0.05

组别 时间 CUMS 应激时间0 h 24 h 48 h 72 h蒙医温针组 应激前 315.15±2.31 285.93±3.65 277.49±3.66 254.19±3.85应激后 19.38±1.96 # 18.93±2.20 # 17.15±1.75 # 16.53±1.32 #生理盐水组 应激前 312.93±2.35 277.80±3.57 256.64±3.65 240.00±3.76应激后 14.93±0.63 16.55±2.01 13.02±1.72 12.12±0.95 Sum 应激前 296.45±2.41 286.47±3.69 268.52±3.53 254.69±3.88应激后 17.92±1.88 18.43±2.31 18.78±1.72 20.85±1.69

2.3 蒙医温针对大鼠血清皮质醇含量的影响 见表2。2.4 蒙医温针和生理盐水组试验大鼠血清皮质醇随时间变化的观察 见表3。

表2 2 组间抑郁大鼠的血清皮质醇差值的比较（± s，n = 10） nmol/L

表2 2 组间抑郁大鼠的血清皮质醇差值的比较（± s，n = 10） nmol/L

注：与生理盐水组比较，# P ＜0.05

组别 血清皮质醇差值蒙医温针组 1.78±0.89#生理盐水组 4.39±0.72

表3 不同治疗对抑郁大鼠血清皮质醇的影响（± s，n = 15） μg/dL

表3 不同治疗对抑郁大鼠血清皮质醇的影响（± s，n = 15） μg/dL

注：与生理盐水组比较， # P ＜0.05

组别 时间 CUMS 应激时间1 d 2 d 3 d 4 d蒙医温针组 应激前 10.15±0.85 11.67±1.21 12.93±1.11 13.16±1.38应激后 2.13±0.12 # 1.19±0.32 # 1.43±0.22 # 1.56±0.23 #生理盐水组 应激前 11.58±0.86 12.46±1.15 13.59±1.13 16.15±1.39应激后 2.01±0.11 1.77±0.12 1.66±0.21 1.72±0.23 Sum 应激前 11.46±0.81 12.17±1.19 13.69±1.14 14.50±1.37应激后 2.01±0.09 1.44±0.21 1.85±0.20 2.15±0.38

2.5 抑郁后睡眠剥夺大鼠中枢海马组织形态学观察结果 蒙医温针治疗组中枢海马病理切片显示（×100）：海马区神经元呈梭形紧密排列，细胞轮廓仍较清晰（见图2A），生理盐水组中枢海马病理切片（×100）显示：神经元数目减少，排列紊乱，细胞轮廓模糊，出现大量空泡，锥体细胞形态不规则，细胞间隙增大（见图2B）。

图2 抑郁大鼠中枢海马组织形态学观察结果（HE 染色，×100）

3 讨论

应激状态下中枢神经GLU 含量降低被视为机体自身的保护机制[20]。谷氨酸对细胞的毒性作用是随着浓度增加而增加的，同时其与人体的焦虑和抑郁的发生存在一定相关性[21]，有学者研究证实神经突触间隙外谷氨酸的毒性作用可造成中枢神经元损伤，是导致动物个体出现精神障碍的重要原因[22]。而焦虑、抑郁的产生，在基底前脑、脑干、腹膜下侧的前额叶区以及丘脑区域，都存在中枢神经递质的表达，这导致了症状的加重[23]。通过本实验发现，蒙医温针干预后，SD大鼠中枢神经递质GABA 含量显著升高，GLU 含量降低（与生理盐水组对照）；纠正中枢神经兴奋性/抑制性神经递质比值，减轻GLU 的兴奋性毒性作用引起的神经细胞损害；这可能是蒙医温针改善患者焦虑、抑郁状态的神经内分泌机制之一。

现有研究提示SD 的应激将导致机体出现显著的神经-内分泌方面的病理生理改变，其中最重要的改变在于下丘脑-垂体-肾上腺轴的变化[24]。研究提示实验大鼠慢性应激后，长时间均处于显著的疲劳状态，且刺激下丘脑-垂体-肾上腺轴分泌大量的皮质醇类激素，故应激障碍者其出现紧张焦虑的比例显著增高。而被激活的下丘脑-垂体-肾上腺轴，同时还将促使生长激素释放激素与促肾上腺皮质激素释放激素大量分泌，进一步影响机体的焦虑和抑郁状态，干扰正常的情绪状态，导致抑郁的加重。

本次实验对给予大鼠进行72 h 连续睡眠剥夺慢性不可预知性应激刺激，大鼠引起的主要病理生理的变化是出现应激反应，能量消耗过多导致机体营养不良而衰竭死亡。本试验在造模24 小时后，2 组大鼠的体质量和皮质醇含量呈现出差异，说明治疗组对应激条件下动物的机能调节具有正面意义。另一方面从血清皮质醇升高的程度，亦表明蒙医温针对应激反应有良好的缓和作用，降低应激大鼠的焦虑、紧张情绪，从而调整其异常升高的基础代谢率。目前临床多见抑郁症，伴随焦虑、抑郁、失眠等精神障碍的患者，蒙医温针从整体机能状态的调节入手，能阻断HPA 兴奋，下调HPA 轴兴奋水平，恢复神经内分泌系统平衡，这也是蒙医温针通过多路径达到治疗抑郁症的目的。