结直肠癌组织中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达及其临床意义

祁晓星 徐丹丹 卞建强

结直肠癌较为常见,早期无明显症状,病情不断进展下可逐渐诱发便血、大便性状改变、腹痛等,若不及时治疗,则会对患者生命造成威胁[1-2]。手术是临床治疗结直肠癌重要手段,通过切除病灶后能够延长患者生存时间,获得较高生存率[3-4]。但长期随访发现,仍有部分结直肠癌患者术后存在复发转移风险,若能于早期构建以肿瘤生物标志物为基础的预后预测模型,则有助于改善预后。高迁移率族蛋白B2(HMGB2)是一种核内结构蛋白,在DNA重组修复过程中具有重要作用,与肿瘤侵袭、增殖等相关[5]。黑色素瘤相关抗原-A9(MAGE-A9)则为黑色素瘤抗原家族成员,在多种恶性肿瘤组织内均存在不同程度表达。DNA错配修复基因(MMR)为人体修复DNA基碱错配的安全保障系统,当其缺乏后则无法保证DNA复制的准确性,易出现癌基因突变等[6]。鉴于此,本研究分析结直肠癌中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达情况及其在预后评估中的临床价值。报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月至2020年1月我院收治的52例结直肠癌患者作为研究对象,其中男性34例,女性18例;年龄38～72岁,平均年龄(54.19±5.13)岁;体质量指数19～28 kg/m2,平均体质量指数(23.63±2.15)kg/m2;肿瘤位置:28例结肠,24例直肠。纳入标准:经病理活检或手术确诊为结直肠癌;均行手术治疗;精神状态正常;临床资料完整;患者及家属签署知情同意书。排除标准:存有肝肾衰竭或凝血功能障碍;合并其他恶性肿瘤;中途随访失联;术前接受化疗;存在急慢性感染。

1.2 方法

所有患者均行手术治疗,术中切除肿瘤组织标本,并距离肿瘤组织5 cm以上部位切除癌旁正常组织标本,术后均及时送检。免疫组织化学法:取石蜡组织进行脱蜡、水化等处理,之后加入3% H2O2后在37摄氏度环境下湿盒孵育30 min,经高压锅抗原修复,封闭液孵育1 h;再滴加HMGB2、MAGE-A9一抗工作液,抗体4摄氏度孵育过夜;滴加二抗工作液,室温下孵育0.5 h,经DAB显色,再进行苏木精复染、脱水、固定等操作,最后经荧光倒置显微镜观察染色结果。结果判定:阳性细胞比例≤5%为0分,>5%且<25%为1分,≥25%且<50%为2分,≥50%且<75%为3分,≥75%为4分;无色为0分,淡黄色为1分,棕黄色2分,棕褐色为3分;两者乘积>4分为阳性表达,反之为阴性表达。MMR:通过免疫组织化法检测组织内hMLH1、hMSH2、hMSH6蛋白表达,标本均经3.7%甲醛液固定、脱水及石蜡包埋,连续切片,之后进行常规免疫组织化学法染色,以PBS代替一抗为阴性对照。结果判断:当MMR蛋白位于细胞核,以细胞核存在黄褐色或棕黄色颗粒为阳性细胞,并随机选取5个高倍镜下视野,观察阳性细胞占比,将无阳性细胞为0分,≤10%为1分,>10%且≤50%为2分,>50%且≤75为3分,>75%则为4分;着色程度为无色为0分,淡黄色为1分,棕黄色2分,棕褐色为3分;两项乘积>3分则为MMR表达正常,反之为缺失。hMLH1、hMSH2、hMSH6均正常表达为MMR阴性表达,至少一项表达缺失者为阳性表达。随访:所有患者均开展3年随访,随访内容包括存活情况,随访方式为电话随访或门诊复查。

1.3 观察指标

(1)比较肿瘤组织与癌旁组织中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达差异。(2)分析比较HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达与年龄、性别、肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移等病理特征间的关系。(3)比较HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白不同表达患者生存率。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达情况

肿瘤组织内HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 组织标本中HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达情况对比(例,%)

2.2 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达与病理特征间关系

肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴结转移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达率高于Ⅰ期、Ⅱ期、中、高分化、无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 HMGB2蛋白表达与病理特征的关系(例,%)

2.3 HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白表达与预后关系

随访3年,52例患者存活率为71.15%(37/52)。HMGB2阳性组存活率[61.76%(21/34)]低于HMGB2阴性组[88.89%(16/18)],差异有统计学意义(χ2=4.219,P=0.040);MAGE-A9阳性组存活率[58.62%(17/29)]低于MAGE-A9阴性组[86.96%(20/23)],差异有统计学意义(χ2=5.018,P=0.025);MMR阳性组存活率[52.00%(13/25)]低于MMR阴性组[88.89%(24/27)],差异有统计学意义(χ2=8.606,P=0.003)。

3 讨论

结直肠癌发病与遗传、饮食、消化道疾病关系密切,多种因素长期影响,可促使肠道黏膜细胞发生癌性变化[7-8]。以手术为主的综合治疗方案是治疗结直肠癌的重要手段,但仍有患者预后欠佳,还需进一步深入研究肿瘤相关分子机制,以便于寻找结直肠癌分子靶点,并将其用于疾病的诊断和治疗,从而更好地改善患者预后[9-10]。

HMGB2属于细胞周期调控蛋白,可参与G2/M期及G1/S期细胞周期转化,与肿瘤增殖、侵袭及转移关系密切。相关研究显示[11-12],HMGB2在结直肠癌中会受到长链非编码RNA调控,HMGB2表达水平较高,则会加快肿瘤细胞上皮-间质转化,促使肿瘤进展。MAGE在肿瘤的发生及发展中具有重要作用,而MAGE-A9则为MAGE家族成员,为肿瘤特异性抗原,在多种恶性肿瘤中均存在高表达,能够增强肿瘤侵袭能力,加速肿瘤生长[13]。MMR共包括hMLH1、hMLH3、hMSH2、hMSH6、hPMS1等9种,其中hMLH1、hMSH2、hMSH6突变在MMR突变中占比较高,可判断MMR情况。MMR在人体中主要功能在于识别、纠正错配位点,确保DNA复制准确性,一旦MMR出现突变,则会丧失错误配对修复功能,引起基因组不稳定,导致部分癌基因或突变的抑癌基因迅速聚集,促使肿瘤过度增殖[14-15]。本研究结果显示,肿瘤组织内HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性表达高于癌旁组织;肿瘤分期Ⅲ期、分化程度低分化、淋巴结转移患者HMGB2、MAGE-A9、MMR阳性例数高于Ⅰ期、Ⅱ期、中、高分化、无淋巴结转移患者;HMGB2阳性组存活率低于HMGB2阴性组,MAGE-A9阳性组存活率低于MAGE-A9阴性组,MMR阳性组存活率低于MMR阴性组。提示HMGB2、MAGE-A9、MMR在结直肠癌中存在异常表达,肿瘤分期高、存在淋巴结转移及低分化程度患者异常表达更为明显,且与预后关系密切。其原因为HMGB2、MAGE-A9、MMR异常表达均与肿瘤的发生、发展及转移密切相关,可通过多种途径加速肿瘤的生长,增强肿瘤侵袭转移能力,促使肿瘤进展更为迅速,临床分期普遍偏高,且易合并淋巴结转移等。而肿瘤分期、淋巴结转移又是影响患者预后的重要危险因素,故HMGB2、MAGE-A9、MMR异常表达患者在预后普遍较差。

综上所述,HMGB2、MAGE-A9、MMR蛋白在结直肠癌中存在不同程度异常表达,且肿瘤分期高、低分化程度及有淋巴结转移患者的表达异常更为明显,且异常表达越明显则预后越差。