肝癌组织中GPSM2、TGF-β1蛋白表达水平及临床意义

霍 亮 骆 杨 冯海林

肝癌是指发生在肝脏中的恶性肿瘤,其发病率一直居于高位,早期症状常被人忽视,其典型症状往往只发生在疾病进展到中晚期,所以许多肝癌患者预后生存较差[1]。尽管在肝癌的检测和治疗方面已经有了一些突破性的进展,但其死亡率仍较高。因此,寻找有效的指标评估患者病情,并及时采取有效措施控制预后具有重要意义。G蛋白信号调节蛋白(G-protein signaling modulator,GPSM)2协助鸟嘌呤核苷酸的交换,并允许细胞外信号通过细胞表面传递给细胞,最终在G蛋白的激活中发挥关键作用[2];研究表明[3-4],GPSM2可促进胰腺癌癌细胞的迁移,靶向GPSM2及其下游基因可延长胰腺癌患者的生存时间。转化生长因子1(transforming growth factor 1,TGF-β1)是一种具有多种功能的蛋白多肽,在细胞的生长、分化、免疫调节、炎症和损伤修复等方面发挥重要的作用;既往研究表明,在老年宫颈癌组织中,TGF-β1蛋白呈高表达,并可能与肿瘤病情的发生发展密切相关[5]。但国内关于肝癌组织中GPSM2、TGF-β1蛋白表达的相关报道尚处于初步阶段,基于此,本研究将GPSM2、TGF-β1蛋白表达作为研究指标,探讨其与肝癌患者临床病理参数及预后的关系,旨在为肝癌的早期诊断及预后改善提供更多循证数据支持。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取本院2018年1月至2022年1月行肝癌根治术的80例原发性肝癌患者为研究对象,术中收集患者的肝癌组织和癌旁正常组织(距离肿瘤边缘5 cm以上,且无肿瘤浸润)。纳入标准:①符合《原发性肝癌规范化病理诊断指南(2015年版)》的标准[6],经病理及组织学检查确诊为原发性肝癌;②年龄18～80周岁;③术前未进行任何抗肿瘤治疗。排除标准:①存在严重的心、脑、肝、肾功能障碍;②存在严重血液系统相关疾病;③存在其他恶性肿瘤;④存在肝移植手术史。入组的80例PLC患者中男性62例,女性18例;年龄26～78岁,平均(52.13±13.07)岁。

1.2 方法

GPSM2、TGF-β1蛋白表达均采用免疫组化法检测,所有操作严格按照试剂盒(上海雅吉生物科技有限公司)说明书进行:石蜡组织切片,常规脱蜡至水;蒸馏水冲洗,PBS缓冲液浸泡5 min;3%双氧水去离子水孵育15～20 min,以消除内源性过氧化物酶活性;滴加山羊血清工作液室温孵育15～20 min,倾去,滴加适当比例稀释的一抗GPSM2、TGF-β1抗体,37 ℃孵育2～3 h;PBS缓冲液冲洗3次,每次3 min;DAB显色剂显色,蒸馏水充分冲洗,复染,脱水,透明,封片。结果判读:随机选取10个高倍镜(×400)视野,观察阳性细胞数,取平均值,以阳性细胞百分比进行评分,依次为0分(<5%)、1分(5%～25%)、2分(25%～50%)、3分(50%～75%)、4分(>75%);按染色强度评分:颜色从浅到深依次为0分(未着色),1分(浅黄色),2分(棕黄色),3分(棕褐色)。两类评分的乘积为免疫组织化学染色评分,将患者分为 GPSM2、TGF-β1低表达(<5分)和高表达(≥5分)[7]。

1.3 随访

自术后起开始每3个月对所有入组患者以电话或门诊的形式进行随访,截止时间为2022年6月,随访至终止时间或患者死亡,所有入组患者随访时间1～54个月。

1.4 观察指标

根据本研究目的,设立医院专职人员收集患者年龄、性别、肿瘤直径、病灶数量、肿瘤分化程度、乙型肝炎史、肝硬化史、肝功能Child-pugh分级、淋巴转移、神经转移、血管转移等资料,并比较所有入组患者肝癌组织和癌旁组织中GPSM2、TGF-β1的表达情况,分析GPSM2、TGF-β1表达与临床病理参数以及预后的关系。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 癌组织与癌旁正常组织中GPSM2、TGF-β1表达比较

肝癌组织中GPSM2、TGF-β1高表达率分别为71.25%(57/80)、82.50%(66/80),高于癌旁正常组织的18.75%(15/80)、13.75%(11/80),差异有统计学意义(χ2=44.545、75.731,P均<0.001)。

2.2 癌组织中GPSM2、TGF-β1表达水平与临床病理参数的关系

分化程度低的肝癌患者癌组织中GPSM2、TGF-β1高表达率较高,血管转移的肝癌患者癌组织中TGF-β1高表达率较高,差异有统计学意义(P<0.05),而在不同年龄、性别、肿瘤直径、病灶数量、乙型肝炎史、肝硬化史、肝功能Child-pugh分级、淋巴转移、神经转移的肝癌患者癌组织中GPSM2、TGF-β1高表达率无明显统计学差异(P>0.05),同时在不同血管转移的肝癌患者癌组织中GPSM2高表达率无明显统计学差异(P>0.05)。见表1。

表1 癌组织中GPSM2、TGF-β1表达水平与临床病理参数的关系(例,%)

2.3 不同GPSM2、TGF-β1表达水平于患者预后关系

对80例肝癌患者进行术后随访,随访期间死亡患者36例,存活患者44例,累积生存率为55.00%。GPSM2、TGF-β1低表达患者累积生存率分别为77.27%(17/23)、85.71%(12/14),高于GPSM2、TGF-β1高表达患者的47.37%(27/57)、48.48%(32/66),差异有统计学意义(P=0.041、0.022)。见图1。

图1 不同GPSM2、TGF-β1表达肝癌患者生存曲线图

3 讨论

全球原发性肝癌发病率呈增长趋势,在恶性肿瘤死亡风险排名中居第三位,同时其占肝癌的80%,严重威胁人类的健康和生命[8]。随着我国医疗技术与设备的飞速发展,肝癌的外科手术已取得较快的进步,肝癌病死率有所下降,但术后死亡的风险仍较高[9]。原发性肝癌的病因和发病机制尚未完全明确,根据相关调查研究发现,与饮酒、病毒性肝炎、食物及饮水、毒物及寄生虫、遗传因素等有关[10]。近年来发现许多与肝癌临床特征及预后有关的蛋白分子,然而尚未有统一明确的蛋白分子能够成为肝癌的治疗靶点,因此继续寻找与疾病相关的蛋白分子具有重要临床意义。

GPSM2参与多种疾病的病理过程,既往研究[11]报道,GPSM2可抑制口腔鳞状细胞癌细胞的侵袭、增殖能力。本研究中,肝癌组织中GPSM2高表达率高于癌旁正常组织,提示临床可结合患者癌组织GPSM2表达进行肝癌诊断。国外研究[12]报道,GPSM2加速细胞生长,细胞周期,迁移和侵袭,并抑制细胞凋亡,在肝细胞癌中发挥癌基因的作用。GPSM2抑制G蛋白信号通路,与癌细胞的发生发展、侵袭转移等诸多恶性生物学行为密切相关[13]。另有研究[14]报道,下调GPSM2的表达可促进肺腺癌细胞的体内外增殖。基于以上报道,可见GPSM2与肿瘤的发生、发展有一定的关联,但可能不同的癌组织中有不同的表达情况,需分析不同临床病理参数癌症患者的GPSM2表达情况。张继方等[15]研究发现,GPSM2高表达与浆液性卵巢癌发生、化疗耐药和FIGO高分期显著相关,上调 GPSM2 的表达能增加细胞的迁移和侵袭能力。此外,GPSM2是一个缺氧反应基因,其可能通过增强己糖激酶-2(HK2)表达促进肝癌细胞增殖和糖酵解[16]。本研究在分化程度低的肝癌组织中,GPSM2的高表达率更高,提示GPSM2参与了肝癌的发生和发展,有望成为肝癌早期诊断的监测指标。Kaplan-Meier生存分析显示,GPSM2低表达患者的中位生存期较长,提示下调GPSM2表达可以延长肝癌患者的术后生存时间。

TGF-β1参与多种恶性肿瘤的病情发生、发展过程,既往研究[17]报道,结直肠癌组织中TGF-β1表达水平上调导致肿瘤细胞免疫逃逸,可能是结直肠肿瘤复发转移的主要机制之一。本研究中,肝癌组织中TGF-β1高表达率高于癌旁正常组织,结合上述报道,提示临床可结合患者癌组织TGF-β1表达进行肝癌诊断。国外研究[18]报道,TGF-β1促进胃成纤维细胞向肿瘤相关成纤维细胞的转化,加速肿瘤细胞迁移和转移。另有研究[19]报道,下调TGF-β1抑制乳腺癌细胞MCF-7细胞迁移、侵袭能力。基于以上报道,可见TGF-β1与肿瘤的发生、发展有一定的关联,但可能不同的癌组织中有不同的表达情况,需分析不同临床病理参数癌症患者的TGF-β1表达情况。黄胜蓝等[20]研究发现,TGF-β1高表达与子宫内膜癌患者肿瘤分化程度显著相关。此外,TGF-β1可能通过上调血管内皮生长因子的表达间接刺激血管生成而促进子宫颈鳞状细胞癌的进展[21]。本研究中,在分化程度低、有血管转移的肝癌组织中,TGF-β1的高表达率更高,提示TGF-β1参与了肝癌的发生和发展,有望成为肝癌早期诊断的监测指标。Kaplan-Meier生存分析显示,TGF-β1低表达患者的中位生存期较长,提示下调TGF-β1表达可以延长肝癌患者的术后生存时间。

综上所述,肝癌组织中GPSM2、TGF-β1呈现高表达,且其表达水平与肿瘤分化程度或血管转移有关;同时,GPSM2、TGF-β1低表达的肝癌患者生存率更高。GPSM2、TGF-β1可以作为诊断肝癌病情进展及预测患者预后的辅助指标,采用相应的分子靶向治疗可能有助于提高肝癌患者的术后生存率。但GPSM2、TGF-β1在肝癌中的具体的作用机制尚不清楚,还需要进一步采用体外细胞试验或动物试验探索GPSM2、TGF-β1参与肝癌预后的作用机制及作为肝癌治疗靶点新方向的可能性。